СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ ЖЕЛЕЗОСОДЕРЖАЩИХ ПРЕПАРАТОВ ПО МОРФОЛОГИИ ПЕЧЕНИ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ОСТРОЙ ПОСТГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ АНЕМИИ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2016 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к патоморфологической диагностике и фармакологии, и может быть использовано для определения эффективности железосодержащих препаратов, применяемых для лечения острой постгеморрагической анемии.

Способ заключается в исследовании микроскопических изменений печени с выявлением экстрамедуллярных очагов кроветворения, количество которых зависит от эффективности препарата.

Кровотечение - одно из самых тяжелых осложнений различных заболеваний и повреждений. Массивная кровопотеря приводит к гиповолемии и несоответствию сниженного объема циркулирующей крови исходной емкости сосудистого русла, что сопровождается нарушением кровоснабжения органов и тканей [1, 2]. После благополучной ликвидации критического состояния животного, организм вынужден восполнить недостаток форменных элементов крови, прежде всего, эритроцитов, что связано с большими затратами различных пластических веществ, необходимых для эритропоэза. Одним из таких веществ является микроэлемент железо. В связи с этим возникает необходимость восполнения недостатка железа в организме [1, 3].

Однако в связи с тяжестью и остротой процесса многие железосодержащие препараты могут оказаться недостаточно действенными, в связи с чем возникает необходимость определения их эффективности.

Известен способ оценки эффективности лечения больных железодефицитной анемией, включающий исследования крови, которое проводят до начала курса лечения и через 56 дней после начала курса лечения, при этом регистрируют уровень ее хемилюминесценции в течение 5 мин, рассчитывают светосумму свечения, и при снижении показателя светосуммы свечения на 30% и более от показателя светосуммы, полученного до начала лечения, оценивают проводимое лечение как эффективное, а при значении менее 30% как неэффективное (заявка №95121929/14 от 26.12.1995, опубл. 10.04.1998). Недостатком этого способа является определение эффективности лечения только при железодефицитной анемии, но не при острой постгеморрагической анемии, которая отличается по механизму развития и течению. Кроме того, данный способ позволяет оценить лишь усвояемость того или иного препарата, не учитывая влияние его на процессы кроветворения.

Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ оценки морфологических изменений ткани печени при острой ишемии, включающий ее микроскопическое исследование с последующим проведением балльной оценки выраженности морфологических изменений (заявка №96116551/14 от 13.08.1996, опубл. 10.11.1998). Однако данный способ предназначен для оценки тканей печени только при ишемии, поэтому использование его для определения эффективности железосодержащих препаратов совершенно неинформативно, так как он не учитывает влияние железосодержащих препаратов на ткань печени. Также к недостаткам способа относится трудоемкость в подсчете баллов, что связано с большим количеством изучаемых параметров.

В предлагаемом нами способе диагностики используются наиболее объективные гистологические и морфометрические методы исследования, позволяющие наиболее точно определить эффективность гемопоэтических железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии.

Для определения эффективности железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии нами был выбран наиболее информативный морфологический критерий, указывающий на усиления кроветворения в организме - количество экстрамедуллярных очагов кроветворения в печени. В заявленном способе учитывается влияние острой кровопотери на развитие компенсаторно-приспособительных процессов в органах, которые, прежде всего, характеризуются появлением кроветворной ткани в некоторых органах, включая печень.

Задачей изобретения является создание способа определения эффективности гемопоэтических железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии.

Целью изобретения является создание объективного метода определения эффективности гемопоэтических железосодержащих препаратов, предназначенных для лечения острой постгеморрагической анемии.

Техническим результатом заявленного изобретения является повышение точности и упрощение определения эффективности гемопоэтических железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии.

Указанный технический результат достигается путем введения железодекстранового препарата животным в терапевтической дозе и проведение морфологического системного последовательного анализа гистологических срезов печени с описанием гистологической структуры печени, а также измерение количества экстрамедуллярных очагов кроветворения на 10 день после введения препарата. Измерения проводятся с помощью светового микроскопа в 30 последовательных полях зрения при общем увеличении 100х. Для удобства подсчета количества экстрамедуллярных очагов кроветворения рекомендуется воспользоваться окулярной стереометрической сеткой, вмонтированной в окуляр микроскопа. А все полученные цифровые данные обработать методами математической статистики, принятой в биологии и медицине с определением вероятности различия между двумя средними по таблице Стьюдента.

Увеличенное количество экстрамедуллярных очагов кроветворения свидетельствует об усилении интенсивности компенсаторно-приспособительных процессов в организме, а следовательно, препараты, применение которых привело к появлению большего количества экстрамедуллярных очагов кроветворения, можно считать более эффективными.

Для изучения эффективности железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии нами были проведены исследования на половозрелых белых крысах обоего пола, массой тела 180-200 г. На всем протяжении опыта животных содержали раздельно, в одинаковых условиях и на одинаковом рационе.

В опытах были использованы следующие железосодержащие препараты: Ферроглюкин-75, Ферранимал-75, Ферранимал-75М, Седимин. Препараты вводили однократно внутримышечно в область бедра согласно инструкции по применению.

