СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ Российский патент 2014 года по МПК G01N33/53 

Область применения: предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике.

Уровень техники

Проблема доклинической диагностики гестационных осложнений по-прежнему далека от решения, несмотря на то, что она имеет высокую медико-социальную значимость. Неблагоприятные условия существования плода в период максимальной пластичности органов и систем обусловливают «программирование» развития болезней цивилизации в будущем - ожирения, артериальной гипертензии, инсулинрезистентного диабета и др.

Исследования последних лет значительно изменили представление о механизмах и времени формирования осложнений гестационного процесса. Сегодня акценты в перинатальной диагностике состояния и развития плода сместились к ранним срокам беременности, поскольку в течение первых 12 недель гестации происходит формирование функциональной гемодинамической системы, обеспечивающей все виды обмена веществ и гомеостатическое равновесие между двумя генетически различающимися организмами. Переосмысление накопленных знаний приводит к пониманию того, что развитие патологии во второй половине беременности происходит вследствие реализации ряда патогенетических механизмов на этапе имплантации и плацентации.

Поиск биологических маркеров, обладающих высокой предикторной значимостью в прогнозировании осложнений, обусловливающих формирование перинатальной патологии, остается актуальным. В настоящее время вектор лабораторной диагностики задан в направлении выявления универсальных регуляторных факторов и их сочетаний, определение которых позволит получать полезную информацию для клинических суждений.

Среди осложнений беременности одно из ведущих мест занимает плацентарная недостаточность (ПН), во многом связанная с нарушением гемодинамики плаценты и снижением ее перфузии. По данным литературы, частота выявления плацентарной недостаточности достигает 45%, а перинатальная заболеваемость - 70% [1, 2]. Проблемы доклинической диагностики ПН связаны с невозможностью визуализации нарушения кровообращения в системе «мать-плацента-плод» с ранних сроков беременности. Прогностическая ценность способов прогнозирования ПН во второй половине беременности [3, 4, 5] является низкой, поскольку не оставляет достаточного количества времени для профилактики и предотвращения развития данного патологического состояния.

Аналогами данного изобретения являются способы доклинической диагностики и прогнозирования плацентарной недостаточности, основанные на определении биохимических показателей (малонового диальдегида, общей антиокислительной активности плазмы, активности каталазы, концентрации гидроперекисей липидов [6]), а также содержания молекул средней массы [7] в первом триместре беременности. Недостатками указанных способов являются: использование небезопасных химических реактивов (в том числе трихлоруксусной кислоты), отсутствие унифицированных методик определения вышеназванных биохимических параметров, необходимость специального оборудования (поскольку в стандартный набор фильтров для спектрофотометра не входит фильтр с длиной волны 254 нм) и специальных условий для работы с химическими реагентами (оснащения вытяжным боксом и т.п.).

Прототипом предложенного изобретения является способ прогнозирования фетоплацентарной недостаточности, заключающийся в определении в сыворотке крови женщины с 5 недель гестации содержания трансформирующего фактора роста и эпидермального фактора роста методом иммуноферментного анализа [8].

Несмотря на очевидные достоинства способа-прототипа (возможность прогнозирования ПН с 5 недель беременности с использованием готовых тест-систем и оснащения стандартным оборудованием для иммуноферментного анализа), к недостаткам данного метода можно отнести невозможность прогнозирования развития ПН с более ранних сроков беременности. Авторы прогнозируют развитие фетоплацентарной недостаточности при уровне трансформирующего фактора роста 270 пг/мл и выше, эпидермального фактора роста - 560 пг/мл и выше, в то же время другими исследователями установлено значительное снижение содержания эпидермального фактора роста (EGF) в ранние сроки беременности, осложнившейся впоследствии клиническими проявлениями ПН, в том числе и с исходом в задержку внутриутробного развития плода [9]. Кроме того, в приведенных авторами способа-прототипа клинических примерах уровень вышеуказанных маркеров лишь на несколько пкг/мл превышает их пограничные значения, что может укладываться в погрешность измерения анализатора и существенно снижать чувствительность и специфичность метода.

