СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СКРЫТОПРОТЕКАЮЩИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НА ОСНОВАНИИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СИСТЕМНОЙ ЭНДОТОКСИНЕМИИ Российский патент 2017 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной и клинической диагностике, и может быть использовано в практике врачей различных специализаций для выявления труднодиагностируемых и скрытопротекающих заболеваний, в том числе злокачественных и доброкачественных новообразований, повышения эффективности лечения и качества диспансеризации населения, выявления групп высокого риска развития онкопатологии на ранних стадиях ее развития.

Не всегда болезни протекают с яркой клинической симптоматикой, они могут проявляться одним единственным симптомом, характерным для многих заболеваний, например головной болью, длительным субфебрилитетом, усталостью и общим недомоганием. Весьма часто заболевания длительное время протекает бессимптомно, общепринятыми методами исследования и стандартными анализами выявить их не удается.

В связи с этим поиск новых способов диагностики скрытопротекающей патологии, в том числе ранних стадий новообразований, позволяющих поставить точный диагноз и повысить эффективность и своевременность лечебно-профилактических мероприятий, является крайне актуальной задачей. Существует огромное количество способов диагностики заболеваний, однако многие из них не пригодны для выявления болезни на ранней стадии.

Ввиду того обстоятельства, что иммунная система реагирует на малейшие изменения в нашем организме, показатели состояния иммунитета являются перспективным инструментом для выявления заболеваний на ранних стадиях. Показателями, фиксирующими изменения иммунной системы в самом начале болезни, являются показатели системной эндотоксинемии (СЭЕ), которые могут быть приняты за интегральную оценку состояния здоровья человека [Яковлев М.Ю. // Системная эндотоксинемия в физиологии и патологии человека // Автореферат докт. дисс. - М. - 1993 - 56 с.].

СЭЕ как биологическое явление было постулировано в 1993 году [Яковлев М.Ю. // Системная эндотоксинемия в физиологии и патологии человека // Автореферат докт. дисс. - М. - 1993. - 56 с.] и представляет собой физиологический механизм регуляции активности адаптивных систем (в том числе иммунитета) кишечным эндотоксином (ЭТ) в общем кровотоке при участии гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы [Яковлев М.Ю. // Системная эндотоксинемия в физиологии и патологии человека // Автореферат докт. дисс. - М. - 1993. - 56 с.; Яковлев М.Ю. Кишечный эндотоксин и воспаление // Дерматология. Национальное руководство. Краткое издание. - 2013. - Глава 8. - С. 70-76; Yakovlev M. Yu. / Elements of Endotoxin Theory of Human Physiology and Pathology: «Systemic Endotoxinemiya», «Endotoxin Agression» and «Endotoxin Insuficiancy» // J. Endotoxin Research. - 2000. - Vol. 6. - №2. - P. 120-121].

ЭТ является ключевым элементом поддержания всех звеньев иммунной системы в состоянии необходимого физиологического тонуса, а при избыточных концентрациях в общем кровотоке индуцирует развитие различных заболеваний и синдромов, что получило название «эндотоксиновая агрессия» (ЭА), которая квалифицируется как предболезнь и/или универсальный фактор патогенеза воспалительной патологии [Яковлев М.Ю. / «Эндотоксиновая агрессия» как предболезнь или универсальный фактор патогенеза человека и животных // Успехи сов. биологии. - 2003. - №1. - С. 31-40].

Полная (гидрофильная) молекула ЭТ представляет собой липополисахарид (ЛПС), состоящий из трех фрагментов: полисахарида, ядра и липида A [Rietschel Ε. & Westphal О. / Endotoxin: Historical Perspectives. In Endotoxin in Health and Disease edited by H. Bode, S. Opal, S. Vogel, D. Morrison. / New York - Basel. - 1999. - P. 1-30]. Весь спектр общих биологических свойств ЭТ самых различных грамотрицательных бактерий обусловливается наличием в структуре их молекул липида А, который в комплексе с тремя остатками кетодезоксиоктулоновой кислоты (КДО), представляет собой ту минимальную структуру ЛПС генетически дефектных штаммов (лишенных полимерсинтетаз), при которых сохраняется их жизнеспособность.

