СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВЫСОКОГО РИСКА ФОРМИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИИ АДЕНО-ТОНЗИЛЛЯРНОЙ СИСТЕМЫ У ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/48 G01N33/50 

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования высокого риска формирование хронической патологии адено-тонзилярной системы у часто болеющих детей (ЧБД).

Проблема часто болеющих детей остается высокоактуальной для педиатрии. К 7-8 годам у 40% ЧДБ формируются очаги хронической инфекции [1, 3, 4, 5, 20, 16, 12]. Среди механизмов частых ОРЗ (острое респираторное заболевание) наибольшее внимание уделено патологическим изменениям в системе иммунитета [3, 8, 10, 19, 13, 17, 11]. Особый интерес в этом плане представляет исследование уровня провоспалительных цитокинов ИЛ-8, ИЛ-17, активно участвующих в реализации воспалительного процесса при вирусно-бактериальной инфекции[17, 19]. Одним из основных цитокинов является ИЛ-8 [25, 27]. Синтез и секреция нейтрофильных гранулоцитов ИЛ-8 приводит к быстрой амплификации острого воспалительного процесса и хронизации патологического процесса. В литературе имеются работы, в которых изучалось действие ИЛ-17, его роль в формировании воспаления с последующей хронизацией патологии у взрослых людей. ИЛ-17 участвует в воспалительных процессах в тканях как индуктор освобождения провоспалительных цитокинов. Персистирующая вирусная инфекция способна индуцировать дисбаланс в системе протеолитических ферментов - тканевых матриксных металлопротеиназ (ММР) и их ингибиторов. Обширное семейство ММР играют ключевую роль в тканевом ремоделировании, хроническом воспалении [21, 26, 22]. Некоторые исследователи предлагают определять уровень ММР в качестве маркеров воспалительного процесса. До сих пор в литературе нет данных о действии ИЛ-17, 8 на клетки при воспалительном процессе у ЧБД, о влиянии их на активацию соответствующих ММР-2, -9 [9, 14, 15]. Поэтому представляет актуальность проведение дополнительных исследований для изучения особенностей воспалительного процесса у ЧБД посредством оценки уровня провоспалительных цитокинов во взаимосвязи с определением активности ММР, позволяющих сформировать различные группы и категории ЧБД для повышения эффективности их диспансеризации.

Наиболее близким к предлагаемому является способ прогнозирования повышенного риска формирования у детей 3-7 лет хронической отоларингологической патологии, включающий биохимическое исследование слюны [RU 2483310 0,27.05.2013].

Новая техническая задача - наиболее своевременное определение высокого риска формирования хронической патологии адено-тонзилярной системы у часто болеющих детей для проведения ранних профилактических мероприятий направленных на их предотвращение.

Для решения поставленной задачи в способе прогнозирования высокого риска формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у часто болеющих детей путем проведения биохимического исследования слюны определяют уровень интерлейкина-17 и ММР-9 и при уровне интерлейкина-17 выше 5 пг/мл и уровня ММР-9 выше 10 нг/мл прогнозируют высокий риск формирование хронической патологии адено-тонзиллярной системы у часто болеющих детей.

Способ осуществляют следующим образом. В период ремиссии производят забор 1-2 мл слюны. Далее определяют уровень интерлейкина-17 и ММР-9 методом иммуноферментного анализа (Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. 1991, Москва: Высшая школа) с применением серийно выпускаемого набора реагентов, например, компании БЕСТ. При уровне интерлейкина-17 выше 5 пг/мл и повышения уровня ММР-9 выше 10 нг/мл прогнозируют высокий риск формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у ЧБД. Таких детей относят к группе риска по развитию хронической патологии адено-тонзиллярной системы.

Интерлейкин-17 (IL-17) представляет собой полученную из Т-клеток провоспалительную молекулу, которая стимулирует эпителиальные, эндотелиальные и фибробластные клетки к выработке других воспалительных цитокинов и хемокинов, включая IL-6, IL-8, G-CSF и МСР-1.

