СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВИСКОЭЛАСТИЧНОГО ПРОТЕКТОРА ЭНДОТЕЛИЯ РОГОВИЦЫ Российский патент 2014 года по МПК A61K9/08 A61K31/728 A61K38/04 A61P27/02 

Описание патента на изобретение RU2535137C1

Изобретение относится к химии природных соединений, в частности к способу приготовления вискоэластичного протектора эндотелия роговицы, и может найти свое применение в производстве вискоэластиков для офтальмологии.

Известна фармацевтическая композиция на основе гликозаминогликанов, в частности глазные капли, действующими веществами которых являются гликозоаминогликаны в количестве 0.1 мас.% в физиологическом растворе, выделенные из плаценты человека (патент РФ 2216331, МКИ7 A61K 31/726, A61K 9/08, A61F 9/00, A61P 27/00). Данные гликозоаминогликаны представляют собой смесь, состоящую из гиалуроновой кислоты (46-57%) и гепарина с гепарансульфатом (2-7%).

Известен протектор эндотелия роговицы «Визитон-1», содержащий сульфатированные гликозоаминогликаны, производное целлюлозы, буферные соли и воду (патент РФ 2114587, МКИ6 A61F 9/00, A61K 31/715), предназначенный для защиты эндотелия роговицы от повреждения при экстракции катаракты с имплантацией ИОЛ.

Известен препарат "Глекомен", содержащий сульфатированные гликозоаминогликаны и ионы меди (патент РФ №215158 от 28.10.1999 г.), предназначенный для активации пролиферации эндотелия роговицы.

Одним из лучших вискоэластиков является раствор натрия гиалуроната в сбалансированном солевом буфере. В мировой практике широко применяются следующие вискоэластичные протекторы на основе натрия гиалуроната: "Vislube" (Chemedica AG, Германия); "Amvisc", "Amvisc plus" (Chiron vision, Франция); "Oculocrom" (Croma Pharma GmbH, Австрия); "Healon" (Pharmacia & Upjohn, Швеция).

Однако все перечисленные вискоэластики не включают в свой состав вещества, способные нормализовать биохимические процессы в стекловидном теле, кроме того, они мало доступны из-за высокой стоимости.

Известна фармацевтическая композиция, содержащая водорастворимую смесь гликозоаминогликанов, выделенных из роговицы глаз крупного рогатого скота, в которых гликозоаминогликаны взяты в количестве 0,1-1,0 мас.%, остальное - физиологический раствор (патент РФ 2062079, МКИ6 A61F 9/06).

Недостатком этой фармацевтической композиции на основе гликозоаминогликанов является то, что она имеет ограниченный срок хранения, требует определенной осторожности при хранении и транспортировке.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому техническому решению является способ приготовления вискоэластичного протектора эндотелия роговицы (Патент RU №2234310, опубл. 20.08.2004). Фармацевтическую композицию готовят: 2,0 г натриевой соли гиалуроновой кислоты (источник получения - бактериальная ферментация, фирма "Sigma-Aldrich", США) растворяют в 98,0 мл фосфатного буферного раствора с pH 7,0-7,4. Растворение ведется при температуре 20°C в течение 48 часов. В процессе растворения раствор подвергают двукратному перемешиванию в течение 8 часов. Получают раствор с вязкостью 290 Па/с. Раствор подогревают на водяной бане до 70°C, фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 2,0 мкм, расфасовывают в стеклянные шприцы по 1 мл и автоклавируют при 120°C в течение 8 минут. Получают стерильный раствор с вязкостью 85 Па/с.

Недостатком такого способа приготовления вискоэластичного протектора эндотелия роговицы является то, что не обеспечивают нормализацию биохимических процессов в стекловидном теле.

Технический результат изобретения - восстановление биохимических процессов в эндотелиальном слое роговицы при постоянном увлажнении роговицы глаза и повышение биосовместимости, что способствует быстрой реабилитации после травм и/или оперативного лечения.

Задача решается тем, что в способе приготовления вискоэластичного протектора эндотелия роговицы, включающем растворение исходного терапевтического компонента с избыточной вязкостью в фосфатном буфере, фильтрацию и стерилизацию до получения требуемого значения вязкости, в качестве исходного терапевтического компонента используют 3% раствора нативной гиалуроновой кислоты, после растворения вводят 1% пептидного комплекса, состоящий из короткоцепочных пептидов - олигопептидов, а стерилизацию проводят ионизирующим излучением в диапазоне радиационного излучения от 78×107 до 11×108 Мрад.

