СПОСОБ РЕАБИЛИТАЦИИ РЫБ ПОСЛЕ ХИРУРГИЧЕСКОГО ВМЕШАТЕЛЬСТВА Российский патент 2008 года по МПК A61K38/20 A01K61/00 

Изобретение относится к промышленному рыбоводству, например, к воспроизводству и/или товарному выращиванию рыб осетровых видов и их гибридов, и предназначено для реабилитации рыб после хирургического вмешательства.

Актуальность изобретения обусловлена значительным распространением в рыбоводной практике хирургических вмешательств, например, прижизненного получения половых продуктов и/или прижизненного определения пола у производителей и особей ремонтных групп рыб осетровых видов и их гибридов.

Общеизвестен эффект использования химиопрепаратов для снижения риска инфицирования и ускорения заживления раневой поверхности шва, например, широкое внедрение в рыбоводство антибактериальных средств природного, полусинтетического и синтетического происхождения как с лечебной, так и с профилактической целью. Однако регулярное использование антибиотиков вызывает определенные негативные последствия: изменение микробоценоза рыбы и воды, появление резистентных форм бактерий, а также остаточное содержание химических веществ в рыбоводной продукции.

Известно применение иммуномодулятора Ронколейкин^® в ветеринарии в качестве иммунокорректора (Наставление по применению иммуномодулятора Ронколейкин^® разработано ООО БИОТЕХ, г.Санкт-Петербург). Ронколейкин^® применяют для животных в качестве иммунокорректора при различных инфекциях, гнойно-воспалительных, кожных, онкологических заболеваниях, постоперационных осложнениях и их профилактики, заболеваниях глаз и дыхательных путей, в качестве адъюванта вакцин. Однако способы и порядок его применения для холоднокровных животных, к которым относятся рыбы, отсутствуют.

Цель изобретения - экологически чистый способ реабилитации рыб после хирургического вмешательства, обеспечивающий устойчивый эффект.

Техническим результатом изобретения является применение иммуномодулятора для реабилитации рыб осетровых видов и их гибридов после хирургических вмешательств, используемых в рыбоводной практике.

Технический результат достигается тем, что применение иммуномодулятора проводится путем инъекций лекарственной формы рекомбинантного интерлекина-2 человека (в дальнейшем рИЛ-2) согласно изобретению, что обуславливает активную регенерацию тканей рыб, а также пролиферацию лимфоцитов и восстановление характерного для осетровых рыб лимфоцитарного профиля.

Экспериментальные работы с осетровыми рыбами разных возрастных групп проводились в период 2005-2006 гг. на производственной базе ФГУП «НПЦ «БИОС» (с.Икряное, Астраханской обл.).

Изучали действие рИЛ-2 на организм осетровых рыб: средний ремонт гибрида (2-годовики) - белуга × стерлядь (в дальнейшем бестер) после прижизненной диагностики пола операционным способом (лапаротомия), производители стерляди после прижизненного получения икры путем подрезания яйцеводов.

Способ реабилитации осуществляют следующим образом.

Инъекции рИЛ-2 проводят внутривенно (в хвостовую вену) - из расчета 2 тыс.ед. на 1 кг массы тела рыбы, однократно, в течение 3-4 мин, непосредственно перед или после операции; подкожно - из расчета 5 тыс.ед. на 1 кг массы тела рыбы, двукратно с интервалом 24 часа, непосредственно после операции.

Перед введением каждую расчетную дозу рИЛ-2 разводят 1,0-3,5 мл 0,65% стерильного физиологического раствора или воды для инъекций.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения.

В описанные выше технические решения могут быть внесены различные модификации, не выходящие за рамки сферы изобретения. Для более полной иллюстрации изобретения и подтверждения представлены примеры его реализации.

Пример 1. Инъекции рИЛ-2 2-х годовикам бестера после хирургического вмешательства при прижизненном определении пола методом лапаротомии.

Экспериментальные работы проводили с 26.04.05 по 22.06.05 г. на производственной базе ФГУП «НПЦ «БИОС» (с. Икряное, Астраханской обл.).

Для постановки эксперимента использовались 4 группы рыб.

В группе «опыт 1» рыбам вводили рИЛ-2 в дозе 1 тыс.ед./кг массы тела; в группе «опыт 2» - 2 тыс.ед./кг.

