СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ПЕРЕХОДА ИНФИЛЬТРАТИВНОЙ ФОРМЫ В НАГНОИТЕЛЬНУЮ ФОРМУ ЗАБОЛЕВАНИЯ У БОЛЬНОГО ЗООАНТРОПОНОЗНОЙ ТРИХОФИТИЕЙ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для прогнозирования перехода у больного зооантропонозной трихофитией инфильтративной формы в нагноительную форму заболевания.

Известны способы определения вероятности перехода инфильтративной трихофитии в нагноительную путем микроскопического и культурального определения вида гриба-возбудителя [Пестерев П.Н. Трихофития зооантропонозная. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 1998. - 124 с.]. Оценка риска возникновения нагноительной трихофитии может быть проведена с помощью исследования функциональной активности нейтрофилов [Медведев Ю.А., Терегулова Г.А. Анализ изменений функциональной активности нейтрофилов у больных с различными клиническими формами трихофитии // Вестник дерматологии и венерологии. - 1986. №2. С. 69-72] и супрессии фагоцитоза [Медведев Ю.А., Алехин Е.К., Ярмухамедова А.Г., Выговская Т.Л. Супрессия фагоцитоза как один из факторов возникновения глубоких клинических форм трихофитии // Актуальные вопросы медицинской микологии. Ленинград, 1987, С. 57].

Известны способы определения вероятности перехода инфильтративной трихофитии в нагноительную путем определения содержание специфических антител в сыворотке крови больного инфильтративной трихофитией с помощью реакции пассивной гемагглютинации с эритроцитами, сенсибилизированными цитоплазматическими антигенами трихофитона, и при содержании антител в титрах менее 1:4 вероятность перехода инфильтративной трихофитии прогнозируют как низкую, а при титрах 1:4 и выше - как высокую [патент РФ №2284038, 2006 г.], путем определения в венозной и капиллярной крови очага поражения способности клеток к фагоцитозу в % содержании и фагоцитарное число, и при их значениях на 7 день лечения в венозной крови менее 20% и 3,0 соответственно и в капиллярной крови менее 30% и 4,0 соответственно прогнозируют переход инфильтративной формы трихофитии волосистой части головы в нагноительную [патент РФ №2285256, 2006 г.], по интенсивности показателей гуморального и клеточного иммунного ответа на антигены гриба-возбудителя [Медведев Ю.А., Кашкин К.П., Киркин А.Ф. Особенности кооперации иммуноцитов двух линий мышей, оппозитных по чувствительности к дерматофитозам, при иммунном ответе на антигены возбудителя // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1988. №6. С. 69].

Прототипом данного изобретения является прогнозирование степени тяжести поражения зоонозной трихофитией путем определения в сыворотке крови содержания интерлейкина-4 на 1-5 день лечения и при его значениях 160 пг/мл и выше прогнозируют вероятность перехода инфильтративной трихофитии в нагноительную [патент РФ №2314537, 2008 г.].

Технический результат - повышение точности прогнозирования перехода.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования перехода инфильтративной формы в нагноительную форму заболевания у больного зооантропонозной трихофитией, включающем определение количественного содержания показателя функциональной активности иммунокомпетентных клеток, согласно изобретению в супернатантах культур мононуклеаров в качестве показателя функциональной активности определяют уровень спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином продукции цитокина ИЛ-6 мононуклеарами крови твердофазным иммуноферментным анализом до и на 14 день лечения, и при увеличении спонтанной продукции ИЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл и снижении индуцированной продукции ИЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл на 14 день лечения прогнозируют вероятность перехода инфильтративной трихофитии в нагноительную.

Предлагаемый способ прогнозирования течения трихофитии осуществляется следующим образом. Производят забор крови из локтевой вены в количестве 5 мл. Исследование спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином (ФГА) продукции ИЛ-6 мононуклеарами (моноцитами и лимфоцитами) крови проводят по концентрации ИЛ-6 в супернатантах культур мононуклеаров. Выделенные на градиенте плотности Ficoll-Paque («Pharmacia», Швеция) мононуклеарные клетки (2·106/мл) культивируют в среде RPMI-1640 с добавлением 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 0,3 мг/мл L-глутамина, 10 мМ HEPES («Flow», Великобритания), 100 мкг/мл гентамицина и 5% CO₂ в течение 24 ч. Продукцию цитокинов стимулируют добавлением в среду ФГА («Difco», Германия). Содержание ИЛ-6 в супернатантах оценивают с помощью твердофазного ИФА в соответствии с инструкцией, прилагаемой производителем тест-систем («Cytimmune», США; «Procon», Россия). Оптическую плотность растворов регистрируют на микропланшетном фотометре Multiskan EX («ThermoLabSystems», Финляндия). Концентрацию цитокинов рассчитывают по калибровочной кривой. Исследование проводят до и на 14 день лечения трихофитии. Увеличение спонтанной продукции ИЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл при снижении индуцированной продукции ИЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл указывает на истощение активности мононуклеаров, снижение индуцированной активности и возможный переход инфильтративной формы в нагноительную.

ИЛ-6 - цитокин, играющий центральную роль в воспалительном ответе. У здоровых лиц введение в среду инкубации ФГА обуславливает увеличение индуцированной продукции ИЛ-6. Значительное увеличение спонтанной продукции ИЛ-6 при нагноительных формах трихофитии обусловливает уменьшение потенциальной активности мононуклеаров в ответ на дополнительный стимул (введение в среду инкубации ФГА), что проявляется снижением индуцированной активности мононуклеаров крови (таблица).

