СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ МАСТИТА У КОРОВ В ПЕРИОД ЛАКТАЦИИ Российский патент 2015 года по МПК A61K35/741 A61K35/744 

Предлагаемое средство относится к области ветеринарии и предназначено, в частности, для профилактики мастита у коров во время периода лактации.

Мастит - это воспаление молочной железы, развивающееся как следствие воздействия механических, термических, химических и биологических факторов (А.П. Студенцов Ветеринарное акушерство и гинекология / Государственное издательство сельскохозяйственной литературы, журналов и плакатов // Москва - 1961, С. - 301-302). Мастит, оставаясь широко распространенным заболеванием, наносит сельхозпроизводителям наибольший экономический ущерб из-за снижения молочной продуктивности (от 150 до 200 л на переболевшую корову) и преждевременной выбраковки в результате атрофии и индурации вымени (до 30% переболевших маститом коров сдают на мясоперерабатывающие предприятия, часто после 2-3 лактации), а если учитывать, что корова может давать молоко до 10-12 лактации, то мы, в результате преждевременной выбраковки, теряем из основного стада по 6-8 телят и недополучаем молока еще 6-7 лактации; идет резкое удорожание 1 скотоместа.

Наиболее часто мастит начинается при нарушении технологии машинного доения, нарушениях кормления, несоблюдении гигиенических требований, отсутствии моциона. Также причиной в возникновении мастита может стать неудовлетворительная преддоильная подготовка вымени, которая предусматривает обмывание - очистку от загрязнений, массаж - с целью вызова полноценного рефлекса молокоотдачи и сдаивание первых 2-3 струек молока - с целью удаления бактериальной пробки из канала соска, расслабления сфинктера соскового канала и выявления органолептических изменений молока для диагностики клинического мастита.

Для профилактики маститов предложено много средств.

К фармакологическим средствам профилактики относится обработка вымени после доения различными антисептическими средствами, такими как 0,5% раствор однохлористого йода, йодофор, хлорамин, дезмоли др. (Черепахина Л. Динамика циркуляции патогенов мастита и антисептическая обработка вымени/ Л. Черепахина// Молочное и мясное скотоводство. - 2007. - №2. - С.37-39).

К недостаткам данного метода относится образующаяся у микроорганизмов, вызывающих мастит, резистентность к данным дезинфектантам и побочное влияние на организм животных.

К физическим средствам профилактики относятся массаж вымени, механическая очистка вымени перед доением. К недостаткам этого метода относится то, что очистка не всегда бывает качественной, вымя обмывают из одного ведра у нескольких коров, что приводит к обсеменению микрофлорой большой части животных. Во многом качество этого способа зависит от человеческого фактора и оснащенности ферм.

К биологическим средствам профилактики относится обработка вымени после доения пробиотическими препаратами. В хозяйствах Свердловской области этот метод хорошо зарекомендовал себя. В результате проведенных там исследований было установлено значительное влияние пробиотических препаратов на состояние сосков вымени коров и уменьшение заболеваемости маститом. (А.С. Баркова. Эффективность использования пробиотических средств в программе профилактики мастита в сельхозпредприятиях свердловской области / Актуальные проблемы ветеринарного акушерства и репродукции животных: Мат. международ. науч.-практич. конф. посвящ. 75-летию со дня рождения и 50-летию науч.-практич. деятельности доктора ветеринарных наук, профессора Г.Ф. Медведева. - Горки: БГСХА, 2013. - С. 297-302). Данные средства не вырабатывают резистентность микроорганизмов, не оказывают побочного действия на организм животных и не запрещены в ВТО.

По приведенным причинам профилактика маститов у коров должна быть комплексной и включать и физические, и биологические способы, так как они не вызывают привыкаемости микроорганизмов и не запрещены в ВТО.

Ближайшим аналогом предлагаемого средства является пробиотическое средство PIP Cow Teat Cleaner (очиститель коровьего вымени), в основе которого лежит ассоциация штаммов аэробных сапрофитных микроорганизмов (штаммов-пробионтов) Bacillus subtilis. Средство наносят на соски вымени в виде 7-3% раствора методом орошения или погружения в стаканчик (А.С. Баркова. Эффективность использования пробиотических средств в программе профилактики мастита в сельхозпредприятиях свердловской области / Актуальные проблемы ветеринарного акушерства и репродукции животных: Мат. международ. науч.- практич. конф, посвящ. 75-летию со дня рождения и 50-летию науч.-практич. деятельности доктора ветеринарных наук, профессора Г.Ф. Медведева. - Горки: БГСХА, 2013. - С.297-302).

