СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ПСОРИАЗА Российский патент 2012 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лабораторного способа прогнозирования течения псориаза.

Известен способ прогнозирования течения псориаза путем исследования крови больного, основанный на определении активности фермента фосфолипазы А2 в гемолизате эритроцитов и плазме крови, при превышении показателей в два раза и более относительно нормы прогнозируют ранний рецидив заболевания (в пределах 4-8 мес.). При величине показателей в пределах нормы прогнозируют ремиссию заболевания (от 10 мес. и более) [патент РФ №2009509, 1994 г.]. Недостатками данного способа являются его трудоемкость, длительность исследования (около 3 ч) и сложности приобретения необходимых реактивов.

Известен способ прогнозирования течения псориаза, заключающийся в том, что у больного предварительно берут венозную кровь, выделяют лимфоциты, инкубируют с раствором моноклональных антител к CD54 антигену, определяют в люминесцентном микроскопе относительное число CD54+ лимфоцитов и при значении данного параметра 32% и более прогнозируют более тяжелое течение псориаза [патент РФ №2224255, 2004 г.].

Известен способ прогнозирования течения бляшечного псориаза, отличающийся тем, что в пузырной желчи, полученной методом фракционного дуоденального зондирования, определяют концентрацию холевой кислоты, фосфолипидов, билирубина, холестерина, холато-холестериновый (ХХК) и фосфолипидо-холестериновый (ФХК) коэффициенты до и на 14 день лечения и при снижении показателей холевой кислоты до 14,13±2,54 ммоль/л, фосфолипидов до 1,62±0,27 ммоль/л, билирубина до 1,94±0,24 ммоль/л, при увеличении показателя холестерина до 9,04±1,35 ммоль/л, снижении ХХК до 1,59±0,22 и ФХК до 0,18±0,027 прогнозируют развитие более тяжелой клинической формы псориаза, главным образом эритродермии [патент РФ №2414708, 2011 г.].

Известно, что система иммунитета выполняет регуляторную роль, причем большинство иммунорегуляторных эффектов иммунной системы опосредовано цитокинами (Козинец Г.И., Макаров В.А., 1997), которые в настоящее время относят к наиболее перспективным маркерам нарушения процессов иммунорегуляции при воспалительных заболеваниях (Винницкий Л.И., Бунатян К.А., Инвияева Е.В., 2007). Продукция цитокинов носит активационный характер и обеспечивает информационный обмен между клетками, вовлеченными в воспалительный процесс. Особенность генеза цитокинемии при псориазе заключается в том, что у пациентов по мере развития заболевания нарастает количество клеточных структур с высокой продукцией цитокинов. Исследование особенностей иммуновоспалительного статуса, роли цитокинемии и нарушения баланса между про- и противовоспалительными цитокинами в процессе прогрессирования псориаза и развития артрита позволит получить дополнительные критерии оценки тяжести, прогнозирования течения заболевания.

Прототипом изобретения является способ прогнозирования течения псориаза, заключающийся в том, что определяют уровень иммуноглобулинов A, G, индекса Т_тфр/Т_тфч в сыворотке крови, и при превышении показателей JgA уровня 3,0 г/л, JgG уровня 18 г/л, снижении индекса Т_тфр/_тфч ниже 2,0 прогнозируют развитие более тяжелой клинической формы псориаза, главным образом эритродермии [патент РФ №2134882, 1999].

Однако этот способ не отражает нарушения состояния иммунной системы с образованием иммунозависимых цитокинов и медиаторов, индуцирующих воспалительную реакцию в дерме у больных псориазом, что не дает в полной мере оценить псориатический (воспалительный) процесс на коже и не всегда является достоверным.

Задачей изобретения является ранняя диагностика и прогнозирование развития более тяжелой клинической формы псориаза, главным образом эритродермии.

Технический результат - повышение точности прогнозирования течения псориаза.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования течения псориаза, включающем определение количественного содержания показателя функциональной активности иммунокомпетентных клеток, согласно изобретению в супернатантах культур мононуклеаров крови в качестве показателя функциональной активности определяют уровень спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином продукции цитокина ИЛ-6 мононуклеарами твердофазным иммуноферментным анализом до и на 14 день лечения и при увеличении спонтанной продукции ИЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл и снижении индуцированной продукции ИЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл прогнозируют развитие более тяжелой клинической формы псориаза, главным образом эритродермии.

