СПОСОБ НОРМАЛИЗАЦИИ УРОВНЯ ИНГИБИТОРА АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА ПРИ АНЕМИИ У НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ Российский патент 2010 года по МПК A61K31/00 A61K31/295 A61K35/00 

Изобретение относится к ветеринарии и биологии, а именно к гематологии.

Аналогов предлагаемого способа нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена у новорожденных телят и поросят с анемией не существует.

В литературе имеются сведения о применении при анемии у телят и поросят ферроглюкина (Внутренние незаразные болезни сельскохозяйственных животных. Под ред. В.М.Данилевского. М.: Агропромиздат, 1991. - 576 с).

В качестве эффективных стимуляторов жизнедеятельности растущего организма в современной ветеринарии применяются фоспренил -препарат на основе фосфатов полипренолов, получаемых из хвои (Деева А.В., Салахова З.А., Лобова Т.П. и др. Повышение сохранности и продуктивности поросят при использовании фоспренила и гамавита. // Ветеринария. - 2006. - № 4. - с.13-15) и крезацин (производное ароксиалкилкарбоновых кислот), являющийся эффективным стимулирующим средством для живых организмов, повышающим выживаемость животных в неблагоприятных и экстремальных условиях, стимулируя или нормализуя жизненные процессы (Байматов В.Н., Латыпов М.М. Влияние крезацина на состояние птицы. Ветеринария, 2006, №11, с.49-51).

Однако никогда ранее лечебный комплекс, состоящий из ферроглюкина, фоспренила и крезацина, не применялся у новорожденных телят и поросят с анемией с целью нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена.

Целью изобретения является повышение эффективности коррекции уровня ингибитора активатора плазминогена у новорожденных телят и поросят с анемией.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для оптимизации уровня ингибитора активатора плазминогена новорожденным телятам и поросятам с анемией назначается феррглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 суток, фоспренил внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,08 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,08 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацин 3 мг/кг, включенного в схему выпаивания на 8 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина.

Способ позволяет нормализовать уровень ингибитора активатора плазминогена у новорожденных телят и поросят с анемией через 3 суток после завершения лечения, переводя его на уровень, близкий к таковому для здоровых животных. В последующем по завершении лечения согласно рекомендаций заявляемого способа возможно сохранение содержания ингибитора активатора плазминогена на оптимальном уровне, что позволит у новорожденных телят и поросят с анемией существенно снизить риск тромботических осложнений, оптимизировать микроциркуляцию, трофику тканей, увеличив привесы, оздоровив стадо и ускорив получение достаточного объема мясной продукции. Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Для диагностики у новорожденных телят и поросят с анемией нарушения уровня ингибитора активатора плазминогена проводится его оценка по следующей методике (Баркаган З.С., Момот А.П. Основы диагностики нарушений гемостаза. М., 1999. - С.134-135).

Принцип. Тканевой активатор плазминогена (ТПА) и урокиназа активируют плазминоген, в результате чего образуется плазмин. Эти активаторы нейтрализуются так называемыми ингибиторами активации плазминогена - ИАП (ИАП-1 и ИАП-2 или PAI-1 и PAI-2). Принцип методики определения ИАП-1 заключается в оценке его инактивирующего влияния на очищенную урокиназу в исследуемом образце плазмы. Активность остаточной урокиназы определяется по ее способности превращать плазминоген в плазмин. Последний измеряют по его способности расщеплять хромогенный субстрат при длине волны 405 нм.

Используются реактивы: 1. Урокиназа, лиофилизированная. Разводится до концентрации 5 МЕ/мл. 2. Плазминоген, лиофилизированный.

Разводится до концентрации 15 СТА МЕ/мл. 3. Хромогенныи субстрат: HD-Norvalyl-cyclohexylalanyl-lysyl-p-nitroanilid (HD-Nva-lys-pNA). Разводится до концентрации 0,6 ммоль/л. 4. Растворитель для субстрата. 5. Оксидант - хлорамин Т, лиофилизированный, концентрация в рабочем растворе 1,8 г/л. 6. Буфер трис-HCl (100 ммоль/л), рН 8,4. 7. Стандарт S1, лиофилизированный (0,0 Ед/мл ИАП). 8. Стандарт S2, лиофилизированный (2,5-4,0 Ед/мл ИАП). 9. Контрольная плазма теленка или поросенка, лиофилизированная (2,5-4,0 Ед/мл ИАП).

Для выполнения исследования необходима также уксусная кислота, 20% раствор (для метода оценки по двум точкам).

Применяется следующее оборудование: спектрофотометр СФ-26, СФ-46 или аналогичные. Используемая длина волны 405 нм. Требуемая ширина оптического пути кюветы - 1 см.

Материалом для исследования служит цитратная бедная тромбоцитами плазма.

Схема диагностики уровня ИАП приведена в таблице.