Для деструкции гиалуроновой кислоты применяли γ-излучение в диапазоне от 78×107 до 11×108 Мрад, что позволило получить гиалуроновую кислоту с молекулярной массой (Mw) 40-80 кДа. При этом воздействие на водный раствор гиалуроновой кислоты γ-излучения до 78×107 Мрад не позволяет получить низкомолекулярную гиалуроновую кислоту, а воздействие выше 11×108 Мрад вызывает полное разрушение ГК, что и в том, и в другом случае ведет к отсутствию лечебного эффекта, так как повышенная вязкость протектора может вызывать катаракту, а полное разрушение ГК не дает лечебного эффекта.

Способ осуществляют следующим образом. Готовят 3% раствор нативной гиалуроновой кислоты. Гиалуроновую кислоту разводят в 100 мл фосфатного буферного раствора с pH 7,0-7,4. Получают раствор с вязкостью 300 Па/с. Добавляют 1% пептидного комплекса, состоящего из короткоцепочных пептидов - олигопептидов, состав которых представлен в таблице 1.

Таблица 1 Исследуемые параметры Хим. формула Масса Дельта массы в нанопотоковом режиме Масса в отн.ед. GlyTrpIle C19H26N4O4 374.19541 -2.33 10.692 IleAspIle C16H29N3O6 359.20564 12.97 8.674 PheArgPro C20H30N6O4 418.23285 -0.29 9.024 GlnHisHis C17H24N8O5 420.18697 -5.74 17.732 AlaTrpLys C20H29N5O4 403.22195 -5.76 8.934 ProHisTyr C20H25N5O5 415.18557 -11.10 14.407 ThrTrpTrp C26H29N5O5 491.21687 -12.84 9.460 LysPheThr C19H30N4O5 394.22162 -7.25 8.854 LysArgMet C17H35N7O4S 433.24712 10.73 9.102 PheCysMet C17H25N3O4S2 399.12865 4.19 11.108 IleIle C12H24N2O3 244.17869 8.67 11.038 AspLysLys C16H31N5O6 389.22743 16.59 8.863 TrpPro C16H19N3O3 301.14264 -18.38 10.672 GluThr C9H16N2O6 248.10084 3.47 5.500 Desmosine C24H40N5O8 526.28769 -15.37 9.523

Как видно из таблицы 1, пептидные комплексы имеют различный аминокислотный состав с варьирующей молекулярной массой 244-459 кДа. В обнаруженных пептидах превалируют алифатические (лейцин, изолейцин, аланин, глицин) и полярные незаряженные аминокислотные остатки: треонин, пролин, гистидин, серина, также полярные заряженные аминокислотные остатки: аргинин, глутамин, аспарагин, лизин, аргинин. Кроме того, присутствуют димеры изолейцинов, и полимерные трипептиды, в том числе пептиды, содержащие ароматические аминокислотные остатки (триптофан) и полярные незаряженные аминокислотные остатки.

Важно, что в пептидной фракции присутствует десмозин (аминокислота, производная лизина). Благодаря своей разветвленной структуре, которая имеет четыре аминокислотные группы, одна молекула десмозина может входить одновременно в четыре пептидные цепи. Благодаря этому дисахаридные остатки деструктурированной гиалуроновой кислоты стабилизируются и не образуют вновь макромолекулярные комплексы в процессе стерилизации ионизирующим излучением.

Далее раствор подогревают на водяной бане до 70°C, фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 2,0 мкм, расфасовывают в стеклянные шприцы по 1 мл и стерилизуют радиационным методом по ГОСТ Р ISO 11137 в центре радиационной медицины (г. Москва) в диапазоне гамма излучения от 78×107 до 11×108 Мрад. Стерилизацию проводят ионизирующим излучением, вследствие чего вязкость раствора снижается, происходит деструкция гиалуроновой кислоты в свою очередь входящие в состав препарата пептиды стабилизируют гиалуроновую кислоту. Получают стерильный раствор с вязкостью 90 Па/с.

Стерилизацию ионизирующим излучением проводят в диапазоне радиационного излучения от 78×107 до 11×108 Мрад, т.к. при этом снижается молекулярная масса и вязкость раствора, что отражено в таблице 2, где показана зависимость параметров сред немассовой молекулярной массы (Mw) от поглощенной дозы радиационного излучения.