Предлагаемый способ прогнозирования течения псориаза осуществляется следующим образом. Производят забор крови из локтевой вены в количестве 5 мл. Исследование спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином (ФГА) продукции ИЛ-6 мононуклеарами (моноцитами и лимфоцитами) крови проводят по концентрации ИЛ-6 в супернатантах культур мононуклеаров. Выделенные на градиенте плотности Ficoll-Paque («Pharmacia», Швеция) мононуклеарные клетки (2·10⁶/мл) культивируют в среде RPMI-1640 с добавлением 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 0,3 мг/мл L-глутамина, 10 мМ HEPES («Flow», Великобритания), 100 мкг/мл гентамицина и 5% CO₂ в течение 24 ч. Продукцию цитокинов стимулируют добавлением в среду ФГА («Difco», Германия). Содержание ИЛ-6 в супернатантах оценивают с помощью твердофазного ИФА в соответствии с инструкцией, прилагаемой производителем тест-систем («Cytimmune», США; «Procon», Россия). Оптическую плотность растворов регистрируют на микропланшетном фотометре Multiskan EX («ThermoLabSystems», Финляндия). Концентрацию цитокинов рассчитывают по калибровочной кривой. Исследование проводят до и на 14 день лечения. Увеличение спонтанной продукции ИЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл при снижении индуцированной продукции ИЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл указывает на истощение активности мононуклеаров и снижение индуцированной активности, и возможную трансформацию течения в более тяжелый клинический вариант, в частности эритродермию.

ИЛ-6 - цитокин, по данным многих авторов, играет центральную роль в воспалительном ответе, в частности в дерме кожи при псориазе (Elder J.Т., Sartor С.I., Bornan D.K. Interleukin-6 in psoriasis: expression and mitogenicity studies // Arch. Dermatol. Res. Int, 1992, Vol.284. P.324-332). У здоровых лиц (и у больных с псориазом без последующего утяжеления течения) введение в среду инкубации ФГА обуславливает увеличение индуцированной продукции ИЛ-6. Значительное увеличение спонтанной продукции ИЛ-6 при псориазе тяжелой степени обусловливает уменьшение потенциальной активности мононуклеаров в ответ на дополнительный стимул (введение в среду инкубации ФГА), что проявляется снижением индуцированной активности мононуклеаров крови (табл.1).

Согласно протоколу исследования, клиническую динамику со стороны процесса на коже, а также лабораторное тестирование 29 наблюдавшихся больных псориазом проводили до и на 14 день традиционной медикаментозной терапии.

Исследования выполнены с помощью стандартных наборов реактивов фирм «Pharmacia» Швеция, «Flow» Великобритания, «Difco» Германия «Human» на микропланшетном фотометре Multiskan EX («ThermoLabSystems», Финляндия).

У ряда больных с бляшечным псориазом, несмотря на проводимую традиционную терапию, наблюдалось утяжеление процесса на коже, что проявлялось переходом бляшечного псориаза в эритродермию. Параллельно с ухудшением клинической картины отмечались выраженные иммунологические изменения в показателях цитокинсинтезирующей активности мононуклеаров.

В доступной научно-медицинской и патентной литературе не было обнаружено сведений об определении показателей цитокинсинтезирующей активности мононуклеаров с целью прогнозирования перехода псориаза в эритродермию. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «новизна».

Исследованиями авторов была впервые доказана возможность точного прогнозирования перехода псориаза в эритродермию на основе исследования цитокинсинтезирующей активности мононуклеаров. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ прогнозирования иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Больная М., 48 лет, обратилась с жалобами на распространенные высыпания на коже и изменение ногтевых пластинок. Страдает псориазом около 12 лет, рецидивы чаще зимой и осенью.

При объективном осмотре патологический процесс носит распространенный характер, локализован в области груди, живота и верхних конечностей. Псориатические высыпания ярко-розового цвета, с четкими границами 4,5-6,5 см в диаметре, покрытые серебристо-белыми чешуйками, с венчиком гиперемии по периферии. После проведенного обследования выставлен диагноз: распространенный бляшечный псориаз, прогрессирующая стадия. Осенне-зимняя форма. PASI 19,5, BSA 28%.

Проведено исследование по изучению цитокинсинтезирующей активности (ИЛ-6) мононуклеаров. До назначения стандартной терапии показатели уровня спонтанной продукции ИЛ-6 составили 1208,8, при индуцированной продукции ИЛ-6 - 1868,4.