Согласно протоколу исследования клиническую динамику со стороны процесса на коже, а также лабораторное тестирование 30 наблюдавшихся больных трихофитией проводили до и на 14 день традиционной медикаментозной терапии.

Исследования выполнены с помощью стандартных наборов реактивов фирм «Pharmacia» Швеция, «Flow» Великобритания, «Difco» Германия «Human» на микропланшетном фотометре Multiskan EX («ThermoLabSystems», Финляндия).

У ряда больных с инфильтративной формой трихофитией, несмотря на проводимую традиционную терапию, наблюдалось утяжеление процесса на коже, что проявлялось переходом инфильтративной формы в нагноительную. Параллельно с ухудшением клинической картины отмечались выраженные иммунологические изменения в показателях цитокинсинтезирующей активности мононуклеаров.

В доступной научно-медицинской и патентной литературе не было обнаружено сведений об определении показателей цитокинсинтезирующей активности мононуклеаров с целью прогнозирования перехода инфильтративной формы трихофитии в нагноительную. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «новизна».

Исследованиями авторов была впервые доказана возможность прогнозирования перехода инфильтративной формы трихофитии в нагноительную на основе исследования цитокинсинтезирующей активности мононуклеаров. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ прогнозирования иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Больной А., 12 лет, поступил на стационарное лечение в Республиканский кожно-венерологический диспансер с жалобами на высыпания на гладкой коже. После проведенного обследования выставлен диагноз: инфильтративная трихофития гладкой кожи туловища (7 очагов), обусловленная Trichophyton verrucosum. Проведено исследование по изучению цитокинсинтезирующей активности (ИЛ-6) мононуклеаров. До назначения стандартной терапии показатели уровня спонтанной продукции ИЛ-6 составили 1204,6, при индуцированной продукции ИЛ-6 - 1878,2. Больной было назначено стандартное лечение: гризеофульвин из расчета 18 мг на кг веса больной, а очаги поражения смазывались 2% спиртовым раствором йода утром и 10% серной мазью - вечером. На 14 день лечения показатели уровня спонтанной продукции ИЛ-6 составили 5112,3, индуцированной продукции ИЛ-6 - 3009,8. Несмотря на проводимую традиционную терапию, к 14 дню лечения наблюдалось утяжеление кожного процесса, что проявлялось появлением мелких пустул в очагах трихофитии. Был выставлен диагноз - нагноительная трихофития гладкой кожи и больному провели лечение согласно диагнозу по медико-экономическим стандартам.

Пример 2. Больная Н., 13 лет, поступила на стационарное лечение в Республиканский кожно-венерологический диспансер с жалобами на высыпания на гладкой коже и волосистой части головы. После проведенного обследования выставлен диагноз: инфильтративная трихофития гладкой кожи (5 очагов) и волосистой части головы (1 очаг), обусловленная Trichophyton mentagrophytes var. gypseum. Проведено исследование по изучению цитокинсинтезирующей активности (ИЛ-6) мононуклеаров. До назначения стандартной терапии показатели уровня спонтанной продукции ИЛ-6 составили 1202,6, при индуцированной продукции ИЛ-6 - 1418,8.

На 14 день проводимой традиционной терапии (гризеофульфин и наружное лечение) у больной наблюдалась положительная динамика - отмечалось обратное развитие воспалительных явлений в очагах поражения - гиперемия в очагах побледнела, контуры очагов сгладились, элементы сыпи разрешались, инфильтрация рассасывалась. Показатели уровня спонтанной и индуцированной продукции ИЛ-6 на 14 день лечения практически не изменились и составили 1204,8 и 1426,6 соответственно, что соответствует течению инфильтративной формы трихофитии без последующего утяжеления. К моменту выписки из стационара - очаги не контурировались, кожа в очагах имела обычную окраску, шелушение полностью прекратилось.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет достаточно быстро, точно, эффективно прогнозировать характер течения инфильтративных форм трихофитии и корректировать его соответствующей терапией.

Предлагаемым способом была проведена оценка вероятности возникновения перехода инфильтративных форм трихофитии в нагноительную у 30 больных с трихофитией и во всех случаях был достигнут указанный технический результат. Способ легко воспроизводим в условиях лаборатории поликлиники. Таким образом, заявляемое изобретение соответствует критерию патентоспособности «промышленная применимость»

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лабораторного способа прогнозирования течения трихофитии. В супернатантах культур мононуклеаров до и на 14 день лечения определяют показатели спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином продукции цитокина ИЛ-6 мононуклеарами крови твердофазным иммуноферментным анализом. При увеличении спонтанной продукции ИЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл и снижении индуцированной продукции ИЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл прогнозируют вероятность перехода инфильтративной формы трихофитии в нагноительную. Предлагаемый способ повышает точность диагностики и обеспечивает возможность направленной профилактики неблагоприятного течения заболевания. 1 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования перехода инфильтративной формы в нагноительную форму заболевания у больного зооантропонозной трихофитией, включающий определение количественного содержания показателя функциональной активности иммунокомпетентных клеток, отличающийся тем, что в супернатантах культур мононуклеаров в качестве показателя функциональной активности определяют уровень спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином продукции цитокина ИЛ-6 мононуклеарами крови твердофазным иммуноферментным анализом до и на 14 день лечения и при увеличении спонтанной продукции ИЛ-6 до 5158,3±218,4 пг/мл и снижении индуцированной продукции ИЛ-6 до 3056,3±223,5 пг/мл на 14 день лечения прогнозируют вероятность перехода инфильтративной трихофитии в нагноительную.