СПОСОБ НОРМАЛИЗАЦИИ УРОВНЯ ИНГИБИТОРА АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА У НОВОРОЖДЕННЫХ ПОРОСЯТ С АНЕМИЕЙ Российский патент 2009 года по МПК A61K31/00 A61K31/295 

Изобретение относится к ветеринарии и биологии, а именно к гематологии.

Аналогов предлагаемого способа нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена у новорожденных поросят с анемией не существует.

В литературе имеются сведения о применении при анемии у поросят ферроглюкина (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. В.М.Данилевского. М.: «Агропромиздат», 1991 - 576 с.).

В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяются фоспренил - препарат на основе фосфатов полипренолов, получаемых из хвои, и гамавит - комплексное сбалансированное средство на основе плаценты, содержащее нуклеинат натрия, набор аминокислот, витаминов и солей (Деева А.В., Салахова З.А., Лобова Т.П. и др. Повышение сохранности и продуктивности поросят при использовании фоспренила и гамавита. // Ветеринария. - 2006. - №4 - с.13-15).

Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, фоспренила и гамавита, не применялся у новорожденных поросят с анемией с целью нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена.

Целью изобретения является повышение эффективности коррекции уровня ингибитора активатора плазминогена у новорожденных поросят с анемией.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оптимизации уровня ингибитора активатора плазминогена новорожденным поросятам с анемией назначается ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренил внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,09 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,07 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,06 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина и гамавит 0,013 мл/кг внутримышечно один раз в день, семь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.

Способ позволяет нормализовать уровень ингибитора активатора плазминогена у новорожденных поросят с анемией через 5 дней после завершения лечения, переводя его на уровень, близкий к таковому для здоровых животных. В последующем по завершении лечения согласно рекомендации заявляемого способа возможно сохранение содержания ингибитора активатора плазминогена на оптимальном уровне, что позволит у новорожденных поросят с анемией существенно снизить риск тромботических осложнений, оптимизировать микроциркуляцию, трофику тканей, увеличив привесы, оздоровив стадо и ускорив получение достаточного объема мясной продукции.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Для диагностики у новорожденных поросят с анемией нарушения уровня ингибитора активатора плазминогена проводится его оценка по следующей методике (Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемостаза. М., 1999 - с.134-135).

Принцип. Тканевой активатор плазминогена (ТПА) и урокиназа активируют плазминоген, в результате чего образуется плазмин. Эти активаторы нейтрализуются так называемыми ингибиторами активации плазминогена - ИАП (ИАП-1 и ИАП-2 или PAI-1 и PAI-2). Принцип методики определения ИАП-1 заключается в оценке его инактивирующего влияния на очищенную урокиназу в исследуемом образце плазмы. Активность остаточной урокиназы определяется по ее способности превращать плазминоген в плазмин. Последний измеряют по его способности расщеплять хромогенный субстрат при длине волны 405 нм.

Используются реактивы: 1. Урокиназа, лиофилизированная. Разводится до концентрации 5 МЕ/мл. 2. Плазминоген, лиофилизированный. Разводится до концентрации 15 СТА МЕ/мл. 3. Хромогенный субстрат: HD-Norvalyl-cyclohexylalanyl-lysyl-p-nitroanilid (HD-Nva-lys-pNA). Разводится до концентрации 0,6 ммоль/л. 4. Растворитель для субстрата. 5. Оксидант - хлорамин Т, лиофилизированный, концентрация в рабочем растворе 1,8 г/л. 6. Буфер трис-HCl (100 ммоль/л), рН 8,4. 7. Стандарт S1, лиофилизированный (0,0 Ед/мл ИАП). 8. Стандарт S2, лиофилизированный (2,5-4,0 Ед/мл ИАП). 9. Контрольная плазма поросенка, лиофилизированная (2,5-4,0 Ед/мл ИАП).

Для выполнения исследования необходима также уксусная кислота, 20% раствор (для метода оценки по двум точкам).

Применяется следующее оборудование: спектрофотометр СФ-26, СФ-46 или аналогичные. Используемая длина волны 405 нм. Требуемая ширина оптического пути кюветы - 1 см.

