СПОСОБ ПОДГОТОВКИ РАСТИТЕЛЬНОГО ОБЪЕКТА К ИЗУЧЕНИЮ СОСТОЯНИЯ УСТЬИЦ Российский патент 2011 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к области физиологии растений, а в частности к лабораторной практике исследования растительного объекта, и может быть использовано для изучения состояния устьиц в процессе варьирования напряженностью внешних факторов (например, временем суток, температурой окружающей среды, составом химических соединений различных классов в качестве компонентов питания при их различной концентрации).

Известен способ подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц, заключающийся в получении тонкой прозрачной пленки отпечатков устьиц с использованием полимерных соединений в органическом растворителе (например, нитроцеллюлоза, кинофотопленка в ацетоне) с последующим снятием полученного отпечатка и исследования его с использованием микроскопа. Например, определение площади устьичной щели с использованием окуляр-микрометра и объект-микрометра (Рябинина З.Н., Семенова Н.В. Практикум по физиологии растений: Учебно-методическое пособие. - Оренбург, - Издательство ОГУ, 1989, с.25-26) - аналог.

Однако данный способ подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц обладает следующими недостатками.

1. Очень часто при снятии полученной полимерной пленки с поверхности растительного объекта происходит ее деформация (растяжение, изменение размера, толщины) либо происходит ее разрыв, что делает такой образец непригодным для проведения дальнейших операций по изучению состояния устьиц растительного объекта и микроскопирования, что приводит к необходимости повторения операции получения отпечатка.

В результате этого операцию по получению отпечатка эпидермиса растительного объекта с использованием полимерного материала в органическом растворителе необходимо проводить повторно, что вынуждает исследователя затрачивать дополнительное время на повторение операций по подготовке объекта к его изучению.

2. Нанесение на значительную часть поверхности листовой пластины (эпидермиса) растительного объекта полимерного материала в органическом растворителе приводит к возникновению глубоких химических ожогов с последующим некрозом клеток эпидермиса. Это в итоге также даст искаженную картину хода транспирации воды с поверхности изучаемого растительного объекта в динамических условиях длительного эксперимента.

3. Достаточно часто в момент снятия полученной полимерной пленки с поверхности растительного объекта происходит повреждение поверхности листовой пластины (происходит отрыв частиц эпидермиса совместно с полимерной пленкой).

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ подготовки растительного объекта к изучению устьиц, заключающийся в размещении на поверхности растительного объекта пластинки с кромкой, имеющей по крайней мере одну прорезь площадью 10-120 мм², и нанесении на поверхность растительного объекта раствора полимера в органическом растворителе. Варианты способа позволяют получить оттиски устьичного аппарата растительного объекта на пластинке с кромкой толщиной 25-250 мкм, в качестве материала которой используют: бумагу, кальку, металлическую фольгу, полимерный материал, не взаимодействующий с органическим растворителем (Пат. 2344416 RU Способ подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц. / А.Р.Самакаева, МПК G01N 33/00 // G01B 1/00, Опубл. 20.01.2009 г. Бюл. №2) - прототип.

Однако данный способ подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц обладает следующими недостатками.

1. Очень часто при снятии полученной полимерной пленки с поверхности растительного объекта происходит ее деформация (растяжение, изменение размера, толщины) либо происходит ее разрыв, что делает такой образец непригодным для проведения дальнейших операций по изучению состояния устьиц растительного объекта и микроскопирования, что приводит к необходимости повторения операции получения отпечатка.

Согласно техническому решению, принятого нами в качестве прототипа, качественными и пригодными к работам по изучению состояния устьиц растительного объекта являются только 86-92% полимерных пленок.

В результате этого, ≈10% операций по получению отпечатка эпидермиса растительного объекта с использованием полимерного материала в органическом растворителе необходимо проводить повторно, что вынуждает исследователя затрачивать дополнительное время на повторение операций по подготовке объекта к его изучению.

Решаемая изобретением задача - повышение качества отпечатков, сокращение времени приготовления полимерной пленки.

Технический результат, который может быть получен при осуществлении заявленного способа - повышение качества отпечатков растительного объекта и высокий процент их пригодности для оценки состояния устьиц.