Препарат вводили однократно внутривенно в хвостовую вену, медленно в течение 3-4 мин непосредственно перед операцией. Перед введением каждую расчетную дозу препарата разводили 2,5-3,5 мл 0,65% стерильного физиологического раствора или воды для инъекций.

В группе «контроль 1» после операции однократно внутремышечно вводили окситетрациклин пролонгированного действия, используемый в ветеринарии, в дозе 0,1 мл/кг массы тела.

Группа «контроль 2» была сформирована для оценки условий содержания и особи из этой группы не подвергались оперативному вмешательству.

Все особи имели индивидуальные метки. Мечение осуществлялось путем удаления латеральных жучек и пробиванием плавников. В течение всего периода эксперимента все рыбы находились под регулярным ихтипатологическим наблюдением. Рацион рыб, а также условия их содержания не имели различий между контролем и опытом.

Перед введением препарата и оперативным вмешательством у всех особей определяли размерно-весовые показатели и проводили клинический осмотр по общепринятым в ихтиопатологии методикам. Взятие крови от рыб четырех групп осуществляли до введения рИЛ-2 и, соответственно, операции и через 15, 30, 45 суток после операции. Результаты применения инъекций рИЛ-2 для реабилитации рыб после хирургического вмешательства, а именно прижизненного определения пола методом лапаротомии, приведены в таблицах 1, 2, 3.

Таблица 1
Клиническая картина операционных швовДоза и наименование препаратаСостояние шва в баллахВсего рыб, экз.Сутки153045рИЛ-2 1 тыс.ед./кг (опыт 1)-10-48+-32++32-+++71-рИЛ-2 2 тыс.ед./кг(опыт 2)-10-58+-32++42-+++6--Окситетрациклин 0,1 мл/кг (контроль 1)-11-25+216++55-+++43-Примечание: (-) рубцевание разреза, снятие швов; (+) гиперемия тканей, отечность; (++) гиперемия тканей, отечность, выделение сукровицы; (+++) гиперемия тканей, отечность, выделение сукровицы, некроз тканей.

Из данных табл.1 следует, что применение иммуномодулятора путем инъекций рИЛ-2, разведенного в 2,5-3,5 мл 0,65% стерильного физиологического раствора или воды для инъекций из расчета 2 тыс.ед./кг массы тела и введенного однократно внутривенно в хвостовую вену, медленно в течение 3-4 мин, непосредственно перед операцией обуславливает активную регенерацию тканей рыб в постоперационный период.

Таким образом, клиническая картина операционных швов у бестеров, подвергнутых лапаротомии, подтверждает терапевтический эффект рИЛ-2 в дозе 2 тыс.ед./кг массы тела.

В таблице 2 представлены показатели лизосомально-катионного теста (ЛКТ) у бестеров в условиях эксперимента, которые указывают на восстановление фагоцитарной функции нейтрофильных гранулоцитов при использовании рИЛ-2 в дозе 2 тыс.ед./кг массы тела.

Таблица 2
Показатели лизосомально-катионного теста (ЛКТ) у бестера, у.е.Вариантсутки0153045рИЛ-2 1 тыс.ед./кг (опыт 1)1,19±0,090,60±0,070,64±0,140,54±0,05рИЛ-2 2 тыс.ед./кг(опыт 2)1,31±0,070,58±0,060,50±0,050,70±0,06*Окситетрациклин 0,1 мл/кг (контроль 1)1,24±0,120,44±0,050,49±0,080,51±0,06Контроль 20,99±0,061,05±0,090,84±0,090,94±0,03Примечание: * достоверность различий по Стьюденту (р<0,05)

В таблице 3 приведены показатели клеток белой крови бестеров в условиях эксперимента, которые указывают на активную пролиферацию лимфоцитов и восстановление характерного для осетровых рыб лимфоцитарного профиля.