В результате многолетних исследований, проводимых в ФГБУ «Уральский научно-исследовательский институт охраны материнства и младенчества» Министерства здравоохранения и социального развития, установлено, что важную роль в формировании ПН играет нарушение механизмов иммунологической регуляции, в частности, продукции провоспалительных цитокинов, которое определяет изменения функционального состояния эндотелия, одного из ключевых звеньев выработки регуляторных полипептидов, влияющих на развитие и рост плаценты, а также формирование ее сосудистой системы. Совокупность данных факторов может иметь высокую предикторную значимость для прогнозирования ПН.

Сущность изобретения

Целью изобретения является разработка способа прогнозирования развития плацентарной недостаточности с ранних сроков беременности (с момента наступления беременности), заключающегося в определении содержания интерлейкина 6 (IL-6), интерлейкина 8 (IL-8), растворимой сосудистой молекулы межклеточной адгезии (sVCAM), васкуло-эндотелиального фактора роста (VEGF) и big-эндотелина в сыворотке крови с последующим вычислением прогностического индекса (PI).

Способ осуществляют следующим образом. Забор периферической венозной крови для исследования проводят натощак, в утренние часы, в сухую чистую пробирку в количестве 5 мл. Путем центрифугирования получают сыворотку крови, в которой проводят определение содержания интерлейкина 6 (IL-6), интерлейкина 8 (IL-8), растворимой сосудистой молекулы межклеточной адгезии (sVCAM), васкуло-эндотелиального фактора роста (VEGF) и big-эндотелина методом иммуноферментного анализа в соответствии с инструкциями фирм-производителей. Измерение оптической плотности образцов выполняют на иммуноферментном анализаторе «SUNRISE» фирмы «TECAN» (Австрия).

Полученные значения используют для вычисления прогностического индекса (PI) по формуле, разработанной с использованием метода дискриминантного анализа:

PI=0,63697Х₁-0,02367Х₂+0,00235Х₃-0,03931X₄-15,99295Х₅-2,11547,

где

Х₁- концентрация IL-6, пг/мл;

Х₂- концентрация IL-8, пг/мл;

Х₃ - концентрация sVCAM, нг/мл;

Х₄ - концентрация VEGF, пг/мл;

Х₅ - концентрация big-эндотелина, фмоль/мл.

При РI>0 прогнозируют развитие плацентарной недостаточности во второй половине беременности, а при РI<0 делают заключение о низком риске развития данного патологического состояния.

Чувствительность предлагаемого способа составляет 77,4% специфичность - 85,6%. Эффективность способа - 81,5%.

Пример 1. Патрушева И.В. (история родов №3698). Обследовалась амбулаторно в научной поликлинике ФГБУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвития России 18.12.2009 г. Первобеременная, первородящая. Диагноз: беременность малого срока (3-4 недели), бесплодие I (5 лет), артериальная гипертензия I ст., хронический пиелонефрит в стадии ремиссии, мочекаменная болезнь, гиперандрогения, ожирение II ст., миопия II ст., эрозия шейки матки. При лабораторном исследовании сыворотки крови получены следующие показатели: содержание IL-6 - 3,24 пг/мл, IL-8 - 24,07 пг/мл, sVCAM - 632,0 нг/мл, VEGF - 0,1 пг/мл и big-эндотелина - 0,025 фмоль/мл. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, равен 0,466, положительное значение индекса свидетельствует о высоком риске развития плацентарной недостаточности, в связи с чем пациентка отнесена в группу риска по формированию данного осложнения беременности. В сроке 20-21 нед по результатам ультразвукового и допплерометрического исследования выявлена субкомпенсированная форма плацентарной недостаточности (маловодие, нарушение маточно-плацентарного кровообращения I А ст.), а в 27-28 нед - задержка роста плода I ст. по асимметричному типу.

Пример 2. Бессонова Д.В. (история родов №1117). Обследовалась амбулаторно в научной поликлинике ФГБУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвития России 24.11.2009 г. Повторнобеременная, повторнородящая. Диагноз: беременность 6-7 недель, отягощенный акушерский анамнез (перинатальная потеря), носитель ЦМВ, нарушение жирового обмена I ст., хронический пиелонефрит в стадии ремиссии, угроза прерывания. Проведено определение в сыворотке крови содержания IL-6, IL-8, sVCAM, VEGF и big-эндотелина. Уровень IL-6 составил 4,7 пг/мл, IL-8 - 26,42 пг/мл, sVCAM - 165 нг/мл, VEGF - 0 пг/мл и big-эндотелина - 0,038 фмоль/мл. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, равен 0,858, положительное значение индекса свидетельствует о высоком риске развития плацентарной недостаточности, в связи с чем пациентка отнесена в группу риска по формированию данного осложнения беременности. В сроке 33-34 недель беременности по данным ультразвукового и допплерометрического исследования выявлена субкомпенсированная форма плацентарной недостаточности (маловодие) с исходом в задержку роста плода I ст.