Для решения поставленной задачи с достижением указанного технического результата в известном способе подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц, включающем расположение по поверхности растительного объекта пластинки с кромкой, имеющей, по крайней мере, одну прорезь, для заливки раствора полимера в органическом растворителе, нанесение на поверхность растительного объекта ограниченного, по крайней мере, одной прорезью пластинки раствора полимера в органическом растворителе, испарение органического растворителя, снятие и перенос пластинки с полимерной пленкой с оттиском поверхности растительного объекта на предметное стекло и изучение под микроскопом состояния устьиц, при этом после нанесения на поверхность растительного объекта, ограниченную пластинкой с кромкой, по крайней мере, с одной прорезью, раствора полимера в органическом растворителе, размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке с диаметром материала сетки 0,07-0,124 мм и площадью ячеек 1,25-4,00 мм², а в качестве материала сетки используют полиамидные, полипропиленовые, полиэфирные нити или медный провод.

Указанные материалы выпускаются отечественной промышленностью, например, в соответствии с ТУ У 6-00204048.104-96 и в основном используются лентоткацкими фабриками и предприятиями по производству сит, фильтровальных материалов.

В качестве полимера для формирования полимерной пленки с оттиском растительного объекта используют нитроцеллюлозу или полиметилметакрилат, а в качестве органического растворителя вещества, выбранные из группы ацетон, дихлорэтан, хлороформ, диэтиловый эфир либо их смесь.

Нитроцеллюлоза: (целлюлозы нитрат, нитроклетчатка) [C₆H₇O₂(ОН)_3-х(ONO₂)_x]_n, мол. масса 38-500 тыс., плотность 1,58-1,65 г/см³; растворима в ацетоне, сложных эфирах, неустойчива в кислотах и щелочах. Получ. взаимодействием хлопковой целлюлозы с нитрующей смесью. Примен.: при производстве целлулоида, лаков.

Полиметилметакрилат: (плексиглас) [-СН₂-С(СН₃)(СООСН₃)-]_n, мол. масса от десятков тыс. до млн.; плотность 1,19 г/см³, растворим в сложных эфирах, ароматических углеводородах. Получ. радикальной полимеризацией метилметакрилата в массе или суспензии. Примен.: листовое органическое стекло, основа лаков и клеев.

Ацетон: (диметилкетон) СН₃СОСН₃, t_пл. -95,35°С, t_кип. 56,24°С, d²⁰ 0,7908; смешивается с водой и органическими растворителями; t_всп. -18°С, КПВ (концентрационные пределы взрываемости) 2,9-12,8%.

Получ.: гидратация пропилена с последующим дегидрированием образующегося изопропанола. Примен.: в производстве метилметакрилата, метакриловой кислоты, лекарственных средств, растворитель акриловых лаков, ацетатов целлюлозы.

Дихлорэтан: (1,2-дихлорэтан, этилендихлорид) ClCH₂CH₂Cl, t_пл. -35,36°С, t_кип. 83,47°С, d²⁰ 1,253; растворимость в воде -0,87%, смешивается с органическими растворителями; t_всп. 13°С, КПВ 6,2-16,9%. Получ.: прямым или окислительным хлорированием этилена. Примен.: в производстве винилхлорида, этилендиамина, растворитель красок, клеев.

Хлороформ: (трихлорметан. хладон-20) CHCl₃, t_пл.-63,5°C, t_кип. 61,2°С, d²⁰ 1,483; растворимость в воде -0,32%, смешивается с органическими растворителями Получ.: хлорирование метана. Примен.: хладагент в холодильных установках, сырье в производстве фторопластов.

Диэтиловый эфир: (этиловый эфир, серный эфир, эфир) С₂Н₅ОС₂Н₅, t_пл. -116,2°С, t_кип. 34,48°C, d²⁰ 0,7135; растворим в спирте, бензоле, воде (6,5% при 20°С), t_всп. -43°С, КПВ 1,9-48,0%. Получ.: дегидратация этанола. Примен.: растворитель нитратов целлюлозы, животных, растительных жиров, природных и синтетических смол, экстрагент.

Нанесение раствора полимера в органическом растворителе на растительный объект осуществляют таким образом, чтобы полимерная пленка формировалась, как на поверхности листовой пластины ограниченной материалом пластинки с прорезью (прорезями), в свободном пространстве сетки превышающую площадь прорези, так и на внешней стороне наложенной на растительный объект пластинки с прорезью (прорезями). Отделение сформированной полимерной пленки от растительного объекта осуществляют с использованием кромки у пластинки с прорезью (прорезями), которая располагается либо перпендикулярно, либо под углом к растительному объекту.

Изобретение иллюстрируется примерами. Полученные данные приведены в таблице.

