НОВАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПОБОЧНЫХ ЭФФЕКТОВ ПРОТИВОРАКОВОЙ ТЕРАПИИ Российский патент 2013 года по МПК A61K31/575 A61K31/15 A61K45/06 A61P35/00 

Изобретение относится к новым фармацевтическим композициям. Более конкретно, изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим в качестве активных веществ по меньшей мере один цитотоксический агент и по меньшей мере оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных.

Основные лекарственные средства, использующиеся в противораковой химиотерапии, могут быть классифицированы в зависимости от их активности. Так, различают

- цитотоксические агенты,

- гормоны и/или агенты, блокирующие секрецию гормонов или антагонистов,

- модификаторы иммунного ответа,

- моноклональные антитела.

Из этих агентов цитотоксические агенты используются, чтобы разрушить всю совокупность раковых клеток.

Большинство цитотоксических агентов взаимодействуют с дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК) клеток или ее предшественниками, они ингибируют синтез ДНК или вызывают необратимые повреждения ДНК. Некоторые цитотоксические агенты действуют после фазы транскрипции: они взаимодействуют с белками и ферментами, участвующими в пролиферации/делении клеток. Цитотоксические лекарственные средства не являются специфическими для раковых клеток, они действуют также на нормальные клетки. Именно вследствие этой неспецифичности возникает их токсичность.

Кроме того, в настоящем тексте термин "цитотоксический агент" должен пониматься как цитотоксический агент, благоприятно противораковый, возможно вызывающий у пациента симптомы периферических невропатий и/или повреждения нервной системы.

Действительно, хорошо известно, что одна из основных трудностей в химиотерапии злокачественных опухолей заключается в том, что все цитотоксические агенты, которые проявляют способность ингибировать пролиферацию опухолевых клеток, оказывают токсичные побочные эффекты на нормальные клетки.

Так, описаны гематологическая, желудочно-кишечная, дерматологическая токсичности, задержка роста у детей, гонадотоксичность, сердечная, легочная токсичности, гепатотоксичность, нефротоксичность, токсичность мочевого пузыря, ототоксичность, токсичность для эпителиальной ткани (венозной и мышечной) или же нейротоксичность, как, например, периферические невропатии.

Под периферическими невропатиями в контексте изобретения понимаются различные медицинские поражения периферического нерва, исключая поражения передних рогов спинного мозга. Периферические невропатии подразделяются на три большие группы:

- мононевропатии, ограниченные повреждением только одного нервного ствола;

- множественные мононевропатии, характеризующиеся последовательным поражением нескольких нервных стволов;

- и дистальные полиневропатии с диффузным и симметричным поражением четырех звеньев.

Клинические признаки включают амиотрофию, судороги, фаскуляцию и двигательную недостаточность, потерю чувствительности, тактильную или проприоцептивную гипоестезию, атаксию, гипоальгезию, потерю болевой чувствительности, тепловую гипоестезию, парестезии, дизестезии, гиперпатию, гиперальгию, аллодинию, отсутствие рефлексов, гипорефлексию (Stojkovic; La revue de médecine interne 27, (2006) 302-312).

Периферические невропатии могут быть вызваны, среди прочего, цитотоксическими агентами, использующимися при лечении рака.

Эти периферические невропатии иногда могут исчезнуть при прекращении приема указанных лекарственных средств. Однако иногда требуется несколько недель и даже месяцев, прежде чем появится улучшение.

Насколько известно авторам изобретения, и без отрицания современных знаний, не существует удовлетворительных подходов к лечению симптомов периферических невропатий или повреждений, причиненных нервной системе цитотоксическими агентами, в частности противораковыми цитотоксическими агентами, которое было бы лечением в сочетании с указанным лечением рака, в виде единой композиции, содержащей цитотоксический агент и агент, лечащий от симптомов периферических невропатий и/или повреждений нервной системы указанными агентами, или в виде разных композиций, вводимых одновременно или последовательно. Нежелательные побочные эффекты цитотоксических агентов вносят, в частности, ограничения в основное лечение и ограничивают ожидаемую пользу (Wickham, Clinical journal of oncology nursing, 11, (3), (2007), 361-376). Например, иногда приходится снижать дозы противораковых лекарственных средств при приеме или вводить более слабые дозы более часто, проводить перфузию в течение более длительного времени, или увеличить промежутки между приемами, или же прекратить лечение агентом в случае периферических невропатий, или чтобы уменьшить риск периферических невропатий.