Материалом для исследования служит цитратная бедная тромбоцитами плазма.

Схема диагностики уровня ИАП приведена в таблице.

Таблица.Схема определения уровня ИАП у обследуемых поросят.Последовательность операцийИсследуемый образецОбразец-бланкПипеткой вносят в пластиковую (силиконированную) пробирку:1. Исследуемую плазму/стандарт0,05 мл (50 мкл)0,05 мл (50 мкл)2. Буфер трис-HCl-0,1 мл3. Раствор урокиназы0,1 мл-Перемешивают и инкубируют при температуре +37°С в течение 5 мин4. Раствор плазминогена0,2 мл0,2 мл5. Раствор оксиданта0,2 мл0,2 млПеремешивают и инкубируют при температуре +37°С в течение 5 мин6. Хромогенный субстрат0,5 мл0,5 млНемедленно смешивают и одновременно включают секундомер. Через 5 мин добавляют уксусную кислоту:1. Уксусная кислота, 20% раствор0,2 мл0,2 млПеремешивают и в течение 2 ч в пробах определяют поглощение (А) на длине волны 405 нм исследуемого образца против образца-бланка.

Результаты оценивают с использованием внутрилабораторного коэффициента пересчета (К_п), который определяют с использованием стандартов ИАП (S1 и S2):

Активность ИАП в исследуемом образце плазмы в % от нормы вычитают по формуле:

АКТИВНОСТЬ ИАП_{образец}=К_п·(A_s1-А_{образец}).

В норме активность ИАП в плазме крови находится в диапазоне от 0,3 до 3,5 Ед/мл. Повышение активности ИАП наблюдается при различных заболеваниях, в т.ч. при анемии. Высокий уровень активности ИАП сопряжен с нарушением микроциркуляции в тканях и ухудшением в них трофики, способствуя замедлению роста поросенка.

При повышении у новорожденных поросят с анемией уровня ИАП необходимо назначение им лечения согласно предложенному способу.

Для нормализации уровня ингибитора плазминогена новорожденным поросятам с анемией назначается лечение согласно предложенному способу: ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренил внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,09 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,07 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,06 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина и гамавит 0,013 мл/кг внутримышечно один раз в день, семь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.

Пример. У новорожденного поросенка №29 с анемией было выявлено нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,5 мкмоль/л, сидероциты 0,9%, при количестве гемоглобина у него 82,0 г/л, эритроцитов - 4,02·10¹²/л. При обследовании была выявлена повышенная активность ингибитора активатора плазминогена (4,0 ед./мл).

Поросенку было назначено лечение: ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренил внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,09 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,07 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,06 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина и гамавит 0,013 мл/кг внутримышечно один раз в день, семь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.

Поросенок осматривался в течение лечения. Через 5 дней после лечения анемия купировалась - сывороточное железо 20,2 мкмоль/л, сидероциты 7,7%, при количестве гемоглобина у него 121,3 г/л, эритроцитов - 4,99·10¹²/л.

Оценка активности ингибитора активатора плазминогена, показавшая нормализацию его уровня (2,2 ед./мл). В последующем наблюдение за данным поросенком не выявило каких-либо отклонений от нормы.

Использование предлагаемого способа нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена в ветеринарии поможет избежать сосудистых осложнений у новорожденных поросят с анемией, ухудшения трофики в тканях за счет неэффективной микроциркуляции, снизить падеж, увеличить и оздоровить поголовье свиней.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ заключается в том, что назначают ферроглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренил внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,09 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,07 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,06 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина. При этом дополнительно вводят гамавит 0,013 мл/кг внутримышечно один раз в день, семь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина. Способ позволяет нормализовать уровень ингибитора активатора плазминогена у новорожденных поросят с анемией. 1 табл.

Способ нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена у новорожденных поросят с анемией, включающий применение ферроглюкина по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 дней, фоспренила внутримышечно, троекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,09 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,07 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина, третий раз в дозе 0,06 мл/кг одновременно со второй инъекцией ферроглюкина и гамавита 0,013 мл/кг внутримышечно один раз в день, семь дней, начиная с первой инъекции ферроглюкина.