Именно этот обязательный гидрофобный элемент, равно как и синтетический липид А, обладает всем спектром общих биологических свойств ЛПС, в том числе способностью взаимодействовать с рецептором врожденного иммунитета - TLR4 (определяющего синтез важнейших провоспалительных интерлейкинов), что позволяет квалифицировать гидрофобную форму молекулы ЭТ как ключевой элемент регуляции активности врожденного и адаптивного иммунитета [Меджитов Р., Джаневей Ч. / Врожденный иммунитет // Казанский медицинский журнал: Издание Министерства здравоохранения Татарстана и Казанского государственного медицинского университета. - 2004. - Том 85, N 3. - С. 161-167: 3 ил.]. В основе работы последнего лежит стохастический процесс соматических мутаций лимфоцитов, обеспечивающий синтез громадного числа рецепторов (10^14-16), которые «метят» к уничтожению иммунной системой все антигены (включая собственные и синтетические), что позволяет адаптивному иммунитету контролировать «чистоту» нашего клеточного пула. Цена этого гомеостатического процесса достаточно велика, т.к. параллельно реализации противоопухолевого иммунитета усиливаются аутоиммунные и гиперергические (аллергические) реакции. Выраженность и тех и других определяется концентрацией ЭТ в общем кровотоке и способностью организма реагировать на ЛПС. Последнюю можно «измерить» цифровыми показателями концентрации антител (AT) в крови (сыворотке или плазме) к гидрофобной (ГФОБ) и гидрофильной (ГФИЛ) формам молекулы ЭТ, названными интегральными показателями антиэндотоксинового иммунитета [Яковлев М.Ю. Кишечный эндотоксин и воспаление. // Дерматология. Национальное руководство. Краткое издание. - 2013. - Глава 8. - С. 70-76], поскольку, если строго следовать термину «антиэндоксиновый иммунитет» (АЭИ), то следовало определять сотни или даже тысячи серологических показателей, т.к. популяция сапрофитных и условно патогенных грамотрицательных бактерий и их штаммов в составе кишечной микрофлоры очень велика.

Именно поэтому ранее для оценки активности АЭИ выбраны ЛПС Salmonella Minnesota Re-595 (гидрофобная форма молекулы ЭТ) и один из штаммов E.coli с полной (содержащей полисахарид) молекулой ЛПС (гидрофильная форма) [RU 2011993 C1, 30.04.1994]. Широкое применение этого способа в нашей клинической практике выявило правильность выбора антигенов для оценки активности АЭИ, но обнаружило и ряд его недостатков для лечебно-диагностического процесса, которые устранялись при одновременном использовании показателей концентрации ЭТ в крови.

Проведенные исследования [Окороков П.Л., Аниховская И.А., Яковлева М.М. и др. / Алиментарный фактор как вероятный индуктор воспаления или липидный компонент механизма транспорта кишечного эндотоксина // Физиология человека. - 2012. - Том 38. - №6. - С. 105-112] постулировали наличие липидного механизма транспорта гидрофобной формы ЭТ из кишечника в кровоток, тогда как гидрофильная (содержащая полисахарид) форма молекулы кишечного ЛПС поступает в кровоток лишь при повреждении (в том числе вирусными инфекциями) целостности слизистой кишечника [Аниховская И.Α., Кубатиев Α.Α., Хасанова Г.Р., Яковлев М.Ю. / Эндотоксиновый компонент патогенеза хронических вирусных заболеваний // Физиология человека. - 2015. - Том 41. - №3. - С. 118-126].

В настоящее время известно использование некоторых показателей СЭЕ для диагностики ряда заболеваний и определении прогноза их течения.

Так, описаны способы диагностики и оценки развития аллергических заболеваний у детей - способ оценки эндотоксинемии у детей с атопической бронхиальной астмой [RU 2177616 C1, 27.12.2001] - по соотношению содержания AT к ГЛП к содержанию AT к ЛПС E.coli; способ оценки эндотоксинемии у детей с атопическим дерматитом [RU 2208792 С2, 20.07.2003] - по содержанию AT к ГЛП; способ оценки тяжести течения сочетанных форм атопического дерматита у детей [RU 2282857 C1, 27.08.2006] - по содержанию эндотоксина в плазме крови с помощью LAL-теста; способ диагностики аллергического ринита у детей [RU 2298187 C1, 27.04.2007] - по содержанию эндотоксина в крови.