Таким образом, в данной области имеется потребность в лечении и/или профилактике невропатий, вызванных цитотоксическими агентами, в частности, при их использовании в качестве противораковых средств.

Поэтому одной из целей настоящего изобретения является получение композиции, предназначенной для лечения рака, которая одновременно предупреждает и/или лечит нежелательный побочный эффект - периферические невропатии, ограничивая цитотоксический агент, использующийся для лечения рака.

С этой целью композиции согласно изобретению были разработаны в зависимости от следующих критериев:

- уменьшение побочных эффектов типа периферических невропатий, вызванных цитотоксическим агентом;

- цитотоксическая активность указанного агента, в частности указанного используемого противоракового агента, остается без изменений, даже улучшается из-за снижения побочных эффектов, лечение от рака может проводиться более длительное время, и/или вводимые дозы могут быть более высокими.

Настоящее изобретение отвечает этим требованиям. Оно предлагает решающие преимущества. Действительно, новые фармацевтические композиции по изобретению имеют цитотоксическую активность, связанную с количеством цитотоксического агента, присутствующего в композиции, и задерживают появление периферических невропатий и/или уменьшают болевые ощущения, вызванные указанным используемым цитотоксическим агентом.

Действительно, неожиданно и с удивлением заявитель обнаружил, что периферическую нейротоксичность цитотоксических агентов, в частности, использующихся в качестве противораковых агентов, можно значительно снизить, если вводить в организм указанные цитотоксические агенты в виде композиции, содержащей указанный цитотоксический агент и по меньшей мере оксим холест-4-ен-3-она или соединение семейства оксима холест-4-ен-3-она.

Таким образом, первым объектом изобретения является композиция, в частности фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере один цитотоксический агент, в частности противораковый цитотоксический агент и/или агент, вызывающий у пациента симптомы периферических невропатий и/или повреждения нервной системы, предпочтительно противораковый цитотоксический агент, вызывающий у пациента симптомы периферических невропатий и/или повреждения нервной системы, и по меньшей мере оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных.

Один неожиданный аспект изобретения заключается в том, что снижение периферической нейротоксичности было продемонстрировано с различными противораковыми агентами, о которых известно, что механизм их действия в отношении рака разный, как и механизм, приводящий к появлению периферических невропатий (Wickham, Clinical journal of oncology nursing, 11, (3), (2007), 361-376).

Один выгодный аспект изобретения заключается в том, что указанная фармацевтическая композиция дает возможность лечения или предупреждения периферических невропатий без изменения эффективности цитотоксического агента.

Согласно изобретению композиция может содержать в качестве цитотоксического агента по меньшей мере один противораковый цитотоксический агент, возможно имеющий периферические невропатии как нежелательный побочный эффект. Подразумевается, что композиция согласно изобретению в качестве цитотоксического агента может содержать несколько цитотоксических агентов, в частности противораковых и/или имеющих в качестве нежелательного побочного эффекта периферические невропатии, конкретно, цитотоксические противораковые агенты, имеющие в качестве нежелательного побочного эффекта периферические невропатии, или же смесь по меньшей мере одного такого агента с по меньшей мере одним другим цитотоксическим агентом, возможно противораковым, но не имеющим периферических невропатий как нежелательный побочный эффект.

Согласно изобретению предпочтительно, что цитотоксический агент, содержащийся в композиции по изобретению, может быть противораковым цитотоксическим агентом и/или агентом, имеющим в качестве нежелательного побочного эффекта периферические невропатии, и очень предпочтительно, противораковым цитотоксическим агентом, имеющим в качестве нежелательного побочного эффекта периферические невропатии.

В том же круге понятий подразумевается, что композиция, в частности фармацевтическая композиция по изобретению, может содержать одно или несколько соединений семейства оксима холест-4-ен-3-она.

В качестве цитотоксического агента, в частности, противоракового цитотоксического агента, известного как вызывающий периферические невропатии, можно назвать, в частности, производные платины, в частности, цисплатин и его производные, такие как карбоплатин и оксалиплатин, алкалоиды барвинка (алкалоиды vinca), в частности, винбластин, винкристин, виндезин или же винорелбин, или таксаны, как паклитаксел или доцетаксел.

Эти агенты предпочтительно используются согласно изобретению.