К недостаткам данного средства следует отнести: наличие в составе только одного вида микроорганизмов и, следовательно, средство не обладает широким спектром антагонистического воздействия на условно-патогенную микрофлору.

Задачи: Исключение побочных действий антибиотиков и других химиотерапевтических средств, снижение объемов выбраковки молока, упрощение применения средства, повышение эффективности профилактики путем расширения антагонистического воздействия на условно-патогенную микрофлору, вызывающую мастит у коров.

Особенностью предлагаемого средства для профилактики мастита у дойных коров в период лактации является использование пробиотического препарата для обработки сосков вымени коров после доения. В составе средства пробиотические штаммы Bacillus subtilis - B-5225 и Enterococcus faecium СТФ 1/56, глицерин и стерильная вода в следующем соотношении, масс.%:

Bacillus subtilis- B-5225- 4%, в концентрации 1×10⁸ КОЕ/мл

Enterococcus faecium СТФ 1/56 - 4% в концентрации 1×10⁸ КОЕ/мл

Глицерин - 2%

Стерильная вода - остальное (90%)

Технический результат

Предлагаемое средство позволяет исключить использование химиотерапевтических средств, антибиотиков и их производных, а также сульфаниламидов и нитрофуранов. Таким образом, исключить побочное действие препарата на организм животных, сочетание включенных пробиотиков повышает профилактическую эффективность развития мастита у коров.

Bacillus subtilis - B-5225 - грамм положительные аэробные подвижные спорообразующие палочки, образуют эндоспоры, расположение спор центральное, не является генетически модифицированным штаммом и относится к микроорганизмам, не патогенным для человека.

Enterococcus faecium СТФ 1/56 - клетки грамм положительные, располагаются одиночно, парами, короткими цепочками. Колонии телесно-белого цвета, полупрозрачные, округлой формы. Не является генетически модифицированным штаммом и относится к микроорганизмам, не патогенным для человека.

Глицерин - прозрачная, бесцветная сиропообразная очень гигроскопичная жидкость без запаха, сладкого вкуса, нейтральной реакции. Смешивается во всех пропорциях с водой и этанолом, с этилацетатом (1:11), очень плохо - с этиловым эфиром (1:500), не смешивается с бензолом, хлороформом, четыреххлористым водородом, сероуглеродом и маслами, является консервантом.

Стерильную воду используют в качестве растворителя.

Заявленное средство получают следующим образом:

Enterococcus faecium СТФ 1/56 выращивают на среде следующего состава: количество на 100%

Сыворотка сухая творожная - 1,5% кукурузный экстракт обработанный - 4,0% натрий лимоннокислый трехзамещенный - 0,66% магний сернокислый семиводный - 0,02% калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,06% меласса - 1,0%

Bacillus subtilis B-5225 выращивают на среде следующего состава:

кукурузный экстракт обработанный - 1,5% магний сернокислый семиводный - 0,02% калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,05% меласса - 1,5% кальций хлористый - 0,02% железо сернокислое - 0,0002%

Enterococcus faecium СТФ 1/56 и Bacillus subtilis B-5225 и глицерин соединяют в соотношении 4:4:2. К полученной одной части смеси добавляют 9% частей стерильной воды. Средство разливают в бутыли по 0,5 л.

Заявители предлагают назвать данное средство «Биомастим»

Полученное средство применяют непосредственно после доения, опрыскивая соски вымени при помощи мелкодисперсного ручного распылителя (типа «Росинка»).

Профилактическая эффективность средства «Биомастим» и средства «Дипал», (производитель DeLaval - Швеция), предназначенного также для профилактики различных форм мастита сопоставлены при апробиробации в течение 5 недель. Дипал содержит в качестве действующего вещества йод, а также вспомогательный смягчающий компонент сорбитол.