На 14 день лечения показатели уровня спонтанной продукции ИЛ-6 составили 4942,4, индуцированной продукции ИЛ-6 - 2838,8. Несмотря на проводимую традиционную терапию (к вечеру 14 дня лечения) наблюдалось утяжеление псориатического процесса, что проявлялось переходом бляшечного псориаза в эритродермию. Появление слабости и недомогания, внезапное повышение температуры тела до 40°C, озноб и развитие распространенной эритемы на кожных покровах. Вначале эритемы появлялись на свободных от псориатических высыпаний участках кожи, затем сливались в сплошную эритродермию. Пораженная кожа была инфильтрирована, гиперемирована и покрыта тонкими пластинчатыми чешуйками. Отмечалось отслаивание ногтевых пластин. Субъективно больная ощущала стягивание, жжение, сухость, зуд кожи. PASI 36, BSA 48%. Был выставлен диагноз - псориатическая эритродермия, и больной провели лечение согласно диагнозу по медико-экономическим стандартам.

Пример 2. Больной М., 57 лет, обратился с жалобами на распространенные высыпания на коже и волосистой части головы, незначительный зуд и стянутость кожи. Страдает псориазом около 7 лет, рецидивы чаще зимой и осенью.

При объективном осмотре патологический процесс носит распространенный характер, локализован в области груди, спины, живота, верхних и нижних конечностях, волосистой части головы. Псориатические высыпания ярко-розового цвета, с четкими границами 5,2-5,8 см в диаметре, покрытые серебристо-белыми чешуйками, с венчиком гиперемии по периферии. После проведенного обследования выставлен диагноз: распространенный бляшечный псориаз, прогрессирующая стадия. Осенне-зимняя форма. PASI 22,6, BSA 30%.

Проведено исследование по изучению цитокинсинтезирующей активности (ИЛ-6) мононуклеаров. До назначения стандартной терапии показатели уровня спонтанной продукции ИЛ-6 составили 1206,8, при индуцированной продукции ИЛ-6 - 1458,9.

На 14 день проводимой традиционной терапии у больного наблюдалась положительная динамика псориатического процесса, что проявлялось исчезновением зуда и стянутости кожи, псориатические бляшки начали рассасываться. Показатели уровня спонтанной и индуцированной продукции ИЛ-6 (на 14 день лечения) практически не изменились и составили 1204,8 и 1436 соответственно, что соответствует течению псориатического процесса без последующего утяжеления.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет достаточно быстро, точно, эффективно прогнозировать характер течения псориатического процесса и корректировать его соответствующей терапией.

Предлагаемым способом была проведена оценка вероятности возникновения перехода псориаза в эритродермию у 29 больных с псориазом и во всех случаях был достигнут указанный технический результат. Способ легко воспроизводим в условиях лаборатории поликлиники. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «промышленная применимость».

Таблица Уровень цитокинов в супернатантах мононуклеаров у больных с псориазом Исследуемые группы ИЛ-6, пг/мл Спонтанная активность Индуцированная активность Псориаз без последующего утяжеления (группа 1, n=21) 1106,3±118,1 1353,1±246,2 Псориаз с последующей трансформацией в эритродермию (группа 2, n=8) 5158,3±218,4 3056,3±223,5 Практически здоровые (n=21) 208,4±7,8 348,6±9,1 *Различие с показателями практически здоровых лиц достоверно (p<0,05). **Различие между показателями 1 и 2 групп достоверно (p<0,05).

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для прогнозирования течения псориаза. Для этого в супернатантах культур мононуклеаров до и на 14 день лечения определяют показатели спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином продукции цитокина ИЛ-6. При увеличении спонтанной продукции ИЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл и снижении индуцированной продукции ИЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл прогнозируют развитие более тяжелой клинической формы псориаза, эритродермии. Использование изобретения обеспечивает точный прогноз перехода псориаза в эритродермию. 1 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования течения псориаза, включающий определение количественного содержания показателя функциональной активности иммунокомпетентных клеток, отличающийся тем, что в супернатантах культур мононуклеаров крови в качестве показателя функциональной активности определяют уровень спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином продукции цитокина ИЛ-6 мононуклеарами твердофазным иммуноферментным анализом до и на 14-й день лечения и при увеличении спонтанной продукции ИЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл и снижении индуцированной продукции ИЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл прогнозируют развитие более тяжелой клинической формы псориаза, главным образом эритродермии.