СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЗАДЕРЖКИ РОСТА ПЛОДА Российский патент 2011 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и перинатологии, и найдет широкое применение при разработке акушерской практики.

Проблема задержки развития плода относится не только к области перинатологии, но и тесно связана с акушерской патологией и вопросами акушерской тактики (А.Н.Стрижаков и соавт. Задержка развития плода. Киев. Здоровья. 1988). Частота этого осложнения беременности по данным ряда авторов колеблется от 4,5 до 39%, занимая в структуре причин перинатальной заболеваемости и смертности третье место (А.Т.Бунин, М.В.Медведев // Акушерство и гинекология. 1985. №12. С.25-30; Е.М.Вихляева, З.С.Ходжаева // Акушерство и гинекология. 1995. №6. С.18-24).

Эффективность лечебных мероприятий при диагностируемой, как правило, в конце II-III триместров беременности задержке развития плода крайне снижена и направлена лишь на пролонгирование беременности, а не на ее преодоление. В связи с этим актуальным представляется выяснение ранних диагностических маркеров задержки роста плода (ЗРП) с целью проведения своевременных лечебных мероприятий.

Анализ патентной и научно-медицинской литературы позволил проанализировать наличие существующих способов диагностики задержки роста плода. Более современным приемом диагностики ЗРП служит использование нескольких фетометрических показателей, но они являются информативными только в третьем триместре беременности - в 26-38 недель (А.Н.Стрижаков, А.Н.Бунин, М.В.Медведев // Акушерство и гинекология. 1988. №6. С.32-35). Ультразвуковая диагностика ЗРП основана на сопоставлении фетометрических показателей, полученных в результате исследования, с нормативными показателями для данного срока беременности. Одним из наиболее информативных ее параметров является бипариетальный размер головки плода. Однако измерение только этого показателя не может быть использовано для выявления задержки роста плода.

В последнее время для выявления синдрома ЗРП применяют доплерометрическое определение объемного кровотока в аорте плода, пупочной вене или внутренней сонной артерии с последующим анализом кривых скоростей кровотока. Учитывая, что качественная оценка кровотока с помощью систолодиастолического отношения (С/Д) и индекса резистентности отражает одни и те же закономерности, в широкой клинической практике для диагностики ЗРП используют также определение пульсационного индекса (ПИ), увеличение которого имеет место при ЗРП в пупочной вене и резкое снижение во внутренней сонной артерии. Однако все эти исследования наиболее достоверны в сроке с 17-20 недель развития беременности. Диагностическая ценность одноразовой динамической сцинтиграфии при задержке роста плода составляет 75-79% (Е.М.Вихляева, З.С.Ходжаева // Акушерство и гинекология. 1984. №6. С.18-24).

Известен способ диагностики угрожающего состояния плода по патенту №2076624 (1997 г.), который дает возможность осуществлять одновременную регистрацию электрической активности сердца матери и плода, и при отсутствии коррелятивной взаимосвязи диагностируют угрожающее состояние плода или степень нарушения состояния плода. Относительно данного аналога можно подчеркнуть то, что применение его в клинической практике позволяет провести оценку наличия отклонений в развитии плода в значительно позднем сроке беременности.

Известен способ диагностики задержки внутриутробного развития плода, описанный в патенте №2086981 (1997 г.), по которому в венозной крови женщины определяется абсолютное содержание В-лимфоцитов (Ва) и относительное содержание нейтрофилов, имеющих рецепторы к С3 компоненту комплемента (ЕАС-РОН), и при показателях Ва, больших или равных 0,3×10⁹ мкг/л, и ЕАС-РОН, больших или равных 16%, состояние плода оценивается как несоответствующее физиологическому развитию и диагностируется задержка внутриутробного развития плода. Данный способ не специфичен, так как изменения в содержании В-лимфоцитов, а также нейтрофилов могут изменяться при самых различных заболеваниях матери, не связанных с ЗРП, а также точность способа составляет лишь 80%.

В патенте №2172958 (2001 г.) предложен способ диагностики ЗРП, который позволяет осуществить диагностику на ранних этапах развития задержки роста плода путем анализа периферической крови, включающий выделение ДНК, проведение полимеразной цепной реакции и определения аллеля PL-AII гена гликопротеина IIIA. Следует отметить, что данный способ имеет главный недостаток, прежде всего ограниченность применения, ввиду сложности его выполнения, выражающейся в многоэтапности и длительности его исполнения.

Еще одним способом раннего прогнозирования синдрома задержки развития плода является определение в периферической венозной крови содержания HLA-DR + моноцитов (патент 2265224, 2004 г.), и при его значении, равном или меньшем 57,9%, прогнозируют развитие синдрома ЗРП. Следует отметить, что данный способ также ограничен в применении ввиду сложности и длительности его выполнения.