Пример 3. Набоких Ю.С. (история родов №3726). Обследовалась амбулаторно в научной поликлинике ФГБУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвития России 08.12.2009. Повторнобеременная, повторнородящая. Диагноз: беременность 7-8 недель, отягощенный акушерский анамнез (рубец на матке от операции кесарева сечения), синдром Дауна у первого ребенка, Rh-отрицательная кровь без титра антител, варикозное расширение вен нижних конечностей, уреаплазмоз, угроза прерывания. При лабораторном исследовании сыворотки крови получены следующие показатели: концентрация IL-6 - 3,4 пг/мл, IL-8 - 2,87 пг/мл, sVCAM - 322,15 нг/мл, VEGF - 0,0 пг/мл и big-эндотелина - 0,019 фмоль/мл. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, равен 0,435, положительное значение индекса свидетельствует о высоком риске развития плацентарной недостаточности, в связи с чем пациентка отнесена в группу риска по формированию данного осложнения беременности. В сроке 28-29 нед по результатам ультразвукового и допплерометрического исследования выявлена компенсированная форма плацентарной недостаточности с исходом в задержку роста плода I ст. по асимметричному типу в 32-33 нед беременности.

Пример 4. Ходатович А.Ю. (история родов №1591). Обследовалась амбулаторно в научной поликлинике ФГБУ «НИИ ОММ» Минздравсоцразвития России 25.01.2010. Повторнобеременная, первородящая. Диагноз: беременность 8-9 нед, бесплодие 1-5 лет, аппендэктомия в анамнезе, никотинозависимость, аллергический ринит легкой степени тяжести, хронический гастрит в стадии ремиссии, хронический холецистит в стадии ремиссии, миопия II ст., носитель ЦМВ, угроза прерывания, киста желтого тела справа. При лабораторном исследовании сыворотки крови получены следующие показатели: содержание IL-6 - 3,02 пг/мл, IL-8 - 35,7 пг/мл, sVCAM - 261 нг/мл, VEGF - 0,44 пг/мл и big-эндотелина - 0,061 фмоль/мл. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, равен -1,416. Отрицательное значение прогностического индекса свидетельствует о низком риске развития плацентарной недостаточности. При дальнейшем наблюдении, по данным ультразвуковых и допплерометрических исследований в течение беременности (22 нед, 28 нед и 36 нед) состояние плаценты и плода оценивалось как нормальное, соответствующее сроку гестации.

Приведенные клинические примеры показывают, что нарушение продукции провоспалительных цитокинов и маркеров функционального состояния эндотелия в ранние сроки беременности является патогенетической основой развития ПН во второй половине гестации. Вышеизложенное подтверждает прогностическую ценность заявляемого способа.

Таким образом, заявляемый способ прогнозирования развития плацентарной недостаточности в сравнении с известными имеет следующие преимущества:

1. Способ является малоинвазивным, поскольку прогнозирование осуществляется по результатам исследования периферической крови.

2. Способ позволяет прогнозировать риск развития плацентарной недостаточности с использованием эндогенных регуляторов, вовлеченных в патогенез данного осложнения беременности.

3. Предлагаемый способ позволяет с ранних сроков гестации (с момента наступления беременности) выявить группу риска по развитию плацентарной недостаточности, что дает возможность осуществления превентивных мероприятий, направленных на профилактику формирования данного патологического состояния.

Источники информации

1. Павлова Н.Г. Плацентарная недостаточность: учебно-методическое пособие / Н.Г.Павлова, О.Н.Аржанова, М.С.Зайнулина, А.В.Колобов // СПб.: ООО «Издательство Н-Л», 2007. - 32 с.

2. Оразмурадов А.А. Плацентарная недостаточность: реалии и перспективы. Информационное письмо с комментарием проф. В.Е.Радзинского «Плацентарная недостаточность - опять загадки и предположения» / А.А.Оразмурадов, С.В.Апресян, В.Е.Радзинский. - М., Status Praesens. - 2009. -32 с.