Таблица 3
Лейкограмма бестеров, %ВариантСуткиЛимфоцитыМоноцитыЭозинофилыСегментоядерные нейтрофилыПалочкоядерные нейтрофилы1234567рИЛ-2 1 тыс.ед./кг (опыт 1)061,35±1,412,28±0,3410,08±0,547,71±0,3917,21±1,0165,20±1,842,00±0,418,85±0,708,90±1,0415,05±1,7664,70±2,192,90±0,5110,50±1,366,20±1,0715,70±1,89рИЛ-2 2 тыс.ед./кг (опыт 2)63,36±1,502,18±0,409,32±1,186,73±0,7718,41±2,17Контроль 2Окситетрациклин 0,1 мл/кг (контроль 1)рИЛ-2 1 тыс.ед./кг1540,80±3,834,85±0,405,00±0,7910,55±1,6238,80±2,9146,95±4,073,40±0,465,25±0,9010,85±1,9933,55±3,10рИЛ-2 2 тыс.ед./кг62,70±2,192,50±0,229,90±1,685,80±0,9319,1±2,5840,64±3,513,36±0,3314,00±3,058,77±1,4133,23±5,00Контроль 2Окситетрациклин 0,1 мл/кгрИЛ-2 1 тыс.ед./кг3058,60±2,812,50±0,547,65±1,917,65±1,7723,60±1,9857,75±4,353,10±0,716,75±1,098,35±2,1124,05±3,18рИЛ-2 2 тыс.ед./кг66,90±2,022,00±0,4210,70±2,086,30±1,4014,10±0,8749,23±4,934,45±0,3510,68±2,359,55±1,3126,09±2,60Контроль 2Окситетрациклин 0,1 мл/кгрИЛ-2 1 тыс.ед./кг4564,30±1,642,90±0,299,90±1,448,00±1,7414,90±1,3765,35±1,343,50±0,409,70±1,078,40±03913,05±1,1264,40±2,452,50±0,507,20±2,227,10±1,9718,80±1,59рИЛ-2 2 тыс.ед./кг57,27±2,262,27±0,3310,27±0,795,68±0,9524,50±2,36Контроль 2Окситетрациклин 0,1 мл/кг

В начале эксперимента лейкограммы рыб находились в пределах физиологических норм и были относительно идентичны, так как достоверных различий не выявлено.

На пятнадцатые сутки наблюдается достоверное (р<0,05) перераспределение лимфоцитарного профиля в сторону нейтрофилии. На этом этапе выявляется преимущество применения иммуномодулятора по сравнению с антибиотиком. Если у рыб инъецированных рИЛ-2 наблюдается снижение доли эозинофилов, относительно первоначальных показателей, то у рыб инъецированных окситетрациклином (контроль 1), количество эозинофилов достоверно (р<0,05) превысило типичные показатели в 1,5 раза, что говорит об интоксикации организма, вызванной окситетрациклином (графа 5, табл.3).

На тридцатые сутки в лейкоцитарной формуле обнаружены процессы восстановления лимфоцитарного профиля. При этом выявлены достоверные различия (р<0,05) по количеству лимфоцитов у рыб из опытных вариантов и 1-й контрольной группой.

К сорок пятым суткам отмечен относительный баланс клеток белой крови опытных рыб, тогда как у рыб из 1-й контрольной группы, еще было достоверное (р<0,05) превышение количества палочкоядерных нетрофилов (графа 7, табл.3). Это свидетельствует о том, что в организме опытных рыб воспалительный процесс начался и закончился раньше по сравнению с оперированным контролем.

Следовательно, анализ лейкоцитарной формулы крови особей бестера подтверждает более раннее развитие воспалительной реакции на оперативное вмешательство и восстановление лимфоцитарного профиля у рыб опытных групп, инъецированных рИЛ-2.

Кроме того, при анализе среднесуточного темпа роста рыб особей инъецированных рИЛ-2 в дозе 2 тыс.ед./кг выявлены значения на 21,4% выше по сравнению с рыбами контрольной группы.

Пример 2. Инъекции рИЛ-2 зрелым самкам стерляди после подрезания им яйцевода при прижизненном получении половых продуктов (икры).

Прижизненное получение икры осуществляется при помощи хирургического вмешательства, наиболее часто используемым из которых является подрезание яйцеводов. В обычной рыбоводной практике постоперационное воспаление в области яйцеводов и анального отверстия лечится внутримышечными инъекциями антибиотиков.

Экспериментальные работы проводили с 10.05.06 по 13.06.06 г. на производственной базе ФГУП «НПЦ «БИОС» (с.Икряное, Астраханской обл.). В эксперименте было задействовано 31 экз. стерляди. Все рыбы имели индивидуальные метки. Мечение осуществлялось цветными проволочными метками, которые закреплялись на первом костном луче грудных плавников, и пробиванием плавников.