Таблица. Схема определения уровня ИАП у обследуемыхтелят и поросят. Последовательность операций Исследуемый образец Образец-бланк Пипеткой вносят в пластиковую (силиконированную) пробирку: 1. Исследуемую плазму/стандарт 0,05 мл (50 мкл) 0,05 мл (50 мкл) 2. Буфер трис-HCl - 0,1 мл 3. Раствор урокиназы 0,1 мл - Перемешивают и инкубируют при температуре+37°С в течение 5 мин 4. Раствор плазминогена 0,2 мл 0,2 мл 5. Раствор оксиданта 0,2 мл 0,2 мл Перемешивают и инкубируют при температуре +37°С в течение 5 мин 6. Хромогенный субстрат 0,5 мл 0,5 мл Немедленно смешивают и одновременно включают секундомер. Через 5 мин добавляют уксусную кислоту: 1. Уксусная кислота, 20% раствор 0,2 мл 0,2 мл Перемешивают и в течение 2 ч в пробах определяют поглощение (А) на длине волны 405 нм исследуемого образца против образца-бланка.

Результаты оценивают с использованием внутрилабораторного коэффициента пересчета (K_п), который определяют с использованием стандартов ИАП (S1 и S2):

Активность ИАП в исследуемом образце плазмы в % от нормы вычитают по формуле:

АКТИВНОСТЬ ИАП _{образец}=К_п × (A_Sl - А_{образец}).

В норме активность ИАП в плазме крови находится в диапазоне от 0,3 до 3,5 Ед/мл. Повышение активности ИАП наблюдается при различных заболеваниях, в т.ч. при анемии. Высокий уровень активности ИАП сопряжен с нарушением микроциркуляции в тканях и ухудшением в них трофики, способствуя замедлению роста теленка и поросенка.

При повышении у новорожденных телят и поросят с анемией уровня ИАП необходимо назначение им лечения согласно предложенному способу: феррглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 суток, фоспренил внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,08 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,08 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацин 3 мг/кг, включенного в схему выпаивания на 8 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина.

Пример 1. У новорожденного поросенка № 32 с анемией было выявлено нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 12,2 мкмоль/л, сидероциты 0,8%, при количестве гемоглобина у него 79,0 г/л, эритроцитов - 3,90×10¹²/л. При обследовании была выявлена повышенная активность ингибитора активатора плазминогена (4,0 ед/мл).

Поросенку было назначено лечение: феррглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 суток, фоспренил внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,08 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,08 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацин 3 мг/кг, включенного в схему выпаивания на 8 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина.

Поросенок осматривался в течение лечения. Через 3 суток после лечения анемия купировалась - сывороточное железо 26,3 мкмоль/л, сидероциты 7,8%, при количестве гемоглобина у него 126,7 г/л, эритроцитов - 4,90×10¹²/л).

Оценка активности ингибитора активатора плазминогена, показавшая нормализацию его уровня (2,2 ед/мл). В последующем наблюдение заданным поросенком не выявило каких-либо отклонений от нормы.

Пример 2. У новорожденного теленка № 49 с анемией было выявлено нарушение эритропоэза и признаками снижения уровня содержания железа в его организме (сывороточное железо 11,5 мкмоль/л, сидероциты 0,9%, при количестве гемоглобина у него 82,0 г/л, эритроцитов - 3,92×10¹²/л. При обследовании была выявлена повышенная активность ингибитора активатора плазминогена (4,0 ед/мл).

Теленку было назначено лечение: феррглюкин по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двоекратно с интервалом 10 суток, фоспренил внутримышечно, двоекратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,08 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,08 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацин 3 мг/кг, включенного в схему выпаивания на 8 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина.

Теленок осматривался в течение лечения. Через 3 суток после лечения анемия купировалась - сывороточное железо 27,1 мкмоль/л, сидероциты 8,0%, при количестве гемоглобина у него 125,9 г/л, эритроцитов - 5,00×10¹²/л).

Оценка активности ингибитора активатора плазминогена, показавшая нормализацию его уровня (2,0 ед/мл). В последующем наблюдение за данным теленком не выявило каких-либо отклонений от нормы.

Использование предлагаемого способа нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена в ветеринарии поможет избежать сосудистых осложнений у новорожденных телят и поросят с анемией, ухудшения трофики в тканях за счет неэффективной микроциркуляции, снизить падеж, увеличить и оздоровить поголовье коров и свиней.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает применение ферроглюкина по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 суток, фоспренила внутримышечно, двукратно в разных шприцах в разные точки, первый раз в дозе 0,08 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,08 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацина 3 мг/кг, включенного в схему выпаивания на 8 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина. Способ позволяет избежать сосудистых осложнений у новорожденных телят и поросят с анемией, снизить падеж, оздоровить поголовье. 1 табл.

Способ нормализации уровня ингибитора активатора плазминогена при анемии у новорожденных телят и поросят с анемией, включающий применение ферроглюкина по 150 мг (2 мл) внутримышечно, двукратно с интервалом 10 суток, фоспренила внутримышечно, двукратно в разных шприцах в разные точки, первый раз 0,08 мл/кг одновременно с препаратом железа, второй раз в дозе 0,08 мл/кг через пять дней после первой инъекции ферроглюкина и крезацина 3 мг/кг, включенного в схему выпаивания на 8 суток, начиная одновременно с первой инъекцией ферроглюкина.