Для изучения влияния препаратов на морфологию печени лабораторных животных было проведено моделирование постгеморрагической анемии. За 2-3 дня до опыта некоторым лабораторным животным проводили процедуру кровопускания из хвостовой вены в объеме 2% от массы тела животного, что составляет 25-35% от объема циркулирующей крови. Взятие крови из хвостовой вены производили на наркотизированном животном после смачивания хвоста спиртом. Хвост погружали в теплую воду (45°C на 1-3 мин.) и затем надрезали сосуд скальпелем. Для предупреждения травматизма, рану прижигали спиртовым раствором йода. Лабораторные животные с моделированной постгеморрагической анемией содержались в отдельных клетках.

В соответствии с задачами исследования лабораторные животные были разделены на 6 групп, по 20 животных в каждой:

1. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили препарат Ферроглюкин-75;

2. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили препарат Ферранимал-75;

3. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили препарат Ферранимал-75М;

4. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили препарат Седимин;

5. Животные с постгеморрагической анемией, которым вводили стерильный изотонический раствор натрия хлорида в эквивалентном объеме;

6. Контрольная группа животных, которым вводили стерильный изотонический раствор натрия хлорида в эквивалентном объеме.

Перед началом лечения и на 10-й день исследования проводили взятия крови для оценки показателей, характеризующих уровень гемопоэза (уровень гемоглобина, количества эритроцитов, цветовой показатель, среднее содержание и среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците, величину гематокрита, количества железа в сыворотке крови).

По окончании срока наблюдения всех животных подвергали эвтаназии с последующими патологоанатомическим и гистологическим исследованиями. Материалом для гистологического исследования служили образцы печени крыс, из которых готовили гистологические препараты по общепринятым методикам с окрашиванием для обзорных целей гематоксилином и эозином.

Результаты морфологических исследований показывают, что в печени животных всех групп кроме контрольной наблюдается появление экстрамедуллярных очагов кроветворения при одновременном повышении показателей крови, характеризующих уровень гемопоэза. Однако количество их варьирует в зависимости от используемого препарата. Наименьшее количество экстрамедуллярных очагов кроветворения (n=3±1) наблюдается в печени животных с постгеморрагической анемией, которым не было проведено лечение препаратом железа. В печени животных, которым для коррекции постгеморрагической анемии применяли препараты Ферроглюкин-75 и Ферранимал-75 количество экстрамедуллярных очагов кроветворения увеличено (n=5±1). И наибольшее количество экстрамедуллярных очагов кроветворения в печени было у животных, которым применяли для лечения постгеморрагической анемии препараты Седимин (n=7±2) и Ферранимал-75М (n=8±2).

Таким образом, эффективность гемопоэтических железосодержащих препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии определяется по количеству экстрамедуллярных очагов кроветворения с одновременной оценкой уровня гемоглобина, количества эритроцитов, цветового показателя, среднего содержания и средней концентрации гемоглобина в эритроците, величины гематокрита, количества железа в сыворотке крови, от чего зависит скорость выздоровления животных. Чем больше их количество экстрамедуллярных очагов кроветворения, тем интенсивнее протекают компенсаторно-приспособительные процессы в организме. Следовательно, препараты, применение которых привело к появлению большего количества экстрамедуллярных очагов кроветворения и наиболее высоким показателям крови, характеризующим гемопоэз, можно считать более эффективными.

Литература

1. Кашин А.С. Профилактика и остановка кровотечений у животных. / А.С. Кашин. - М.: Колос - 1982. - 127 с.

2. Шакалов К.И. Хирургические болезни сельскохозяйственных животных. / Шакалов К.И., Башкиров Б.А., Лебедев А.В., Федоров А.И., Лукьяновский В.А.. - Л.: Колос - 1991. - 255 с.

3. Уразаев Д.Н., Дельцов А.А., Парасюк Л.П., Уразаева Р.Д. Биологическая роль железа. Применение железосодержащих препаратов в ветеринарной медицине: монография. - М.: Колос, 2010. - 104 с.

Изобретение относится к области ветеринарии и касается способа определения эффективности гемопоэтических железосодержащих препаратов по морфологии печени при лечении острой постгеморрагической анемии. Сущность способа заключается в проведении морфологического системного пошагового анализа гистологических срезов печени по образцам ткани печени после любого варианта традиционной гистологической обработки. Для морфометрического анализа измеряют количество экстрамедуллярных очагов кроветворения в органе. Чем больше количество экстрамедуллярных очагов кроветворения в печени, тем эффективнее лекарственный препарат. Изобретение обеспечивает повышение точности определения эффективности препаратов железа для лечения постгеморрагической анемии.

Способ определения эффективности гемопоэтических железодекстрановых препаратов при лечении острой постгеморрагической анемии животных, включающий введение препарата животным в терапевтической дозе и проведение морфологического системного последовательного анализа гистологических срезов печени с описанием гистологической структуры печени, а также измерение количества экстрамедуллярных очагов кроветворения на 10 день после введения препарата, увеличенное количество которых свидетельствует об усилении интенсивности компенсаторно-приспособительных процессов в организме, а следовательно, препараты, применение которых привело к появлению большего количества экстрамедуллярных очагов кроветворения, можно считать более эффективными.