Известно использование показателей эндотоксинемии в диагностике сердечно-сосудистых и иных заболеваний, например способ определения венозного застоя по большому кругу кровообращения у больных хронической сердечной недостаточностью [RU 2449289 С2, 27.04.2012] - по содержанию эндотоксина в крови хромогенным методом; способ прогнозирования риска кровотечения из варикозно расширенных вен пищевода у больных циррозом печени [RU 2473914 С2, 10.10.2011] - по содержанию AT к ЛПС E.coli.

Показатели эндотоксинемии используют при прогнозировании течения болезней: способ прогнозирования течения гастродуоденальной патологии у детей [RU 2475754 С2, 20.02.2013] - с использованием концентрации AT к ГЛП; способ прогнозирования острой печеночной недостаточности [RU 2521271 С2, 27.06.2014] - по содержанию общего эндотоксина в крови методом активированных частиц; а также при диагностике эффективности терапии - способ оценки эффективности ингаляционной антибактериальной терапии нозокомиальной пневмонии, вызванной грамотрицательной флорой [RU 2456614 C1, 20.07.2012] - по содержанию общего ЭТ в крови методом активированных частиц.

Приведенные методы направлены на диагностирование или прогнозирование течения конкретного заболевания и не могут быть использованы для выявления скрытопротекающих заболеваний.

Описаны способы оценки состояния здоровья по состоянию антиэндотоксинового иммунитета [RU 2011993 C1, 30.04.1994; RU 2088936 C1, 27.08.1997; Аниховская И.А. / Выявление групп риска, выбор тактики обследования и оценка эффективности лечения различных заболеваний по показателям антиэндотоксинового иммунитета // Автореф. канд. мед. наук. - М., - 2001. - 19 с.]. В способе оценки состояния антиэндотоксинового иммунитета в отношении грамотрицательных бактерий путем использования антител к гликолипиду хемотипа Re в иммуноэнзимной реакции (ЛПС - ТЕСТ - ИФА) [RU 2088936 C1, 27.08.1997] применяют антитела к гликолипиду хемотипа Re, способы, описанные в остальных источниках, включают использование в качестве показателей оценки состояния антиэндотоксинового иммунитета концентраций AT к двум наиболее общим антигенным детерминантам молекулы ЛПС и показатель их соотношения.

Указанные способы оценки состояния здоровья по состоянию антиэндотоксинового иммунитета наиболее близки к заявляемому изобретению, в качестве прототипа выбран способ скрининг оценки иммунного статуса [RU 2002133042 А, 27.08.2004] путем иммуноэнзимного определения показателей гуморального иммунитета к эндотоксину грамотрицательных бактерий, включающий определение в сыворотке крови содержания антител к гликолипиду хемотипа Re из бактерий Salmonella Minnesota R595 (показатель A1) и к липополисахариду Escherichia coli (показатель А2, причем используют липополисахарид Escherichia coli O14, содержащий общий антиген энтеробактерий), расчет показателя отношения (A3) Escherichia coli-антител к Re-антителам (А2/А1), сравнения значения показателей с нормой и оценки состояния резистентности организма, выявляя вероятность развития определенных заболеваний:

1) как нормальное физиологическое состояние при нормальных значениях показателей A1, А2 и A3,

2) как субкомпенсированного снижения резистентности с вероятностью развития дисбактериоза при нормальном показателе A1 и снижении показателей А2 и A3,

3) как субкомпенсированного снижения резистентности с повышением вероятности заболеваний желудочно-кишечного тракта и мочеполовых инфекций при нормальном значении показателя A1 и повышении показателей А2 и A3,

4) как субкомпенсированного снижения резистентности с повышением вероятности развития пневмоний и мочеполовых инфекций при повышении показателя A1, нормальном значении показателя А2 и снижении показателя A3,

5) как декомпенсированного снижения резистентности с высокой вероятностью развития патологии эндокринной системы, заболеваний желудочно-кишечного тракта и дисбактериоза при повышении показателя A1 и снижении показателей А2 и A3,

6) как декомпенсированного снижения резистентности с высокой вероятностью развития острых пневмоний и мочеполовых инфекций при повышении показателей A1 и А2 и нормальном значении показателя A3,

7) как декомпенсированного снижения резистентности с высокой вероятностью развития мочеполовых инфекций, заболеваний желудочно-кишечного тракта и дисбактериоза при понижении показателя A1 и повышении показателей А2 и A3,

8) как декомпенсированного снижения резистентности с высокой вероятностью развития заболеваний желудочно-кишечного тракта, вирусных инфекций и дисбактериоза при снижении показателей A1 и А2 и нормальном значении показателя A3,