Примеры 1-7 иллюстрируют варианты реализации предлагаемого способа при нижних, оптимальных и верхних значениях отличительных признаков, примеры 8-14 иллюстрируют варианты реализации по способу-прототипу, а сравнительные примеры 15-19 обосновывают границы заявленных отличительных признаков.

Пример 1. Изучают состояние устьиц подсолнечника (Helianthus annuus).

На поверхность листовой пластины подсолнечника перед нанесением раствора полимера в органическом растворителе размещают пластинку с кромкой, расположенной перпендикулярно или под углом к растительному объекту, из кальки толщиной 25 мкм, имеющую одну прорезь площадью 10 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиэфирную с диаметром материала сетки 0,07 мм и площадью ячеек 1,25 мм², сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из кальки с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 97,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 2. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют медную фольгу толщиной 100 мкм, имеющую одну прорезь площадью 75 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке, в качестве материала которой используют нить полипропиленовую с диаметром материала сетки 0,09 мм и площадью ячеек 2,63 мм², сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из медной фольги с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 99,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 3. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют пленку из полиэтилена толщиной 250 мкм., имеющую одну прорезь площадью 120 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке, в качестве материала которой используют нить полипропиленовую с диаметром материала сетки 0,124 мм и площадью ячеек 4,00 мм², сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из полиэтилена с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 97,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 4. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют бумагу толщиной 150 мкм, имеющую три прорези площадью 75 мм² каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + дихлорэтан - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиамидную с диаметром материала сетки 0,09 мм и площадью ячеек 4,00 мм², сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из бумаги с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 100,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 5. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют кальку толщиной 50 мкм., имеющую пять прорезей площадью 75 мм² каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + хлороформ - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют медный провод с диаметром материала сетки 0,07 мм и площадью ячеек 1,25 мм², сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из кальки с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 98,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 6. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют фторопласт толщиной 250 мкм, имеющую две прорези площадью 50 мм² каждая, две прорези площадью 75 мм² и одну прорезь площадью 120 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + ацетон - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиамидную с диаметром материала сетки 0,124 мм и площадью ячеек 1,25 мм², сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из фторопласта с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют 97,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 7. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют алюминиевую фольгу толщиной 50 мкм, имеющую две прорези площадью 25 мм² каждая, две прорези площадью 75 мм² каждая и одну прорезь площадью 120 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 10 вес.% + ацетон + диэтиловый эфир (1:1) 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиэфирную с диаметром материала сетки 0,07 мм и площадью ячеек 4,00 мм², сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из алюминиевой фольги с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 98,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 8. Изучают состояние устьиц подсолнечника (Helianthus annuus).

На поверхность листовой пластины подсолнечника перед нанесением раствора полимера в органическом растворителе размещают пластинку с кромкой, расположенной перпендикулярно или под углом к растительному объекту, из кальки толщиной 25 мкм, имеющую одну прорезь площадью 10 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза -5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из кальки с полимерной пленкой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600)