Как указывалось ранее, эти агенты могут использоваться согласно изобретению, индивидуально или в комбинации друг с другом или вместе с другим цитотоксическим агентом, в частности противораковым цитотоксическим агентом, точнее, с по меньшей мере одним другим цитотоксическим агентом, в частности, с другим противораковым цитотоксическим агентом, не имеющим в качестве побочного эффекта периферических невропатий.

Искомый результат может быть получен, когда композиция согласно изобретению, помимо одного или нескольких цитотоксических агентов, содержит в качестве действующего вещества по меньшей мере одно соединение, отвечающее формуле I, в частности оксим холест-4-ен-3-она.

Эти соединения формулы I, в частности оксим холест-4-ен-3-она и его производные, которые снижают или вылечивают периферические невропатии, описаны в международных заявках WO 2004/082581 и WO 2007/080270.

Таким образом, изобретение относится к композиции, в частности фармацевтической композиции, отличающейся тем, что она содержит по меньшей мере:

одно соединение формулы I

в которой

X означает группу =N-OH,

R означает группу, выбранную из

A означает атом водорода или вместе с B означает углерод-углеродную связь,

B означает атом водорода, гидроксигруппу или вместе с A означает углерод-углеродную связь,

C означает атом водорода, кетоновую группу или оксимовую группу (=NOH), или вместе с D означает углерод-углеродную связь,

D означает атом водорода или вместе с C означает углерод-углеродную связь,

E означает атом водорода или вместе с F означает углерод-углеродную связь,

F означает атом водорода или вместе с E означает углерод-углеродную связь,

или одну из его солей присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами, или один из его сложных эфиров, или одну из солей присоединения указанных сложных эфиров с фармацевтически приемлемыми кислотами, и по меньшей мере один цитотоксический агент, в частности, противораковый цитотоксический агент.

Эти соли присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами могут быть, например, солями, образованными с соляной, бромистоводородной, азотной, серной, фосфорной, уксусной, муравьиной, пропионовой, бензойной, малеиновой, фумаровой, янтарной, винной, лимонной, щавелевой, глиоксалевой, аспаргиновой кислотой, с алкансульфоновыми кислотами, такими как метан- или этансульфоновые кислоты, с арилсульфоновыми кислотами, такими как бензол- или пара-толуолсульфоновые кислоты, или с карбоновыми кислотами.

Под сложными эфирами согласно изобретению понимаются сложные эфиры оксима, которые могут быть получены по известным специалисту методам, например, реакцией этерификации между кислотой и гидроксиимином (или оксимом). В качестве примера сложных эфиров оксима можно назвать ацетаты, пропионаты, оксалаты, сукцинаты, тартраты, фумараты, малонаты, а также метансульфонаты, этансульфонаты, а также фосфаты. Термин "сложные эфиры оксима" может также означать эфиры, гидролизующиеся in vivo, например, метаболизацией.

Согласно изобретению понимается, что оксимовая группа означает два изомера, syn и anti, в смеси, или тот или другой по отдельности.

Предпочтительно, согласно изобретению используют по меньшей мере одно соединение формулы I, выбранное из соединений, для которых X означает оксимовую группу (=NOH), причем

- A вместе с B означают углерод-углеродную связь, C, D, означают атом водорода, E, F означают атом водорода или вместе означают углерод-углеродную связь, и R означает R1,

- A вместе с B означают углерод-углеродную связь, C, D означают атом водорода, E, F означают атом водорода, и R означает R2, или R3, или R4,

- A вместе с B означают двойную связь, C вместе с D означают углерод-углеродную связь, E, F означают атом водорода, и R означает R1 или R6,

- A вместе с B означают двойную связь, C вместе с D означают углерод-углеродную связь, E вместе с F означают углерод-углеродную связь, и R означает R1,

- E вместе с F означают двойную связь, C, D, A, B означают атом водорода, и R означает R1,

или одну из его солей присоединения с приемлемыми кислотами, или один из его сложных эфиров, или одну из солей присоединения указанных эфиров с приемлемыми кислотами.

Согласно изобретению, еще более предпочтительно соединение формулы I может быть выбрано из оксима холестан-3-она, оксима холест-4-ен-3-она, оксима холест-1,4-диен-3-она, очень предпочтительно из оксима холест-4-ен-3-она или оксима холест-1,4-диен-3-она, или из одной из его солей присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами, или одного из его сложных эфиров, или одного из эфиров солей присоединения.

Очень предпочтительно, соединение формулы I, используемое согласно изобретению, представляет собой оксим холест-4-ен-3-он.