IL-17 также проявляет синергизм с другими цитокинами, включая TNF-α и IL-1β, дополнительно индуцируя экспрессию хемокинов [31]. IL-17, воздействуя на различные типы клеток, проявляет плейотропную биологическую активность. IL-17 также способен индуцировать поверхностную экспрессию ICAM-1, пролиферацию Т-клеток, а также рост клеток-предшественников человека CD34⁺ и их дифференцировку в нейтрофилы. Было также установлено, что IL-17 вовлечен в костный метаболизм, и высказано предположение о том, что он играет важную роль в патологических состояниях, характеризующихся наличием активированных Т-клеток и выработкой TNF-α.Таким образом, подобно IL-17 потенциально может давать вклад в патологию воспалительных заболеваний [32].

Основная биологическая функция ММР (тканевые матриксные металопротеиназы) заключается в удалении компонентов внеклеточного матрикса. Металлопротеазы регулируют действие ростовых факторов: сосудистого эндотелиального фактора роста, рецептора фактора роста фибробластов, эпителиального фактора роста и инсулиноподобного фактора роста. ММР-2,9 способствуют активации трансформирующего фактора роста β, являющегося хемоатрактантом для моноцитов, высвобождая его из матрикса [23, 17, 24, 26]. Отщепление CD44, опосредованное МТ1-ММП, ассоциировано с клеточной миграцией. Под воздействием протеолиза ММП некоторые компоненты внеклеточного матрикса начинают демонстрировать скрытые биологические функции: так деградация коллагена 1-го типа коллагеназами ассоциирована с активизацией остеокластов.

Деградация межклеточного матрикса (ММ) необходима для протекания многих физиологических процессов: эмбриогенеза, морфогенеза, ангиогенеза, инволюции ткани, миграции, адгезии и др. Нарушение регулируемой деградации ММ может приводить к развитию многих патологических состояний.

Прогностические критерии, предложенные на основании изученных данных клинических и экспериментальных исследований

По предложенному способу обследовано 100 часто болеющих детей, которые были разделены на группы:

1 - ЧБД без патологии лор органов (15 детей).

2 - ЧБД, с гипертрофией лимфоидной ткани носоглотки 45 детей (аденоиды 1-2 степени, гипертрофия миндалин 1-2 степени-(2 группа здоровья));

3 - ЧБД, имеющие хроническую адено-тонзиллярную патологию 40 детей (хронический аденоидит, хронический тонзиллит - (3 группа здоровья));

Критерии включения служили:

1) ЧБД (заболеваемость ОРЗ более 5 раз год), в том числе имеющие адено-тонзиллярную патологию.

2) Возраст от 4 до 6 лет.

3) Период ремиссии между ОРЗ не менее 1 мес.

4) Добровольное согласие родителей на участие в исследовании.

Критерии исключения:

1) Дети, имеющие пороки развития внутренних органов, врожденные нарушения системы иммунитета.

2) Дети, рожденные от матерей ВИЧ+ или инфицированные ВИЧ.

3) Больные дети в острый период респираторной инфекции и при обострении хронической патологии других органов и систем.

4) Дети с отягощенным аллергоанамнезом или имеющие аллергию.

5) Дети, находящиеся в остром периоде адаптации (первые 30 дней) в ДДУ.

После того как дети были разделены на группы, было показано, что 2 группа находится в зоне риска по формированию хронической патологии адено-тонзиллярной системы.

У 39 из 45 детей 2 группы выявлен высокий уровень ИЛ-17 (≥5 пг/мл) и высокий уровень ММР-9 (≥10 нг/мл), что дало основание отнести их к группе риска развития хронической патологии адено-тонзиллярной системы у ЧБД. Почти у 90% детей из 3 группы Ил-17 и ММР-9 были повышены, что доказывает влияние этих цитокинов на развитие хронической патологии. Также дети, относящиеся к 1 группе, имели низкий уровень Ил-17, ММР-9 или в норме, что показывает нормальное значение этих цитокинов вне очага хронического воспаления.