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 88,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 9. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют медную фольгу толщиной 100 мкм, имеющую одну прорезь площадью 75 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из медной фольги с полимерной пленкой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 86,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 10. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют пленку из полиэтилена толщиной 250 мкм, имеющую одну прорезь площадью 120 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из полиэтилена с полимерной пленкой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 90,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 11. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют бумагу толщиной 150 мкм, имеющую три прорези площадью 75 мм² каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + дихлорэтан - 90 вес.%), сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из бумаги с полимерными пленками на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 92,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 12. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют кальку толщиной 50 мкм, имеющую пять прорезей площадью 75 мм² каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + хлороформ - 90 вес.%), сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из кальки с полимерными пленками на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 90,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 13. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют фторопласт толщиной 250 мкм, имеющую две прорези площадью 50 мм² каждая, две прорези площадью 75 мм² и одну прорезь площадью 120 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + ацетон - 90 вес.%), сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из фторопласта с полимерными пленками на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 88,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 14. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 8, только в качестве материала пластинки используют алюминиевую фольгу толщиной 50 мкм, имеющую две прорези площадью 25 мм² каждая, две прорези площадью 75 мм² каждая и одна прорезь площадью 120 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 10 вес.% + ацетон + диэтиловый эфир (1:1) 90 вес.%), сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из алюминиевой фольги с полимерными пленками на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 86,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 15. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют кальку толщиной 15 мкм, имеющую одну прорезь площадью 8,5 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиэфирную с диаметром материала сетки 0,04 мм и площадью ячеек 0,80 мм², сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из кальки с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 82,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 16. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют медную фольгу толщиной 300 мкм, имеющую одну прорезь площадью 8,5 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полипропиленовую с диаметром материала сетки 0,06 мм и площадью ячеек 0,90 мм², сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из медной фольги с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 78,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 17. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют полиэтилен толщиной 300 мкм, имеющую одну прорезь площадью 160 мм², наносят раствор полимера в органическом растворителе (нитроцеллюлоза - 5 вес.% + ацетон - 95 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиамидную с диаметром материала сетки 0,04 мм и площадью ячеек 6,00 мм², сушат при комнатной температуре 3-7 минут, переносят пластинку из полиэтилена с полимерной пленкой и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 66,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 18. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют бумагу толщиной 15 мкм, имеющую пять прорезей площадью 8,5 мм² каждая и пять прорезей площадью 160 мм² каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + хлороформ - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют провод медный с диаметром материала сетки 0,2 мм и площадью ячеек 5,50 мм², сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из бумаги с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 79,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Пример 19. Изучают состояние устьиц подсолнечника аналогично примера 1, только в качестве материала пластинки используют фторопласт толщиной 300 мкм, имеющую пять прорезей площадью 8,5 мм² каждая и пять прорезей площадью 160 мм² каждая, наносят раствор полимера в органическом растворителе (полиметилметакрилат - 10 вес.% + хлороформ - 90 вес.%), после нанесения на поверхность растительного объекта ограниченного пластинкой раствора полимера в органическом растворителе размещают сетку, превышающую площадь прорезей в пластинке, в качестве материала которой используют нить полиамидную с диаметром материала сетки 0,3 мм и площадью ячеек 6,0 мм², сушат при комнатной температуре 5-10 минут, переносят пластинку из фторопласта с полимерными пленками и сеткой на предметное стекло, фиксируют объект покровным стеклом и микроскопируют вначале при малом (×160), а затем при большом увеличении (×600).

Кратность повторения примера - 100 раз.

Пригодные полимерные пленки для оценки состояния устьиц методом микроскопирования составляют - 84,0%. Полученные данные приведены в таблице.

Из данных, приведенных в таблице видно, что предлагаемый способ выгодно отличается от известного (способа-прототипа) тем, что достигается повышение качества отпечатков, сокращается время приготовления полимерной пленки, а также снижается интенсивность химического ожога на поверхности растительного материала за счет ограничения поверхности растительного объекта контактируемого с органическим растворителем.

Достоверность полученных результатов доказана высокой кратностью (100 раз) повторения каждого из приведенных примеров.

Кроме того, по предлагаемому способу увеличивается до 97-100% пригодность полимерной пленки для оценки состояния устьиц растительного объекта.

Использование для реализации предлагаемого способа химических продуктов (полимеры, органические растворители, сетки) делает его доступным для реализации в лабораториях физиологии растений различного уровня.

Таблица 1 № п/п Пример Существенные признаки предлагаемого изобретения Альтернативные признаки реализации изобретения материал сетки диаметр материала сетки, мм площадь ячейки сетки, мм² материал пластинки, имеющей прорезь (прорези) толщина пластинки, мкм число прорезей в пластинке, шт./ площадь каждой прорези, мм² раствор полимера в органическом растворителе полимер органический растворитель 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 по предлагаемому способу пить полиэфирная 0,07 1,25 калька 25 1/10 мм² нитро целлюлоза (5 вес.%) ацетон (95 вес.%) 2 - //- нить полипропиленовая 0,09 2,63 фольга медная 100 1/75 мм² нитро целлюлоза (5 вес.%) ацетон (95 вес.%) 3 -//- нить полипропиленовая 0,124 4,00 полиэтилен (пленка) 250 1/120 мм² нитро целлюлоза (5 вес.%) ацетон (95 вес.%) 4 -//- нить полиамидная 0,09 4,00 бумага 150 3/75 мм² (каждая) полиметил метакрилат (10 вес.%) дихлорэтан (90 вес.%) 5 - //- провод медный 0,07 1,25 калька 50 5/75 мм² полиметил метакрилат (10 вес.%) хлороформ (90 вес.%) 6 -//- нить полиамидная 0,124 1,25 фторопласт (пленка) 250 2/50 мм² (каждая) 2/75 мм² (каждая) 1/120 мм² (каждая) полиметил метакрилат (10 вес.%) ацетон (90 вес.%)