В патенте РФ №2331365 (2007) предложен способ диагностики синдрома задержки внутриутробного развития плода по определению в крови беременной женщины содержания аллантоина, и при значениях его концентрации от 2,9 до 5,8 мкмоль/л диагностируют синдром задержки внутриутробного развития плода. Данный способ не является специфичным, так как выраженное уменьшение данного показателя наблюдается не только при ЗРП, а также при неразвивающейся беременности и ранних самопроизвольных абортах.

Прототипом данного изобретения избран способ прогнозирования задержки внутриутробного развития плода, описанный в патенте №2246733 (2003 г.). Сущность способа-прототипа состоит в том, что в сыворотке крови беременной определяют содержание инсулиноподного фактора роста и сосудисто-эндотелиального фактора роста, рассчитывают коэффициент их отношения и при величине его 28,5 и ниже диагностируют задержку развития плода.

Данный способ обладает рядом несовершенств:

1. Способ недостаточно специфичен - изменение уровня факторов роста наблюдается при различных осложнениях беременности - гестозе, неразвивающейся беременности, угрозе прерывания беременности, преждевременных родах (А.В.Орлов и соавт. // Росс. вестник акуш. и гин. - 2005. - №3. С.7-9).

2. Метод трудоемок и длителен по времени его выполнения.

3. Осуществление метода требует дорогостоящей аппаратуры и импортных наборов реагентов для иммуноферментного анализа, что затрудняет его широкое применение в клинической практике.

Указанные недостатки устраняются в заявляемом изобретении.

Задача изобретения: повышение точности и специфичности путем разработки специфического способа диагностики задержки роста плода (ЗРП).

Поставленная задача решается тем, что в амниотической жидкости женщины в сроки беременности (с 16 недель гестации) методом капиллярного электрофореза определяют содержание аргинина и пролина, рассчитывают коэффициент их отношения и при величине коэффициента, равной 3,2 и выше, диагностируют задержку роста плода.

Технический результат, получаемый в ходе использования изобретения, состоит в повышении точности диагностики задержки роста плода, что позволяет назначать своевременную адекватную терапию в более раннем периоде.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается диагностировать ЗРП у беременных в раннем периоде, исследуя амниотическую жидкость (однократно) и определяя в ней соотношение содержания аминокислот аргинина и пролина.

Известно, что аминокислоты выполняют жизненно важную для организма роль «строительного материала» в биосинтезе специфических тканевых белков, ферментов, пептидных гормонов и т.д. Роль аминокислот как незаменимых субстратов в метаболических процессах неразрывно связана с другой не менее важной их функцией как регуляторов многих биохимических и физиологических реакций (пластического, энергетического обмена и др.). Среди азотистых компонентов амниотической жидкости свободные аминокислоты занимают важное место, так как эффективно используются плодом в качестве пластического материала (С.Hanaoka, Т.Asai // Acta Obstet. Ginec. Jap., 1979. - 31. - №2. P.226).

Особое внимание в настоящее время уделяется роли аргинина при беременности, а также для диагностики состояния плода (И.О.Буштырева и соавт. // Вестник РУДН. - 2005. - №4. - С.92-98; А.В.Шестопалов // Известия вузов Сев.-Кав. регион. - Естес. науки. - 2006. - №8. - С.112-116; С.В.Хлыбова и соавт. // Росс. вестник акуш. и гин. - 2007. - №2. - С.4-7). Аргинин является одним из самых эффективных стимуляторов продукции соматотропного гормона гипофиза (гормона роста) и позволяет поддерживать его концентрацию на верхних границах нормы, а недостаток аргинина приводит к замедлению роста детей (М.Г.Чернобровкин и соавт. // Фармация. - 2004. - Т.53. - №5. - С.18-20).

Важная роль также принадлежит еще одной аминокислоте - пролину. Особенно богат им основной белок соединительной ткани - коллаген, который в высоких концентрациях содержится в костях и мышечной ткани. Пролин - неполярная аминокислота, является строительным материалом клеточных белков. Недавно были опубликованы данные о практическом использовании пролина. Он широко используется в медицине в составе аминокислотных смесей для парентерального питания, в криомедицине (Morita Y. et. al. 2005) и как основа для создания нейролептических препаратов, а также в пищевой промышленности в качестве антиоксиданта (С.А.Фомина // Авт. дисс. канд. биол. наук. - 2005. - 240 с.).

Указанный способ осуществляется путем исследования образцов амниотической жидкости.

В асептических условиях трансабдоминальным доступом производят взятие амниотической жидкости под контролем УЗИ для проведения диагностики хромосомной патологии.

Перед проведением анализа образцы амниотической жидкости обрабатывают 10% раствором трихлоруксусной кислоты с целью депротеинизации. Далее пробы центрифугируют в течение 15 минут при 5500 об/с. Полученный надосадочный раствор используется для проведения анализа.