Статистический расчет производился по методу Краскела-Уоллиса, а наличие корреляции по методу Спирмена. По методу Краскела-Уоллиса при сравнении групп детей между собой выявлено достоверное отличие 2 и 3 групп от 1 группы здоровых детей для всех цитокинов (Таблицы 2 и 4). По методу Спирмена при сравнении цитокинов (Ил-17, ММР-9) со степенью поражения адено-тонзиллярной системы выявлено достоверное различие при продукции в различных группах соответствующих цитокинов (Таблицы 1 и 3).

Пример 1. Ребенок С. Поступил в отделение инфекционно-педиатрическое с жалобами на Т39, боль в горле, насморк. В анализах крови было обнаружено: лейкоцитоз, повышение СОЭ, моноцитоз, анемия 1 степени. В ОАМ без патологии. Объективно: со стороны верхних дыхательных путей было выявлено аденоиды 2 степени, гиперемия зева, в лакунах гнойный налет. Со стороны других органов отклонений не выявлено. Диагноз: лакунарная ангина, неуточненная, средней степени тяжести. Соп: аденоиды 2 степени.

Через 1,5 месяца (в период ремиссии) дополнительно была исследована слюна по предложенному способу. Методом ИФА в слюне определен уровень ИЛ-17 - 12,44 пг/мл (выше 5 пг/мл) и повышенный уровень ММР-9 - 22 нг/мл (норма 10 нг/мл) и ММР-2 - 4 нг/мл (норма 2 нг/мл).

Ребенок, согласно изобретению, отнесен к группе высокого риска по развитию хронической патологии адено-тонзиллярной системы, что и было подтверждено дальнейшим наблюдением за пациентом (через 6 месяцев после проведения обследования, включавшего: OAK, ОАМ, кал на я/г, копрологию, Б/крови, консультации ЛОР врача, был диагностирован диагноз - хронический тонзиллит, компенсированная форма).

Пример 2. Ребенок П. Поступил в отделение инфекциооно-педиатрическое, с жалобами на Т39, насморк. В анализах крови было обнаружено: лейкоцитоз, повышение СОЭ. В ОАМ без патологии. Объетивно: со стороны верхних дыхательных путей было выявлено гиперемия зева. Со стороны других органов отклонений не выявлено. Диагноз: ОРЗ, ринофаринготонзиллит. Через 1,5 месяца (в период ремиссии) дополнительно была исследована слюна по предложенному способу. Методом ИФА в слюне определен уровень ИЛ-17 - 3,22 пг/мл (ниже 5 пг/мл) и нормальные значения ММР-9 (1,6 нг/мл и 5 нг/мл соответственно).

Ребенок, согласно изобретению, отнесен к группе низкого риска по развитию хронической патологии адено-тонзиллярной системы, что и было подтверждено дальнейшим наблюдением за пациентом (через 6 месяцев после проведения обследования, включавшего: OAK, ОАМ, кал на я/г, копрологию, Б/крови, консультации ЛОР врача, был диагностирован диагноз - аденоидит 1 степени)

Применение предлагаемого изобретения позволяет своевременно определить высокий риск формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у ЧБД и проводить ранние профилактические мероприятия, направленные на их предотвращение.

Источники информации

1. Альбицкий В.Ю., Баранов А.А. Часто болеющие дети. Клинико-социальные аспекты. Пути оздоровления. Саратов. 1986. С. 45.

2. Богомильский М.Р., Круговская Н.Л. Особенности хронических аденоидитов у детей с атопией // Вестник РГМУ. 2008.

3. Ершов Ф.И., Наровлянский А.Н., Мезенцева М.В. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях // Цитокины и воспаление. 2004, т. 3, №1, с. 3-6.

4. Железникова Г.Ф., В.В.Иванова. Иммунопатогенез осложненного, затяжного или хронического течения инфекций у детей и подходы к иммунокоррекции // Детские инфекции. 2003, №3, с. 58-61.

