СПОСОБ ПОДГОТОВКИ СГУСТКА КРОВИ К ИССЛЕДОВАНИЮ Российский патент 2010 года по МПК G01N33/48 G01N1/28 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и касается разработки новых способов исследования морфологической структуры сгустка крови.

Предложенным способом исследования сгустка крови является его консервация замораживанием с последующим исследованием продольных и поперечных разрезов (1, 2). При этом в сгустке крови выявляются «клин» сгустка, стержень и оболочка сгустка, которые имеют совершенно различное гистологическое строение.

Однако этот способ имеет ряд недостатков. Замораживанием уничтожает клетки, поэтому дальнейшее гистологическое исследование клеток невозможно. Замороженные сгустки крови, удаленные из среды с низкой температурой, при помещении их в среду с плюсовой температурой начинают таять и появляющаяся при этом жидкость мешает исследованию структуры сгустка. Кроме этого, использование этого способа не позволяет в целом оценить всю структуру сгустка крови, в том числе и его гистологическое строение.

Цель изобретения

Разработать способ исследования сгустка крови путем его консервации в среде, фиксирующей все его структуры и не мешающей исследованию сгустка крови при его продольных и поперечных срезах и дающей возможность исследования его продольных и поперечных срезов без дополнительной обработки и окрашивания.

Цель достигается следующим образом. Кровь из вены человека забирается обычным способом в стандартную 5,0 или 10,0 мл стеклянную пробирку. После формирования сгустка крови его удаляют и помещают в сосуд, который заполняют 90-95-градусным этиловым спиртом, полностью покрывающим сгусток крови. В течение первого часа нахождения сгустка крови в спирте его переворачивают, чтобы он не прилип к дну сосуда. Через 18-24 часа сгусток крови вынимают и исследуют визуально путем продольных и поперечных разрезов. Кроме этого, из сгустка крови делались срезы толщиной 0,1-0,5 мм, которые исследовались под микроскопом при увеличении ×100. При этом выявлялась красная однородная масса слившихся разрушенных эритроцитов и различная видимая структура фибрина, который не растворяется и не разрушается спиртом.

Использование предложенного способа для исследования сгустка крови

Предложенным способом были исследованы сгустки крови у 50 больных с острыми инфекционными и неинфекционными заболеваниями (рожа, ОРЗ, пневмония, острый и хронический вирусный гепатиты, острые кишечные инфекции и др.) и у 20 доноров. Кровь забиралась обычным способом из вены в стандартную стеклянную пробирку, сгусток крови удалялся и помещался в этиловый спирт на 18-24 часа. Визуально изучались продольные и поперечные разрезы, а с них делались срезы толщиной 0,1-0,5 мм, которые исследовались под микроскопом при увеличении ×100.

Как показали эти наблюдения, при поперечном (фиг.1) и продольном разрезе (фиг.2) сгустка крови, обработанного 90-95-градусным этиловым спиртом, четко выявляется оболочка сгустка и компактная однотонная масса стержня сгустка. Эти же структуры представлены при исследовании под микроскопом при увеличении ×20 (фиг.3). Как видно на этом чертеже, отмечается совершенно различная структура оболочки и остальной массы сгустка крови. На фиг.4 представлен продольный разрез сгустка с обнаружением «клина» сгустка. На фиг.5 представлен продольный разрез сгустка с обнаруженным клином сгустка и пористыми образованиями при острой пневмонии. На фиг.6 представлен поперечный разрез сгустка крови у больной (женщина 72 г.) с 4-ой степенью опухоли пищевода (низко дифференцированный рак). При поперечном разрезе сгустка крови также определяются образования (фиг.7 и 8), имеющие однородную структуру и четкие границы, но при патологии (острая пневмония) эти структуры также изменяются (фиг.9).

При гистологическом исследовании неокрашенных поперечных срезов сгустка крови у доноров (фиг.10) выявляется красная однотипная масса слившихся разрушенных эритроцитов, на фоне которых выявляется четкая волнообразная структура основы сгустка - фибринных образований. Как показали исследования срезов сгустка у больных, у них также отмечаются нарушения гистологической структуры сгустка. Так, у больной со злокачественным образованием пищевода (фиг.11), рожей (фиг.12) и острой пневмонией (фиг.13) наблюдается исчезновение волнообразной структуры, появление либо мелких нитей (фиг.11), либо грубых массивных структур (фиг.12), при полном разрушении всей микроскопической структуры сгустка крови (фиг.11, 12, 13).

Литература

1. В.А.Фигурнов, С.С.Целуйко, А.В.Фигурнов, Е.В.Фигурнова. Гистоморфология составных частей сгустка крови в норме и патологии. Благовещенск, 2007, 72 с.

2. Фигурнов А.В. Сгусток крови и его клиническое значение при некоторых внутренних заболеваниях. Автореферат канд. дис. Благовещенск, 2003 г.

Изобретение относится к медицине, в частности лабораторному методу исследования. Способ подготовки сгустка крови к исследованию заключается в том, что сгусток крови выдерживают в 90-95-градусном этиловом спирте, при этом в течение первого часа его переворачивают, через 18-24 часа сгусток крови вынимают и делают срезы толщиной 0,1-0,5 мм. Использование способа позволяет повысить качество приготовления микропрепарата сгустка крови для исследования. 13 ил.

Способ подготовки сгустка крови к исследованию, включающий его фиксацию с последующим визуальным и микроскопическим исследованием продольных и поперечных срезов, отличающийся тем, что сгусток крови выдерживают в 90-95-градусном этиловом спирте, при этом в течение первого часа его переворачивают, через 18-24 ч сгусток крови вынимают и делают срезы толщиной 0,1-0,5 мм.