Идентификацию и количественное определение свободных форм аргинина и пролина выполняют методом капиллярного электрофореза с использованием немодифицированного кварцевого капилляра («Капель-105», «Люмэкс», СПб., Россия).

Перед началом работы капилляр последовательно промывают 1 М раствором соляной кислоты, дистиллированной водой, 0,5 М раствором гидроксида натрия и буферным раствором (20 мМ боратный буфер, рН 9,15). Время ввода пробы 15 с. Давление 30 мбар, рабочее напряжение - 20 кВ. Используют прямое спектрофотометрическое детектирование при 200 нм. Все исследования проводят при температуре 30°С.

Обработку данных проводят при помощи IBM PC с программным обеспечением «Мультихром» (АО «Амперсенд»). Затем рассчитывают коэффициент отношения аргинина к пролину.

Работоспособность данного способа подтверждается следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациентка П-ва, 20 лет. Амбулаторная карта №193. Обратилась в консультативную поликлинику РНИИАП (22.12.2008 г.) в связи с подозрением на хромосомную патологию плода, срок беременности 16 нед.

25.12.2008 г. в асептических условиях трансабдоминальным доступом произведено взятие амниотической жидкости под контролем УЗИ для проведения диагностики хромосомной патологии и определения содержания аргинина и пролина методом капиллярного электрофореза. Методом капиллярного электрофореза определено в амниотической жидкости содержание аргинина, которое составило 216 мкг/мл, и пролина - 70 мкг/мл.

Коэффициент отношения аргинина к пролину = 3,1, что свидетельствовало об отсутствии возникновения задержки роста плода. В течение всего периода гестации пациентка находилась под наблюдением в поликлинике РНИИАП.

11.05.2009 г. женщина поступила на роды в родильное отделение РНИИАП.

Д-з: беременность 39 недель. Роды спонтанные, закончились рождением живого, доношенного ребенка с массой 3200,0.

Данный клинический пример подтверждает точность диагностики отсутствия возникновения ЗРП.

Пример 2. Пациентка Г-ко, 30 лет. Амбулаторная карта №18. Обратилась в консультативную поликлинику РНИИАП (19.01.2009 г.) в связи с подозрением на хромосомную патологию плода, срок беременности 22 нед.

21.01.2009 г. в асептических условиях трансабдоминальным доступом произведено взятие амниотической жидкости под контролем УЗИ для проведения диагностики хромосомной патологии и определения содержания аргинина и пролина методом капиллярного электрофореза. Методом капиллярного электрофореза определено в амниотической жидкости содержание аргинина, которое составило 61 мкг/мл, и пролина - 19 мкг/мл. Коэффициент отношения аргинина к пролину = 3,2.

Поставлен диагноз о возможном возникновении ЗРП.

29.04.2009 г. женщина поступила на роды в родильное отделение РНИИАП.

Д-з: беременность 37-38 недель. Роды спонтанные, закончились рождением живого ребенка с массой 2200,0.

Данный клинический пример подтверждает возможность точной диагностики ЗРП по предложенному коэффициенту.

По заявляемому способу обследовано 38 женщин, среди которых у 29 коэффициент соотношения аргинин/пролин в амниотической жидкости равен 3,1 и ниже, а у 9 пациенток он был 3,2 и выше. У всех беременных с коэффициентом 3,2 и выше выявлена задержка роста плода, подтвержденная рождением маловесных детей (2370-2530,0). Женщины, у которых коэффициент соотношения аргинин/пролин был равен 3,1 и ниже, родили детей без признаков ЗРП.

Вышеизложенное подтверждает диагностическую ценность заявляемого метода.

Таким образом, заявляемый способ является более эффективным по сравнению с известными и обладает рядом преимуществ:

1. Обладает высокой точностью. Достоверность составляет 99%.

2. Способ специфичен (определение ЗРП по данному коэффициенту является специфическим методом).

3. Способ высокочувствителен, дает возможность определения ЗРП на доклинической стадии.

Апробация заявляемого изобретения проведена на достаточном по объему клиническом материале, что подтвердило работоспособность метода и возможность его применения в клинической практике.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и перинатологии. Сущность способа диагностики задержки роста плода заключается в том, что у беременной в сроки 16-19 недель в амниотической жидкости методом капиллярного электрофореза определяют содержание аргинина и пролина. Рассчитывают коэффициент их отношения и при величине коэффициента, равной 3,2 и выше, диагностируют задержку роста плода. Использование заявленного способа позволяет повысить точность диагностики задержки роста плода.

Способ диагностики задержки роста плода путем исследования биологической жидкости беременной женщины, отличающийся тем, что у беременной в сроки 16-19 недель в амниотической жидкости методом капиллярного электрофореза определяют содержание аргинина и пролина, рассчитывают коэффициент их отношения и при величине коэффициента, равного 3,2 и выше, диагностируют задержку роста плода.