В опыте было задействовано 104 животных, принадлежащих ООО ХКА Агрофирме «Россия» Тимашевского района Краснодарского края. Все животные до начала апробации обрабатывались средством для обработки вымени после доения «Дипал». Животных разделили на две группы: опытную и контрольную (по 52 дойных коровы в каждой группе). Животным опытной группы на соски вымени сразу после доения наносили средство «Биомастим» при помощи ручного распылителя типа «Росинка». Животным контрольной группы соски вымени обрабатывали средством после доении «Dipal» методом погружения соска в пластиковый стаканчик с препаратом. Расход препаратов Биомастим и «Dipal» на одну обработку сосков 1 животного составлял 5 мл.

За животными вели постоянное наблюдение в течение месяца и проводили контрольные дойки на скрытый мастит с использованием экспресс диагностикума - Kerba TEST через каждые 14 дней. При положительном результате теста на мастит проводили повторное тестирование через 24 часа и при повторном положительном результате диагностировали скрытый мастит.

Также при каждой контрольной дойке отмечали наличие трещин на сосках вымени.

Во время проведения контрольных доек отбирали молоко у коров опытной и контрольной групп для проведения лабораторного анализа, который включал в себя определение соматических клеток в молоке после использования препаратов, а также определения жира, плотности, СОМО. При проведении опыта были получены следующие результаты (таблица 1).

Таблица 1 Профилактическая эффективность средств «Биомастим» и «Dipal» предназначенных для обработки сосков вымени после доения. Группы Время исследования Клинический мастит Скрытый мастит Трещины сосков вымени жив. % жив. % жив. % «Биомастим» (n=52) 1-я неделя 3 5,7 4 7,7 14 26,9 3-я неделя 1 1,9 3 5,7 8 15,4 5-я неделя 0 0 6 11,5 8 15,4 Среднее на одну проверку 1,33 2,5 5 9,6 10 19,2 «Dipal» (n=52) 1-я неделя 2 3,8 9 17,3 18 34,6 3-я неделя 3 5,7 4 7,7 12 23,0 5-я неделя 0 0 8 15,4 14 26,9 Среднее на одну проверку 1,67 3,2 7 13,4 14,7 28,1

По результатам наблюдения за животными установлено, что к концу первой недели использования средства «Биомастим» количество коров, больных клиническим маститом, составило 5,7%, в то время как в контрольной группе он составлял 3,8%. На третьей неделе опыта процент коров, больных маститом, в первой группе снизился до 1,9%, а в контрольной поднялся до 5,7%. По итогам пятой недели животных, больных клиническим маститом, не выявлено.

Анализируя заболеваемость коров скрытым маститом, прослеживается явная тенденция снижения заболеваемости в опытной группе. К концу первой недели использования средства «Биомастим» заболеваемость коров составила 7,7%, а в контрольной группе 17,3%. На третьей неделе опыта, коров, больных скрытым маститом, в опытной группе было на 2% меньше, чем в контрольной и составило 5,7% и 7,7% соответственно. К пятой неделе опыта количество животных, больных скрытым маститом, в опытной группе было 6, а в контрольной - 8 коров. Проведенные исследования состояния сосков вымени на наличие трещин показало, что на протяжении всего опыта у коров опытной группы данное заболевание уменьшалось и в среднем составило 19,2%, в то время как в группе, где применяли «Дипал», трещины сосков вымени встречались в 28,1%.

В ходе апробации профилактической эффективности Биомастима была проведена проверка показателей качества молока и подсчет соматических клеток в молоке (таблица 2).

Таблица 2 Показатели качества молока и количество соматических клеток в молоке коров Показатели Опытная группа Контрольная группа Начало опыта Конец опыта Начало опыта Конец опыта Массовая доля жира, % 3,118±0,195 3,323±0,108 2,992±0,205 3,235±0,101 Массовая доля белка, % 3,245±0,07 3,457±0,094 3,075±0,055 3,31±0,087 Плотность, кг/м³ 29,413±0,494 30,443±0,523 28,888±0,497 30,002±0,265 СОМО 8,362±0,108 8,517±0,177 8,365±0,101 8,39±0,074 Соматические клетки, тыс./мл 105±6,583 97,5±5,59 112,5±6,801 104,167±5,974

В ходе проверки показателей качества молока на начало и конец опыта, каких-либо отклонений от физиологической нормы не установлено, также на всем протяжении опыта показатели качества молока не изменялись и находились на относительно одном и том же уровне. При подсчете соматических клеток в молоке было установлено, что на всем протяжении опыта они находились на физиологическом уровне и каких-либо достоверных отклонений в опытной и контрольной группе не наблюдалось. То есть за весь промежуток исследований число соматических клеток в опытной и контрольной группе не превышало физиологической нормы.