Согласно изобретению понимается, что оксимовая группа означает два изомера syn и anti в смеси или по отдельности.

Согласно изобретению, цитотоксический агент, в частности противораковый цитотоксический агент, конкретнее агент, имеющий в качестве нежелательного побочного эффекта периферические невропатии, может быть агентом, выбранным из любых известных цитотоксических агентов, в частности, противораковых цитотоксических агентов, более конкретно, агентов, имеющих как нежелательный побочный эффект периферические невропатии. Можно назвать, в частности, цисплатин и его производные, такие, как карбоплатин и оксалиплатин, алкалоиды барвинка (vinca), такие как винбластин, винкристин, виндезин и винорелбин, или же таксаны, как доцетаксел и паклитаксел.

Согласно изобретению, предпочтительно могут использоваться оксалиплатин, карбоплатин, цисплатин, винбластин, винкристин или паклитаксел.

Очень предпочтительно, согласно изобретению используются оксалиплатин, винкристин или паклитаксел.

Термин "цитотоксический агент, имеющий в качестве нежелательного эффекта периферические невропатии", означает любой цитотоксический агент, в частности, любой противораковый цитотоксический агент, который в ходе лечения вызывает у пациента периферические невропатии.

Композиция согласно изобретению может находиться в различных формах, например, как единственная композиция, содержащая разные соединения, использующиеся согласно изобретению, а также в виде двух или более композиций, каждая из которых содержит по меньшей мере одно из разных соединений, применяемых согласно изобретению, причем указанные композиции вводят одновременно или последовательно.

Согласно изобретению предпочтительно, чтобы композиция трактовалась как единственная композиция, содержащая по меньшей мере два соединения, используемых согласно изобретению.

Под "фармацевтической композицией" в настоящем изобретении понимается композиция, компоненты которой являются фармацевтически приемлемыми. Например, когда предполагается пероральное введение, компоненты подходят или приемлемы для перорального введения.

В композиции по изобретению соединения могут предпочтительно присутствовать в физиологически эффективных дозах.

Так, например, согласно одной форме осуществления изобретения, цитотоксический агент и/или оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных могут каждый присутствовать в композиции в количестве от 0,1 до 2000 мг/мл.

Согласно другой форме осуществления изобретения, цитотоксический агент и/или оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных могут находиться в композиции при отношении цитотоксический агент/оксим холест-4-ен-3-она или производные, составляющем от 0,1 до 300.

Наконец, согласно другой предпочтительной форме осуществления, цитотоксический агент и/или оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных могут находиться в композиции в количестве каждый от 0,1 до 2000 мг/мл и при отношении цитотоксический агент/оксим холест-4-ен-3-она или производные, составляющем от 0,1 до 300.

Из композиций по изобретению в качестве предпочтительных можно назвать композицию, содержащую оксим холест-4-ен-3-она и оксалиплатин, композицию, содержащую оксим холест-4-ен-3-она и винкристин, а также композицию, содержащую оксим холест-4-ен-3-она и паклитаксел.

Композиция по настоящему изобретению может применяться на млекопитающих, в частности на человеке.

Согласно изобретению, соединения композиции могут находиться в общей галеновой форме.

Также согласно изобретению, каждое из соединений композиции может находиться в галеновой форме, идентичной или отличающейся от формы другого соединения.

Таким образом, понимается, что когда, согласно изобретению, соединения композиции находятся в общей галеновой форме, они будут вводиться одновременно одним и тем же способом введения.

Также подразумевается, что когда, согласно изобретению, каждое из соединений композиции находится в такой же галеновой форме, что и другое соединение, или в отличной форме, они могут вводиться либо одновременно, либо последовательно, одним или разными способами.

Предпочтительно, цитотоксический агент может вводиться ежедневно или с временным интервалом больше или меньше суток между двумя приемами, причем эти интервалы времени могут варьировать в ходе лечения. Предпочтительно, соединение формулы I может приниматься ежедневно, перед, во время или после введения противоракового средства, или перед, во время и после, или также перед и во время, перед и после, или во время и после приема цитотоксического агента. Можно также предусмотреть, что цитотоксический агент заменяется в ходе лечения одного и того же пациента, чтобы получить оптимизированный противораковый эффект.