5. 3апруднов A.M. Клинико-патогенетические аспекты заболеваний органов дыхания у часто болеющих детей. - М., 1996.

6. Заплатников А.Л. Клинико-патогенетическое обоснование иммунотерапии и иммунопрофилактики вирусных и бактериальных заболеваний у детей. Автореф. дисс. д.м.н. - М., 2003.

7. Коровина Н.А., Заплатников А.Л., Чебуркин А.В., Захарова И.Н. Часто и длительно болеющие дети; современные возможности иммунореабилитации. Руководство для врачей. - М., 2001.

8. Кетлинский С.А., Симбирцев А.С. Цитокины. - СПб.: ООО Изд-во «Фолиант», 2008. - 552 с.

9. Лазарев В.Н. Хронический тонзиллит: Руководство для врачей. Детская оториноларингология. - М., 2005. - 308 с.

10. Латаш В.Г., Кузнецов СИ. // Медицинская иммунология. 2003. №5-6. С. 577-582.

11. Намазова Л.С. Часто болеющие дети / Л.С Намазова, P.M. Торшхоева // Материалы для интерактивного семинара. - М., 2005.

12. Острые респираторные заболевания у детей: лечение и профилактика. Научно-практическая программа Союза педиатров России. 2002. С. 73.

13. Петров Р.В., Лопухин Ю.М., Чередеев А.Н. и др. Оценка иммунного статуса человека: Методические рекомендации. М. 1984.

14. Плужников М.С., Левин М.Я., Атнашева P.P. Показатели местного иммунитета ротоглотки при хроническом декомпенсированном тонзиллите в сочетании с разными формами фарингитов // Российская оториноларингология. - 2003. - №2. - С.176-180.

15. Самоткин М.Б. - Вегетативный статус детей с гиперплазией глоточной миндалины. - Новости оториноларингологии и логопатологии. - 1999 - №1(17) - с. 71-74.

16. Самсыгина Г.А. Часто болеющие дети: проблемы патогенеза, диагностики и терапии // Педиатрия. - 2004. - №1. - С.66-73.

17. Сенцова Т.Б, Ревякина В.А. Современные иммуномодуляторы в практике педиатра // Российский аллергологический журнал. Сб. статей «Часто болеющие дети». Materia medica. М., 2006, с. 41-43.

18. Самсыгина Г.А. Педиатрия 2005; 1: 66-73.

19. Сизякина Л.П., Андреева И.И. Справочник по клинической иммунологии. Ростов-на-Дону, 2005. 448 с.

20. Самсыгина Г.А., Фитилев С.Б., Левин A.M. // Педиатрия. - 2002. - №2. - С.81-86.

21. Хасигов П.З. Роль металлопротеиназ матрикса в развитии диабетической нефропатии / П.З. Хасигов [и др.] // Биохимия. - 2000. - Т.65, №5. - С.613-619.

22. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммунология 2001; 4: 4-6.

23. Baker А.В. Metalloproteinase inhibitors: biological actions and therapeutic opportunities / A. Baker, D. Edwards, G. Murphy // J. Cell Science. - 2002. - Vol.115. - P.3719-3727.

24. Brown D.L. Clinical and biochemical results of the metalloproteinase inhibition with subantimicrobial doses of doxycycline to prevent acute coronary syndromes (MIDAS) pilot trial / D.L. Brown [et al.] // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 2004. - Vol.24. - P.733-8.

25. Baggiolini, M, Devald, B, Moser, B. Interleukin-8 and related chemotactic cytocines: CXC and CC chemokines. Adv. Immunol. 1994. 55: 97-179.

26. Bengatta S., Arnould C, Letavernier E. et al. MMP9 and SCF Protect from Apoptosis in Acute Kidney Injury. JASN 2009; 20(4): 787-797.

27. Baggiolini, M., Dewald, B. and Moser, B. Interleukin-8 and related chemotactic cytokines - CXC and CC chemokines // Adv. Immunol. 1994. Vol.55. P.97.