3. Башмакова Н.В. Способ прогнозирования компенсированной и субкомпенсированной форм хронической фетоплацентарной недостаточности во второй половине беременности / Н.В.Башмакова, Л.П.Заварзина, А.Д.Мазуров // Патент на изобретение №2130185 от 10.05.1999 г.

4. Чистякова Г.Н. Способ прогнозирования развития фетоплацентарной недостаточности в течение беременности / Г.Н.Чистякова, Г.А.Черданцева // Патент на изобретение №2300770 от 10.06.2007 г.

5. Макаренко Л.В. Способ прогноза развития хронической фетоплацентарной недостаточности у женщин с ожирением во втором триместре беременности / Л.В.Макаренко, Н.В.Башмакова, А.Д.Мазуров // Патент на изобретение №2346280 от 10.02.2009 г.

6. Морозов В.Н. Способ ранней диагностики формирующейся плацентарной недостаточности / В.Н.Морозов, А.А.Хадарцев, Ю.В.Лазарева, Ю.К.Гусак, Ю.В.Ветрова // Патент на изобретение №2180113 от 27.02.2002 г.

7. Смиренина И.В. Способ доклинического прогнозирования плацентарной недостаточности / И.В.Смиренина, Т.Ю.Пестрикова // Патент RU №2148256 от 27.04.2000 г.

8. Орлов А.В. Способ прогнозирования фетоплацентарной недостаточности / А.В.Орлов, И.И.Крукиер, Т.Н.Погорелова, В.В.Авруцкая, Л.А.Донченко // Патент RU №2238567 от 20.10.2004 г.

9. Кудряшова А.В. Роль иммунной системы в формировании задержки внутриутробного развития плода / А.В.Кудряшова, Н.Ю.Сотникова, Л.В.Посисеева, И.А.Панова, М.В.Веденеева // Иваново, 2009. - 240 с.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике и касается способа прогнозирования развития плацентарной недостаточности с ранних сроков беременности. Способ включает: определение в сыворотке крови в ранние сроки беременности содержания интерлейкина 6 (IL-6), интерлейкина 8 (IL-8), растворимой сосудистой молекулы межклеточной адгезии (sVCAM), васкуло-эндотелиального фактора роста (VEGF) и big-эндотелина. Затем определяют прогностический индекс (PI) по формуле:

PI=0,63697Х₁-0,02367Х₂+0,00235Х₃-0,03931Х₄-15,99295Х₅-2,11547, где X₁ - концентрация IL-6, пг/мл; Х₂- концентрация IL-8, пг/мл; Х₃ - концентрация sVCAM, нг/мл; Х₄- концентрация VEGF, пг/мл; Х₅ - концентрация big-эндотелина, фмоль/мл. При РI>0 прогнозируют развитие плацентарной недостаточности во второй половине беременности, а при РI<0 делают заключение о низком риске развития данного патологического состояния. Предлагаемый способ является малоинвазивным, позволяет с ранних сроков гестации выявить группу риска по развитию плацентарной недостаточности, что дает возможность осуществления превентивных мероприятий, направленных на профилактику формирования данного патологического состояния. Чувствительность предлагаемого способа составляет 77,4% специфичность - 85,6%. Эффективность способа - 81,5%. 4 пр.

Способ прогнозирования развития плацентарной недостаточности,
отличающийся тем, что с ранних сроков беременности определяют содержание интерлейкина 6 (IL-6), интерлейкина 8 (IL-8), растворимой сосудистой молекулы межклеточной адгезии (sVCAM), васкуло-эндотелиального фактора роста (VEGF) и big-эндотелина в сыворотке крови женщины, вычисляют прогностический индекс (PI) по формуле:
PI=0,63697Х₁-0,02367Х₂+0,00235Х₃-0,03931X₄-15,99295Х₅-2,11547, где
X₁ - концентрация IL-6, пг/мл;
Х₂-концентрация IL-8, пг/мл;
Х₃ - концентрация sVCAM, нг/мл;
Х₄ - концентрация VEGF, пг/мл;
Х₅ - концентрация big-эндотелина, фмоль/мл
и при PI более 0 прогнозируют развитие плацентарной недостаточности во второй половине беременности, а при PI менее 0 делают заключение о низком риске развития данного патологического состояния.