В качестве лекарственных средств, оксим холест-4-ен-3-он или одно из его производных, в частности, соединения, отвечающие формуле I, их сложные эфиры, их соли присоединения с фармацевтически приемлемыми кислотами, а также соли присоединения указанных сложных эфиров с фармацевтически приемлемыми кислотами, могут быть составлены для введения через пищеварительный тракт или парентерально.

Лекарственные средства по изобретению дополнительно могут содержать по меньшей мере один другой терапевтически активный ингредиент, активный в отношении той же патологии или другой патологии, для одновременного, раздельного или разделенного во времени применения, в частности, при лечении пациента, страдающего раком.

Согласно изобретению, композиция может дополнительно содержать один или несколько физиологически приемлемых инертных эксципиентов или носителей, т.е. фармацевтически неактивных и нетоксичных. Можно назвать, например, солевые, изотонические, буферные растворы и т.д., совместимые с фармацевтическим применением и известные специалисту. Композиции согласно изобретению могут содержать один или несколько агентов или носителей, выбранных из диспергаторов, растворителей, стабилизаторов, консервантов и т.д.

Композиции согласно изобретению могут быть составлены в виде суспензий для инъекций, гелей, масел, таблеток, суппозиториев, порошков, желатиновых капсул, капсул и т.д., возможно, посредством галеновых форм или устройств, обеспечивающих пролонгированное и/или замедленное высвобождение. Для этого типа состава предпочтительно используют такой агент, как целлюлоза, карбонаты или крахмалы.

Можно предусмотреть, чтобы одно из активных соединений композиции по изобретению было составлено в виде раствора для инъекций, а другое или другие были, например, в форме желатиновой капсулы для перорального приема.

Введение может проводиться любым способом, известным специалисту, предпочтительно перорально или инъекцией, обычно внутрибрюшинно, интрацеребрально, межоболочечно, внутривенно, внутриартериально, внутримышечно или подкожно. Предпочтительно, противораковый агент вводят внутривенно, а соединение формулы I вводят перорально.

Для инъекций соединения обычно составляют в виде жидких суспензий, которые могут быть введены, например, с помощью шприца или перфузией. Следует понимать, что скорость и/или инъецированная доза, или, говоря в общем, вводимая доза, могут подбираться специалистом в зависимости от пациента, патологии, способа введения и т.д. Понятно, что могут проводиться неоднократные введения, при необходимости в комбинации с другими активными компонентами и/или любым наполнителем, приемлемым в фармацевтическом плане (буферные, солевые, изотонические растворы, в присутствии стабилизаторов и т.д.).

Изобретение может применяться на млекопитающих, в частности на человеке.

Обычно суточные дозы соединений будут минимальными дозами, чтобы получить желаемый терапевтический эффект. Эти дозы будут зависеть от множества факторов, в частности, способа приема, длительности приема, времени приема, скорости выведения соединения, продукта или различных продуктов, использующихся в комбинации с соединением, от возраста, массы тела и физического состояния пациента, а также от его истории болезни и от любой другой информации, известной в медицине.

Дозы противораковых соединений и соединений формулы I, например, оксим холест-4-ен-3-она, будут обычно составлять для человека от 0,001 до 100 мг на кг в сутки.

При необходимости суточная доза может вводиться в два, три, четыре, пять, шесть или более приемов в день или путем введения нескольких субдоз через подходящие интервалы в течение суток.

Понятно также, что лечение от рака может проводиться на основе некаждодневного приема, как это обычно и практикуется с противораковыми соединениями по изобретению.

Объектом изобретения является также применение композиции согласно изобретению для получения цитотоксического лекарственного средства, предназначенного для лечения рака, предупреждая и/или вылечивая побочные эффекты типа периферических невропатий, спровоцированных лечением рака.

Объектом изобретения является также применение композиции по изобретению для получения цитотоксического лекарственного средства, предназначенного для лечения или профилактики побочных эффектов типа периферических невропатий, вызванных лечением рака.

Другим объектом является также способ предотвращения появления побочных эффектов типа периферических невропатий при противораковом лечении с использованием композиции согласно изобретению.

Объектом изобретения является также применение по меньшей мере оксима холест-4-ен-3-она или одного из его производных, в частности соединения формулы I, в сочетании с цитотоксическим агентом, какой описан выше, для получения лекарственного средства, предназначенного для снижения побочных эффектов при лечении рака.

Объектом изобретения является также фармацевтический набор для лечения рака, включающий по меньшей мере одно цитотоксическое противораковое соединение и по меньшей мере одно соединение формулы I.