28. Brook I., Shah K. Bacteriology of adenoids and tonsils in children with recurrent adenotonsillitis // Annals of Otology, Rhinology and Laryngology. 2001; 110: 844-848.

29. Brandtzaeg P. Immune functions of nasopharyngeal lymphoid tissue // Adv Otorhinolaryngol. 2011; 72: 20-24.

30. Cellular localisation of interleukin-8 and its inducer, tumor necrosis factor-alpha in psoriasis B.J. Nickoloff, G.D. Karabin, C.E.M. Griffiths e.a. // Am.J. Pathol. 1991. Vol.138. P.129-140.

31. Cranylocyte chemotactic protein / interleukin 8 induces plasma leakage and neutrophil accumulation in rabbit skin / Rampart M, Van Damme J, Zonnekeyn L, e.a. // Am.J. Phatol. 1989. Vol.135. P.21-25.

32. Tenderenda E, Zoch-Zwierz W, Wasilewska A, et al. Matrix metalloproteinases 2 and 9 and their tissue inhibitors 1 and 2 in the urine of children with pyelonephritis. Pol Merkur Lekarski. 2009; 27(157): 10-13.

Приложения

Таблица 1

Корреляционная связь между группами ЧБД продукцией ИЛ-17,8 и ММр-2,9

Примечание: p<,050000® достоверное различие

Таблица 2

Сравнение исследуемых групп между собой по методу Краскела-Уоллиса для ММР-2 и 9.

Примечание: p=,00000® достоверное различие с группой здоровых

р=,0155®® достоверное различие с группой здоровых

Таблица 3

Корреляционная связь между состоянием лимфоэпителиальной ткани носоглотки у ЧБД на продукцию ИЛ-17, ММр-2,9

Примечание: p<,050000® достоверное различие

Таблица 4

Сравнение исследуемых групп между собой по методу Краскела-Уоллиса для Ил-17 и 8.

Примечание: p=,00000® достоверное различие с группой здоровых

Таблица 1 Парные вариации n Spearman r t p-level Ил-17 и группы 100 0,227474® 2,438831® 0,016349® Ил-8 и группы 100 0,135910 1,432230 0,154939 ММР-9 и группы 100 0,655588 0,686237 0,494021 ММР-2 и группы 100 0,006424 0,067070 0,946649

Таблица 2 Группы пациентов n ММР-2 ММР-9 Здоровые 15 0,661276 0,530573 Гипертр., 45 2,237503 5,311241® 5,082420® Хр. заб, 40 2,911708®® 4,849334® 4,699522® Таблица 3

Парные вариации N Spearman r t p-level Ил-17 и диагноз 100 0,556651® 6,995651® 0,00000® ММР-9 и диагноз 100 0,455486® 5,341705® 0,000001® ММР-2 и диагноз 100 -0,201257® -2,14507® 0,34167®

Таблица 4 Группы пациентов n Ил-17 Ил-8 Здоровые 15 1,021072 0,536040 Гипертр., 45 5,529719^® 4,167265^® 1,224413 Хр. заб, 40 6,178156^® 4,748290^® 1,847407

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования высокого риска формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у часто болеющих детей (ЧБД). Сущность способа состоит в том, что определяют уровень интерлейкина-17 и ММР-9 в слюне и при уровне интерлейкина-17 выше 5 пг/мл и уровне ММР-9 выше 10 нг/мл прогнозируют высокий риск формирование хронической патологии адено-тонзиллярной системы у ЧБД. Использование заявленного способа позволяет своевременно определить высокий риск формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у ЧБД и проводить ранние профилактические мероприятия, направленные на их предотвращение. 4 табл., 2 пр.

Способ прогнозирования высокого риска формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у часто болеющих детей путем проведения биохимического исследования слюны, отличающийся тем, что определяют уровень интерлейкина-17 и ММР-9 и при уровне интерлейкина-17 выше 5 пг/мл и уровне ММР-9 выше 10 нг/мл прогнозируют высокий риск формирования хронической патологии адено-тонзиллярной системы у часто болеющих детей.