Таблица 2 Доза, Мрад Mw, кДа Статистическая вязкость водного раствора ГК, дл/г 0 1800 21,0 78×107 180 8,5 11×108 150 5,2 18×108 90 1,3

Для изучения влияния созданного препарата, содержащего пептидный комплекс, на роговицу и другие структуры переднего отрезка глаза, на базе вивария Оренбургского государственного университета проведены экспериментальные исследования на 12 кроликах (24 глаза) породы Шиншилла с использованием ранее разработанных стандартных токсико-гигиенических методов изучения полимерных материалов для внутриглазного использования. Для этого все кролики были поделены на 2 группы: контрольную группу (6 кроликов), использующую препарат по прототипу, и вторую группу из 6-ти кроликов, которым применяли препарат вискоэластичный протектор эндотелия роговицы. Для контрольной группы животных применяли вископротектор "Вискомет", представляющий собой раствор гидроксипропилметилцеллюлозы (производитель - Юнимед Технолоджис Лтд., Индия). В переднюю камеру глаз вводили препараты в количестве 0,2 мл.

Были поставлены 3 серии эксперимента. Исследование выполнено совместно с д.м.н., профессором Нотовой С.В.

1. Биопроба - введение препарата в переднюю камеру глаза кролика с последующей биомикроскопией.

Исследования проводились на 12 животных. Биомикроскопия проводилась через 24 часа после введения препаратов. Воспалительной реакции или каких-либо признаков раздражения не наблюдалось. Конъюктива оставалась спокойной, без инъекции сосудов. Роговица была прозрачной, блестящей, зеркальной. Влага передней камеры прозрачна. Радужка рельефна. Имплантированный материал интактен. Отека эпителия роговицы, преципитации и гиперемии не наблюдалось. Разницы между опытом и контролем не отмечено.

2. Для исследования эндотелиального слоя роговицы применяли контактный зеркальный эндотелиальный микроскоп "TOPCON SP-3000P". Исследования эндотелия роговицы кроликов проводились через 3, 7, 14, и 30 дней после введения препаратов.

Экспериментальные исследования эндотелиального пласта роговицы животных свидетельствовали об отсутствии качественных и количественных изменений эндотелиальных клеток и об идентичности микроскопической картины на опытных и контрольных глазах кроликов. Количество эндотелиальных клеток составило в среднем 3035±20 кл/мм, что соответствует среднестатистической норме.

3. Патогистологическое изучение глаз опытных и контрольных кроликов в сроки 3 и 30 дней после введения "Вискомет" и разработанного препарата вискоэластичного протектора эндотелия роговицы в переднюю камеру показало, что во всех глазах роговица оставалась без изменений, эпителий ее сохранился на всем протяжении, параллельность роговичных коллагеновых пластин и клеточных элементов не нарушена. Десцеметова оболочка хорошо выражена на всем протяжении, слой эндотелиальных клеток без патологических изменений.

Таким образом, по сравнению с прототипом, заявляемый способ позволяет получить эффективный биосовместимый стерильный вискоэластичный протектор с заданной вязкостью. Изобретение обеспечивает нормализацию биохимических процессов в стеловидном теле (за счет входящих в состав пептидов), предупреждает тяжелые осложнения, быструю реабилитацию после операций (за счет содержания деструктурированной гиалуроновой кислоты), препарат способен длительное время пребывать в глазу, а при необходимости легко вымывается, не токсичен.

Похожие патенты RU2535137C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВИСКОЭЛАСТИЧНОГО ПРОТЕКТОРА ЭНДОТЕЛИЯ РОГОВИЦЫ 2003
  • Гусева О.Ю.
RU2234310C1
КОМПЛЕКСНОЕ КОСМЕТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО 2013
  • Бурцева Татьяна Ивановна
  • Рахматуллин Рамиль Рафаилевич
  • Бурлуцкая Ольга Ивановна
  • Адельшин Абай Ижбулатович
RU2524663C1
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНАЯ СУБСТАНЦИЯ ДЛЯ ОФТАЛЬМОЛОГИИ 2004
  • Петренко Александр Егорович
  • Багров Сергей Николаевич
  • Ронкина Тамара Ильинична
  • Малышев Владимир Борисович
RU2272635C1
СПОСОБ ЗАЩИТЫ ВНУТРЕННИХ СТРУКТУР ГЛАЗА ОТ УЛЬТРАЗВУКОВОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ПРИ ФАКОЭМУЛЬСИФИКАЦИИ 1999
  • Багров С.Н.
  • Маклакова И.А.
  • Тимошкина Н.Т.
  • Ходжаев Н.С.
RU2193375C2
ИРРИГАЦИОННЫЙ РАСТВОР ДЛЯ ОФТАЛЬМОЛОГИИ 2005
  • Петренко Александр Егорович
  • Багров Сергей Николаевич
  • Ронкина Тамара Ильинична
  • Малышев Владимир Борисович
RU2288702C1
СРЕДСТВО ДЛЯ КОНСЕРВАЦИИ ДОНОРСКОЙ РОГОВИЦЫ 2010
  • Тахчиди Христо Периклович
  • Борзенок Сергей Анатольевич
  • Малюгин Борис Эдуардович
  • Ролик Ольга Ивановна
  • Комах Юрий Алексеевич
  • Мороз Зинаида Ивановна
  • Ковшун Евгения Владимировна
RU2450515C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТВОРА И РАСТВОР ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ И ПОВРЕЖДЕНИЙ РОГОВИЦЫ 2006
  • Анисимова Светлана Юрьевна
  • Ларионов Евгений Викторович
  • Анисимов Сергей Игоревич
RU2336862C2
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АНТИАНГИОГЕННАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ 2013
  • Лихванцева Вера Геннадьевна
  • Акопян Владимир Сергеевич
  • Семенова Наталья Сергеевна
  • Кузьмин Кирилл Анатольевич
RU2526825C1
ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И ПОВРЕЖДЕНИЙ РОГОВИЦЫ ГЛАЗА 2004
  • Петренко А.Е.
  • Багров С.Н.
  • Ронкина Т.И.
  • Малышев В.Б.
RU2259833C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАТЕРИАЛА ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ОФТАЛЬМОЛОГИИ "СКЛЕРОПЛАНТ" 2005
  • Маклакова Ирина Александровна
  • Гаврилова Татьяна Марковна
RU2290899C1