Следующие примеры иллюстрируют настоящую заявку.

Пример 1. Эффект оксима холест-4-ен-3-она на невропатии, вызванные сульфатом винкристин.

Эффект оксима холест-4-ен-3-она на тактильную аллодинию, вызванную накопленной дозой сульфата винкристина, оценивался на крысах.

Методы

Использовали взрослых самцов крыс WISTAR весом около 250 г. Сульфат винкристина вводили инъекцией внутривенно в дозе 200 мкг/кг в дни 1, 4 и 6 (суммарная накопленная доза 600 мкг/кг). Пороги отведения лап у животного при непатогенном механическом раздражении измеряли у крыс в дни 0, 3, 5, 7 и затем каждый день с десятого по четырнадцатый.

Оксим холест-4-ен-3-она (10, 30 и 100 мг/кг один раз в день) вводили перорально в дни 10 и 14 и измеряли пороги отведения лап через 4 ч после введения оксима холест-4-ен-3-она. Использовали по 8 крыс на тестируемую дозу.

В последний день лечения (день 14) сразу после испытания были взяты пробы плазмы у 3 крыс каждой группы, получавшей оксим холест-4-ен-3-она или наполнитель, для исследования фармакокинетики.

Пороги механического раздражения, при которых животные отводят задние лапы при механическом раздражении, измеряли, используя Dynamic Plantar Aesthesiometer (динамический подошвенный эстезиометр (Ugo Basile, Италия). Вкратце, в помещении с контролируемой температурой (около 22°C) каждое животное помещали в прозрачный кубический ящик из плексиглаза (22×16,5×14 см) с основанием из металлической решетки, дающим доступ снизу к его лапам, и оставляли на 15 минут перед испытанием для акклиматизации. Механическое возбуждение прикладывали к левой задней лапе с помощью неокисляющейся нити (диаметром 0,5 мм), действуя с силой, увеличивающейся по линейному закону (2,5 г/с). Силу (в г), при которой животное убирает лапу, регистрировали автоматически. Каждый порог отведения лапы рассчитывали как среднее по трем последовательным опытам, проведенным с 5-минутным интервалом экспериментатором, не знавшим, какое лечение применялось к каждому из животных. Устанавливали предел в 50 г, чтобы предотвратить повреждения тканей.

Маточный раствор оксима холест-4-ен-3-она в кукурузном масле готовили в первый день эксперимента и вводили один раз в день через зонд (5 мл/кг). Оксим холест-4-ен-3-она измельчали в тонкий порошок и смешивали с необходимым количеством наполнителя, чтобы получить концентрации 0,2, 6 и 20 мг/мл, затем все гомогенизировали перемешиванием с помощью магнитной мешалки в течение по меньшей мере 10 минут. Между приемами маточные растворы хранили при 4°C. Статистический анализ проводили, применяя двухфакторный ANOVA, с последующим тестом Tukey, чтобы сравнить эффект от испытуемого соединения относительно наполнителя.

Результаты

Тактильная аллодиния развивалась в первые два дня, следующие за первой инъекцией винкристина (день 3, P=0,015). Она была более выражена на следующий день после второй инъекции (день 5, P<0,001) и была полностью установившейся после третьей инъекции (день 7, P<0,001). Аллодиния оставалась значительной в течение 8 дней после последней инъекции винкристина (дни 7-14, P<0,001).

Пероральный прием одной дозы оксима холест-4-ен-3-она существенно снизил аллодинию, вызванную винкристином, при максимально высокой дозе (100 мг/кг), в сравнении с животными, получавшими наполнитель (день 10, P<0,001), тогда как меньшие дозы не оказывали существенного влияния на подавление аллодинии в первый день приема (день 10, 10 мг/кг, p=0,086; 30 мг/кг, P=0,232). Ежедневная обработка оксимом холест-4-ен-3-она (10, 30 и 100 мг/кг), начиная с дня 11 и до 14 (то есть от второго до последнего дня введения оксима холест-4-ен-3-она) существенно снизила аллодинию, вызванную винкристином (во всех случаях P<0,05).

Пример 2. Эффект оксим холест-4-ен-3-она на гиперчувствительность к боли на модели крыс, имеющих невропатии, вызванные паклитакселом.

Животные

Использовали взрослых самцов крыс Sprague-Dawley.