Для постановки эксперимента использовались 3 группы рыб (производители стерляди), средняя масса которых составляла 1,47 кг. Для стимуляции одновременного созревания икры всем особям была сделана двукратная инъекция синтетического гормонального препарата (Сурфагон), применяемого в рыбоводной практике. В течение всего периода эксперимента рыбы трех групп находились под регулярным ихтиопатологическим наблюдением. Кормовой рацион рыб, а также условия их содержания не имели различий между контролем и опытом.

Перед оперативным вмешательством у стерляди рыб определяли размерно-весовые показатели и провели клинический осмотр. Взятие крови от рыб трех групп осуществляли за 10 дней до оперативного вмешательства, непосредственно после получения половых продуктов и через 7, 14 суток.

Особям стерляди группы "контроль " после операции не вводили каких-либо препаратов. В группе "опыт 1" рыбам после проведения операции (подрезание яйцеводов) вводили рИР-2 в дозе 5 тыс.ед./кг массы тела; группе "опыт 2" - 3 тыс.ед./кг.

Инъекции рИР-2 осуществляли подкожно, двукратно с интервалом 24 часа, непосредственно после операции и процедуры отбора крови из хвостовой вены.

Перед введением каждую расчетную дозу рИЛ-2 разводили в 1,0-1,5 мл 0,65% физиологического раствора.

В таблице 4 представлены показатели лизосомально-катионного теста (ЛКТ) у самок стерляди в условиях эксперимента.

Таблица 4
Показатели лизосомально-катионного теста (ЛКТ) у стерляди, у.еВариантсутки-100714контроль0,73±0,0400,64±0,0830,50±0,0500,51±0,076рИЛ-2 5 тыс.ед. × 20,65±0,0430,67±0,0520,77±0,067*0,75±0,056*рИЛ-2 3 тыс.ед × 20,68±0,0930,70±0,0910,54±0,0700,52±0,077Примечание: * достоверность различий по Стьюденту (р<0,05)

Выявлена достоверность различий между показателями СЦК ЛКТ на 7 и 14 сутки после введения рИЛ-2 в дозе 5 тыс.ед./кг и других групп.

При рассмотрении лейкоцитарной формулы производителей стерляди выявлен характер протекания воспалительных процессов и восстановление лимфоцитарного профиля, аналогичный описанному в примере 1.

Кроме того, данные ихтиопатологического обследования свидетельствуют, что на 7, 14 сутки у группы 2 (доза 5 тыс.ед./кг) физиологическое состояние было лучше в сравнении с группой 1 (доза 3 тыс.ед./кг) и контролем, в которых за этот период наблюдалась гибель рыбы.

Таким образом, способ позволяет улучшить послеоперационную реабилитацию, осуществить ее в более короткий срок, исключить токсичное воздействие лечебных препаратов, расширить арсенал средств, обеспечивающих получение экологически чистой рыбоводной продукции, способствует сохранению рыб маточного стада и повышению эффективности воспроизводства таких ценных рыб, как осетровые.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает инъекции иммуномодулятора рИЛ-2 в дозе 2 тыс.ед./кг массы тела рыбы, который разводят в 2,5-3,5 мл 0,65% стерильного физиологического раствора или воды для инъекций. Инъекции осуществляют однократно внутривенно в течение 3-4 минут в хвостовую вену непосредственно перед операцией. Или инъекции осуществляют в дозе 5 тыс.ед./кг массы тела рыбы двукратно подкожно непосредственно после операции с интервалом 24 часа. При этом иммуномодулятор разводят в 1,0-1,5 мл 0,65% стерильного физиологического раствора или воды для инъекций. Способ позволяет улучшить реабилитацию, осуществить ее в более короткий срок, исключить токсичное воздействия лечебных препаратов, расширить арсенал средств, обеспечивающих получение экологически чистой рыбоводной продукции, способствует сохранению рыб маточного стада и повышению эффективности воспроизводства осетровых. 4 табл.

Способ реабилитации рыб после хирургического вмешательства, включающий инъекции иммуномодулятора рИЛ-2 в дозе 2 тыс.ед./кг массы тела рыбы, разводимого в 2,5-3,5 мл 0,65%-ного стерильного физиологического раствора или воды для инъекций, при однократном внутривенном введении в течение 3-4 мин в хвостовую вену непосредственно перед операцией или в дозе на одно инъецирование 5 тыс.ед./кг массы тела рыбы, разводимого в 1,0-1,5 мл 0,65%-ного стерильного физиологического раствора или воды для инъекций при двукратном подкожном введении непосредственно после операции с интервалом 24 ч.