Реферат патента 2014 года СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВИСКОЭЛАСТИЧНОГО ПРОТЕКТОРА ЭНДОТЕЛИЯ РОГОВИЦЫ

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой способ приготовления вискоэластичного протектора эндотелия роговицы, включающий растворение исходного терапевтического компонента с избыточной вязкостью в фосфатном буфере, фильтрацию и стерилизацию до получения требуемого значения вязкости, отличающийся тем, что в качестве исходного терапевтического компонента используют 3% раствора нативной гиалуроновой кислоты, после растворения вводят 1% пептидный комплекс, состоящий из аминокислоты десмозин и следующих короткоцепочных пептидов-олигопептидов: GlyTrpIle; IleAspIle; PheArgPro; GlnHisHis; ProHisTyr; ThrTrpTrp; LysPheThr; LysArgMet; PheCysMet; IleIle; AspLysLys; TrpPro; GluThr, а стерилизацию проводят ионизирующим излучением в диапазоне радиационного излучения от 78×107 Мрад до 11×108 Мрад. Изобретение обеспечивает восстановление биохимических процессов в эндотелиальном слое роговицы при постоянном увлажнении роговицы глаза и повышение биосовместимости, что способствует быстрой реабилитации после травм и/или оперативного лечения. 2 табл.

Формула изобретения RU 2 535 137 C1

Способ приготовления вискоэластичного протектора эндотелия роговицы, включающий растворение исходного терапевтического компонента с избыточной вязкостью в фосфатном буфере, фильтрацию и стерилизацию до получения требуемого значения вязкости, отличающийся тем, что в качестве исходного терапевтического компонента используют 3% раствора нативной гиалуроновой кислоты, после растворения вводят 1% пептидный комплекс, состоящий из аминокислоты десмозин и следующих короткоцепочных пептидов-олигопептидов: GlyTrpIle; IleAspIle; PheArgPro; GlnHisHis; ProHisTyr; ThrTrpTrp; LysPheThr; LysArgMet; PheCysMet; IleIle; AspLysLys; TrpPro; GluThr, а стерилизацию проводят ионизирующем излучением в диапазоне радиационного излучения от 78×107 Мрад до 11×108 Мрад.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2014 года RU2535137C1

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ВИСКОЭЛАСТИЧНОГО ПРОТЕКТОРА ЭНДОТЕЛИЯ РОГОВИЦЫ 2003
  • Гусева О.Ю.
RU2234310C1
ПРОТЕКТОР ЭНДОТЕЛИЯ 1995
RU2108093C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТВОРА И РАСТВОР ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ И ПОВРЕЖДЕНИЙ РОГОВИЦЫ 2006
  • Анисимова Светлана Юрьевна
  • Ларионов Евгений Викторович
  • Анисимов Сергей Игоревич
RU2336862C2
US 4141973 A, 27.02.1979
Eda M et
al “Protective effect on the corneal endothelium and remaining effect at the anterior chamber for three different kinds of viscoelastic devices”, Nihon Ganka Gakkai Zasshi
Пломбировальные щипцы 1923
  • Громов И.С.
SU2006A1

RU 2 535 137 C1

Авторы

Бурцева Татьяна Ивановна

Рахматуллин Рамиль Рафаилевич

Бурлуцкая Ольга Ивановна

Адельшин Абай Ижбулатович

Даты

2014-12-10Публикация

2013-08-20Подача