Паклитаксел (6 мг/мл в смеси 50:50 с кремофором и этанолом) разбавляли непосредственно перед использованием раствором хлорида натрия 0,9‰ до концентрации 2 мг/мл и вводили внутрибрюшинно в объеме 1 мл/кг в дни 0, 2, 4 и 6.

Свежие растворы оксима холест-4-ен-3-она (Sigma) в кукурузном масле готовили каждую неделю в концентрации 0,6 или 6,0 мг/мл. Этот раствор вводили животному через зонд в объеме 5 мл/кг.

Было сформировано три группы из 12 животных, получавших паклитаксел:

- группа 1: оксим холест-4-ен-3-она, 3 мг/кг перорально, ежедневно в течение 17 дней (день(-1)-день(15), начиная за день перед первой инъекцией паклитаксела и продолжая 9 дней после последней инъекции паклитаксела). В дни, когда вводили оксим холест-4-ен-3-она и паклитаксел, оксим холест-4-ен-3-она вводили в 9 ч, а паклитаксел в 13 ч;

- группа 2: так же, как выше, с тем исключением, что оксим холест-4-ен-3-она вводили в дозе 30 мг/кг;

- группа 3: так же, как выше, с тем исключением, что животные получали одинаковый объем наполнителя (кукурузного масла);

Животных приучали к обстановке испытаний в течение 3 отдельных дней, и затем было организовано 3 сеанса в день, чтобы установить нормальный ответ на раздражение посредством волосков фон Фрея (VFH), осуществляя давление 4 г или 15 г (4 г VFH или 15 г VFH). Нормальные крысы редко убирали лапы при раздражении 4 г VFH; таким образом, усиление ответа после приема паклитаксела есть признак механической аллодинии. Нормальные крысы убирали лапы при раздражении в 15 г VFH в 10-20% времени; таким образом, повышенная частота ответа на это раздражение указывает на повышенную болевую чувствительность к механическим воздействиям.

Животных помещали в клетки с полом из металлической сетки, дающим доступ снизу к лапам животных. Каждый механический раздражитель прикладывали в области пятки левой задней лапы. Отмечалось наличие или отсутствие убирания лапы. Это повторяли 5 раз на каждой задней лапе, и реакции животного представляли в виде процентной доли ответа (5 отведений лапы при раздражении 15 г VFH соответствует показателю 50%).

Крыс приучали к среде испытания в течение 3 дней. Испытания на эталонный уровень чувствительности к усилиям 4 г и 15 г VFH проводили в течение 3 дней подряд; среднее за два последних дня соответствовало уровню чувствительности перед обработкой паклитакселом. Поведенческие тесты для проверки эффекта паклитаксела начались в день 16 и повторялись в дни 19, 22, 25, 28, 31, 35 и 40, экспериментатором, не знавшим, какое лечение применялось к каждому из животных.

Значения площади под кривой (AUC) рассчитывали для каждой группы в течение периода от дня 16 до дня 40 (от начала появления боли из-за паклитаксела до окончания эксперимента). Значения AUC анализировали с помощью ANOVA с последующим "попарным" сравнением с группой, получавшей наполнитель, по t-тесту Даннета.

Результаты

У животных, получавших лечение паклитакселом, которые получали наполнитель, развилась существенная механическая аллодиния и механическая гиперальгия, которые стали заметны в день 16 и сохранялись в течение 40 дней наблюдений.

Дозы 3 мг/кг и 30 мг/кг оксима холест-4-ен-3-она существенно подавляли (p<0,01) развитие механических аллодинии и гиперальгии. Величина наблюдаемого эффекта была практически одинакова для обеих доз (59-53% подавления аллодинии и 45-40% подавления гиперальгии при 3 мг/кг и 30 мг/кг, соответственно). Подавление аллодинии и гиперальгии проявилось на первый день испытания (день 16) и продолжалось в течение всего эксперимента.

Пример 3. Эффект оксима холест-4-ен-3-она на невропатии, вызванные оксалиплатином

Эффект оксима холест-4-ен-3-она на аллодинию к холоду, вызванную накопленными дозами оксалиплатина, оценивали на крысах.

Методы

Использовали взрослых самцов крыс Sprague-Dawley весом около 150 г. Оксалиплатин вводили внутрибрюшинно по 3 мг/кг три раза в неделю в течение трех недель (суммарная накопленная доза 27 мг/кг). Время отведения лапы, а также величина ответа животного на непатогенные тепловые раздражения с помощью капли ацетона измеряли у крыс перед и после обработки оксалиплатином в дни 1 и 18, соответственно, и затем в каждый день обработки оксимом холест-4-ен-3-она, начиная с дня 22 и до дня 25.