Таблица 1 (продолжение) 7 -//- нить полиэфирная 0,07 4,00 фольга алюмин. 50 2/25 мм² (каждая) 2/75 мм² (каждая) 1/120 мм² (каждая) нитро-целлюлоза (10 вес.%) ацетон + диэтиловый эфир (1:1) (90 вес.%) 8 По известному способу (прототип) - - - калька 25 1/10 мм² нитро целлюлоза (5 вес.%) ацетон (95 вес.%) 9 -//- - - - фольга медная 100 1/75 мм² нитро целлюлоза (5 вес.%) ацетон (95 вес.%) 10 -//- - - - полиэтилен (пленка) 250 1/120 мм² нитро целлюлоза (5 вес.%) ацетон (95 вес.%) 11 -//- - - - бумага 150 3/75 мм² (каждая) полиметил метакрилат (10 вес.%) дихлорэтан (90 вес.%) 12 -//- - - - калька 50 5/75 мм² полиметил метакрилат (10 вес.%) хлороформ (90 вес.%) 13 -//- - - - фторопласт (пленка) 250 2/50 мм² (каждая) 2/75 мм² (каждая) 1/120 мм² (каждая) полиметил метакрилат (10 вес.%) ацетон (90 вес.%) 14 -//- - - - фольга алюмин. 50 2/25 мм² (каждая) 2/75 мм² (каждая) 1/120 мм² (каждая) нитро-целлюлоза (10 вес.%) ацетон + диэтиловый эфир (1:1) (90 вес.%)

Таблица 1 (продолжение) 15 по сравнительному способу нить полиэфирная 0,04 0,8 калька 15 1/8,5 мм² нитро-целлюлоза (5 вес.%) ацетон (95 вес.%) 16 -//- нить полипропиленовая 0,06 0,9 фольга медная 300 1/8,5 мм² нитро-целлюлоза (5 вес.%) ацетон (95 вес.%) 17 -//- нить полиамидная 0,04 6,0 полиэтилен (пленка) 300 1/160 мм² нитро-целлюлоза (5 вес.%) ацетон (95 вес.%) 18 -//- провод медный 0,2 5,5 бумага 15 5/8,5 мм² (каждая) 5/160 мм² (каждая) полиметил метакрилат (10 вес.%) дихлорэтан (90 вес.%) 19 -//- нить полиамидная 0,3 6,0 фторопласт (пленка) 300 5/8,5 мм² (каждая) 5/160 мм² (каждая) полимети-метакрилат (10 вес.%) хлороформ (90 вес.%)

Изобретение относится к способу подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц. Способ включает расположение по поверхности растительного объекта пластинки с кромкой, имеющей, по крайней мере, одну прорезь для заливки раствора полимера в органическом растворителе. На поверхность растительного объекта, ограниченную, по крайней мере, одной прорезью пластинки, осуществляют нанесение раствора полимера в органическом растворителе, испарение органического растворителя, снятие и перенос пластинки с полимерной пленкой с оттиском поверхности растительного объекта на предметное стекло и изучение под микроскопом состояния устьиц. После нанесения на поверхность растительного объекта, ограниченную пластинкой с кромкой, по крайней мере, с одной прорезью, раствора полимера в органическом растворителе, размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке с диаметром материала сетки 0,07-0,124 мм и площадью ячеек 1,25-4,00 мм². Достигаемый при этом технический результат заключается в повышении качества отпечатков растительного объекта и обеспечении высокого процента их пригодности для оценки состояния устьиц. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

1.Способ подготовки растительного объекта к изучению состояния устьиц, включающий расположение по поверхности растительного объекта пластинки с кромкой, имеющей, по крайней мере, одну прорезь для заливки раствора полимера в органическом растворителе, нанесение на поверхность растительного объекта, ограниченного, по крайней мере, одной прорезью пластинки раствора полимера в органическом растворителе, испарение органического растворителя, снятие и перенос пластинки с полимерной пленкой с оттиском поверхности растительного объекта на предметное стекло и изучение под микроскопом состояния устьиц, отличающийся тем, что после нанесения на поверхность растительного объекта, ограниченного пластинкой с кромкой, по крайней мере, с одной прорезью раствора полимера в органическом растворителе, размещают сетку, превышающую площадь прорези в пластинке с диаметром материала сетки 0,07-0,124 мм и площадью ячеек 1,25-4,00 мм².

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве материала сетки используют полиамидные, полипропиленовые, полиэфирные нити или медный провод.