Апробация «Биомастима» для профилактики мастита выявила профилактический эффект в 94,3%, и уменьшение образования трещин на сосках на 80,8%.

Препарат экологически чистый.

Были проведены исследования профилактической эффективности средства «Биомастим» в зависимости от концентрации микроорганизмов в нем. Апробация была проведена на коровах в фазе лактации. Средство с различной концентрацией микроорганизмов наносили на соски вымени методом распыления. Было сформировано 5 групп животных по 10 голов в каждой (таблица 3).

Таблица 3 Заболеваемость коров маститом в зависимости от концентрации микроорганизмов в средстве Форма мастита Концентрация микроорганизмов в «Биомастиме» 5%-6% 8%-12% 13-14% жив % жив % жив % Субклинический мастит 4 40 2 20 2 20 Клинический мастит 2 20 0 0 0 0

По результатам исследований выявлено, что наиболее оптимальной концентрацией микроорганизмов в препарате считается концентрация в 8-12%, так как при обработке сосков средством с этой концентрацией клиническим маститом не заболело ни одного животного, а субклинический мастит был выявлен у 2 коров. При обработке сосков средством с концентрацией 5-6% клиническим маститом заболело 2 коровы, а субклиническим - 4. При обработке средством, содержащим 13-14% штаммов-пробионтов, профилактическая эффективность сохранялась на уровне 8-12%. Поэтому использование средства, содержащего 8-12% микроорганизмов-пробионтов, является наиболее экономически эффективным и создает оптимальный профилактический эффект.

Пример 1. Для определения профилактической эффективности мастита у коров было приготовлено средство «Биомастим», включающее в состав 3,5% пророщенной среды, содержащей 1×10⁸ КОЕ Bacillus subtilis - B-5225, и 4,5% пророщенной среды, содержащей 1×10⁸ КОЕ Enterococcus faecium СТФ 1/56, 20% глицерина и стерильную воду. Полученное средство наносили на соски коровы Май после каждого доения методом опрыскивания из распылителя Росинка. Корова не заболела маститом. В период применения средства трещины на ее сосках не образовывались.

Пример 2. Для определения профилактической эффективности мастита у коров было приготовлено средство «Биомастим», включающее в состав 4,5% пророщенной среды, содержащей 1×10⁸ КОЕ Bacillus subtilis - B-5225, и 3,5% пророщенной среды, содержащей 1×10⁸ КОЕ Enterococcus faecium СТФ 1/56, 2% глицерина и стерильную воду. Полученное средство наносили на соски коровы Зорьки после каждого доения методом опрыскивания из распылителя Росинка. Корова не заболела маститом. В период применения средства трещины на ее сосках не образовывались.

Представленное изобретение относится к области ветеринарии и касается средства для профилактики мастита у коров в период лактации. Охарактеризованное решение содержит в качестве пробиотических бактерий для обработки сосков после доения пробиотические штаммы Bacillus subtilis - B-5225 (1×10⁸) 4 мас.%, Enterococcus faecium СТФ 1/56 (1×10⁸) 4 мас.%, глицерин (2 мас.%) и стерильную воду 90%. Изобретение позволяет исключить использование химиотерапевтических средств, антибиотиков и их производных, а также сульфаниламидов и нитрофуранов и повысить профилактическую эффективность против мастита. 3 табл.

Средство для профилактики мастита у коров в период лактации, содержащее пробиотические штаммы, отличается тем, что имеет состав в следующем соотношении компонентов, мас.%:
Bacillus subtilis - В-5225 - 4% в концентрации 1×10⁸ КОЕ/мл
Enterococcus faecium СТФ 1/56 - 4% в концентрации 1×10⁸ КОЕ/мл
Глицерин - 2%
Стерильная вода - остальное - 90%