9) как декомпенсированного снижения резистентности с высокой вероятностью развития мочеполовых инфекций, патологии желудочно-кишечного тракта и дисбактериоза при снижении показателя A1, нормальном значении показателя А2 и повышении показателя A3,

10) как декомпенсированного дисбалансированного снижения резистентности с повышенной вероятностью развития онкологической патологии, коллагенозов, патологии эндокринной системы, острых пневмоний, заболеваний желудочно-кишечного тракта, цирроза печени и туберкулеза при резком повышении показателей A1 и А2 и повышении или понижении показателя A3,

11) как декомпенсированного дисбалансированного снижения резистентности с высокой вероятностью развития вирусных инфекций, мочеполовых инфекций, острых пневмоний, патологии эндокринной системы, заболеваний желудочно-кишечного тракта и дисбактериоза при резком снижении показателей A1 и А2 и повышении или понижении значений показателя A3.

Широкая практика клинического использования указанных способов, в том числе прототипа, в нашей врачебной деятельности выявила их недостатки, связанные с использованием только двух показателей активности АЭИ (концентраций AT к двум наиболее общим антигенным детерминантам молекулы ЛПС), который устраняется заявляемым изобретением. При применении способа, в соответствии с указанными источниками, к первой группе (практически здоровых людей, у которых не было выявлено наличие каких-либо хронических заболеваний) могут быть отнесены онкологические больные с 3-4 стадиями развития патологического процесса, так как у этих пациентов показатели активности АЭИ снижаются до нормативных (и ниже) в силу прогрессирующего истощения иммунитета, следующего вслед за его гиперактивацией. Последнее достаточно убедительно иллюстрируется в [Аниховская И.А., Кубатиев А.А., Хасанова Г.Р., Яковлев М.Ю. / Эндотоксиновый компонент патогенеза хронических вирусных заболеваний // Физиология человека. - 2015. - Том 41. - №3, - С. 118-126], где описана обнаруженная цикличность ЛПС-индуцированной системной воспалительной реакции у ВИЧ-инфицированных больных.

Задача изобретения состоит в создании нового способа диагностики скрытопротекающих заболеваний на основании показателей системной эндотоксинемии, свободного от недостатков аналогов, обладающего большей точностью, высокой эффективностью, позволяющего выявить заболевания, в том числе онкологические, а также протекающие бессимптомно, на ранних стадиях, повысить эффективность диагностического и лечебного процесса за счет ранней диагностики скрытопротекающих заболеваний и коррекции иммунного ответа на ту или иную патологию.

Технический результат изобретения состоит в использовании для определения состояния АЭИ при осуществлении заявляемого способа одновременно трех показателей СЭЕ: общей концентрации ЭТ, концентраций AT к гидрофобной (ГФОБ) и гидрофильной (ГФИЛ) формам молекулы ЭТ в сыворотке и плазме крови обследуемого пациента, что более объективно отражает способность организма к иммунному ответу. Данные показатели изменяются при возникновении практически любых патологических процессов в определенных органах и тканях на самых ранних стадиях его развития. Также техническим результатом изобретения является использование нормативных показателей СЭЕ с учетом возраста диагностируемого.

Поставленная задача решается, и технический результат достигается заявляемым способом диагностики скрытопротекающих заболеваний на основании показателей системной эндотоксинемии, включающим определение в крови обследуемого пациента концентрации антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида, сравнение полученных значений показателей с диапазоном нормативных показателей и отнесение обследуемого на основе указанного сравнения к одному из вариантов состояния антиэндотоксинового иммунитета, при котором дополнительно определяют концентрацию общего эндотоксина в крови обследуемого, сравнивая полученный показатель с диапазоном нормы, сравнение каждого из трех показателей системной эндотоксинемии с нормативными показателями осуществляют с возрастными нормативными диапазонами с учетом возраста обследуемого, на основании указанного сравнения определяют один из нижеприведенных диагностически значимых вариантов состояния антиэндотоксинового иммунитета обследуемого, диагностируя отсутствие или высокую вероятность заболеваний:

1) состояние антиэндотоксинового иммунитета в норме, при показателях концентраций антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида и показателе концентрации эндотоксина, соответствующим возрастной норме, - диагностируют с высокой долей вероятности отсутствие скрытопротекающих заболеваний;