Оксим холест-4-ен-3-она (1, 10 и 100 мг/кг один раз в день) вводили перорально со дня 22 до дня 25 и измеряли пороги отведения лап через 4 ч после приема оксима холест-4-ен-3-она. На каждую тестируемую дозу использовали от 7 до 9 крыс.

В первый и последний день обработки (день 22 и день 25, соответственно), сразу после испытания брали пробы плазмы у 4 крыс каждой группы, получавших оксим холест-4-ен-3-она, чтобы исследовать фармакокинетику.

Для каждого животного время реакции, при котором животные отводят лапу после нанесения капли ацетона, рассчитывали как среднее по шести последовательным опытам, проведенным с 5-минутным интервалом экспериментатором, не знавшим, какая обработка применялась к каждому из животных. Устанавливался предел 20 секунд. Величина ответа на каплю ацетона оценивалась по шкале от 0 до 3: 0 (нет реакции); 1 (быстрое отведение лапы); 2 (продолжительное отведение лапы); 3 (повторное отведение лапы с вылизыванием и/или покусыванием). Оценку по каждому из шести опытов суммировали.

Маточный раствор оксима холест-4-ен-3-она в кукурузном масле готовили в первый день эксперимента и вводили один раз в день через зонд (5 мл/кг). Оксим холест-4-ен-3-она измельчали в тонкий порошок и смешивали с необходимым количеством наполнителя, чтобы получить концентрации 0,2, 2 и 20 мг/мл, затем все это гомогенизировали путем перемешивания магнитной мешалкой в течение по меньшей мере 10 минут. Между приемами маточные растворы хранили при 4°C. Статистический анализ проводили, применяя двухфакторный ANOVA с последующим тестом Бонферрони, чтобы сравнить эффект от испытуемого соединения относительно наполнителя.

Результаты

После трех недель приема оксалиплатина развивалась аллодиния к холоду (день 18, P<0,001).

Пероральный прием единой дозы оксима холест-4-ен-3-она существенно снизил аллодинию, вызванную оксалиплатином, при максимально высокой дозе (100 мг/кг), в сравнении с животными, получавшими наполнитель (день 22, P<0,05). Подавление аллодинии оксимом холест-4-ен-3-она в дозе 100 мг/кг продолжалось после ежедневного приема в дни с 22 по 25. Введение меньших доз оксима холест-4-ен-3-она не оказывало существенного влияния на подавление аллодинии в первый день приема. Начиная с третьего дня приема, более слабые дозы оксима холест-4-ен-3-она (1 и 10 мг/кг) существенно снижали аллодинию к холоду, вызванную оксалиплатином (день 24, P<0,05).

Изобретение относится к области фармацевтики и медицины и касается фармацевтической композиции для лечения рака с одновременной профилактикой и/или лечением побочных эффектов, содержащей в качестве активных веществ по меньшей мере винкристин, паклитаксел или оксалиплатин и по меньшей мере оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 2 пр.

1. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения рака с одновременной профилактикой и/или лечением побочных эффектов типа периферических невропатий, вызванных лечением рака, содержащая по меньшей мере винкристин, паклитаксел или оксалиплатин и по меньшей мере оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных.

2. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что винкристин, паклитаксел или оксалиплатин и/или оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных находится каждый в количестве от 0,1 до 2000 мг/мл.

3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что винкристин, паклитаксел или оксалиплатин и/или оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных находятся в отношении цитотоксический агент/оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных, составляющем от 0,1 до 300.

4. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что винкристин, паклитаксел или оксалиплатин и/или оксим холест-4-ен-3-она или одно из его производных находится каждый в количестве от 0,1 до 2000 мг/мл и при отношении противораковое соединение/оксим холест-4-ен-3-она или его производные, составляющем от 0,1 до 300.

5. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она содержит оксим холест-4-ен-3-она и винкристин.

6. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она содержит оксим холест-4-ен-3-она и оксалиплатин.

7. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она содержит оксим холест-4-ен-3-она и паклитаксел.

8. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что соединения в указанной композиции находятся в одинаковой или разной галеновой форме.

9. Применение композиции по любому из пп.1-8 для получения цитотоксического лекарственного средства, предназначенного для профилактики и/или лечения побочных эффектов типа периферических невропатий, вызванных лечением рака.