2) начальные признаки селективного повышения антиэндотоксинового иммунитета без эндотоксиновой агрессии, при показателе концентрации антител к гидрофобной форме молекулы липополисахарида выше возрастной нормы, показателе концентрации антител к гидрофильной форме молекулы липополисахарида ниже возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина, соответствующей возрастной норме, - диагностируют высокую вероятность наличия обострения хронического специфического или неспецифического воспалительного процесса;

3) селективное повышение активности антиэндотоксинового иммунитета с эндотоксиновой агрессией, при показателе концентрации антител к гидрофобной форме молекулы липополисахарида ниже возрастной нормы, показателе концентрации антител к гидрофильной форме молекулы липополисахарида выше возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина выше возрастной нормы - диагностируют высокую вероятность доброкачественных или злокачественных опухолей или хронического воспалительного процесса (как специфического, так и не специфического) в малом тазу;

4) дисбалансированное состояние антиэндотоксинового иммунитета на фоне эндотоксиновой агрессии, при показателе концентрации антител к гидрофобной форме молекулы липополисахарида выше возрастной нормы, показателе концентрации антител к гидрофильной форме молекулы липополисахарида ниже возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина выше возрастной нормы, - диагностируют высокую вероятность наличия доброкачественных или злокачественных новообразований, или токсоплазмоза, или местных флегмон, или кожной патологии со вторичным инфицированием, или хронических неспецифических воспалительных процессов в бронхолегочной системе, или острых вирусных инфекций в фазе обострения;

5) резкая активация антиэндотоксинового иммунитета с острой эндотоксиновой агрессией, при показателях концентраций антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида и показателе концентрации эндотоксина значительно выше возрастной нормы, - диагностируют высокую вероятность наличия злокачественных новообразований 1-3 стадий различной локализации или системных заболеваний соединительной ткани, в том числе аутоиммунных, или туберкулеза;

6) резкое угнетение активности антиэндотоксинового иммунитета на фоне эндотоксиновой агрессии, при показателях концентраций антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида значительно ниже возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина значительно выше возрастной нормы, - диагностируют высокую вероятность наличия различных форм вирусных инфекций, приводящих к иммунодефициту, или поздних стадий онкологических заболеваний, или состояний после тяжелых обширных операционных вмешательств и инфекционных процессов, или врожденной недостаточности иммунноглобулинов.

Для удобства восприятия распределение обследуемых по группам состояний антиэндотоксинового иммунитета, соответствующих риску наличия определенных заболеваний, в соответствии с заявляемым способом диагностики скрытопротекающих заболеваний на основании показателей СЭЕ, приведено в таблице 1.

Отличием заявляемого способа является следующее:

- использование не двух, а трех показателей системной эндотоксинемии: дополнительно, кроме определения концентрации антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида, определяют концентрацию общего эндотоксина в крови обследуемого пациента, определение состояния антиэндотоксинового иммунитета и диагностирование скрытопротекающих заболеваний осуществляют с учетом трех показателей системной эндотоксинемии;

- сравнение указанных показателей с диапазоном нормативных показателей осуществляют с учетом возраста обследуемого пациента, выбирая для этого диапазон нормативных показателей, соответствующий возрасту обследуемого пациента, что повышает точность способа;

- при определении состояния антиэндотоксинового иммунитета пациента и диагностике скрытопротекающих заболеваний выбирают один из шести возможных вышеуказанных диагностически значимых для выявления скрытопротекающих заболеваний вариантов.

Опытным путем из одиннадцати возможных вариантов состояний антиэндотоксинового иммунитета были выделены диагностически значимые варианты и лечебно-прогностически значимые варианты.

К диагностически значимым отнесли показатели СЭЕ в группах у обследуемых лиц, не имеющих яркой клинической симптоматики какого-либо заболевания, не имеющих патологических изменений в клиническом и биохимическом анализе крови и мочи, т.е. по результатам обследований или диспансеризации считающихся практически здоровыми.

К лечебно-прогностически значимым вариантам отнесли показатели СЭЕ в группах у обследуемых лиц с наличием трудноподдающихся лечению хронических заболеваний в анамнезе, с наличием клинической симптоматики, но без патологических изменений в клиническом анализе крови и мочи. В данном изобретении лечебно-прогностически значимые варианты не рассматриваются.

Способ осуществляют следующим образом.

У обследуемого пациента забирают венозную кровь, получают из нее сыворотку или плазму и проводят тесты на содержание ЭТ, а также на определение концентрации AT к гидрофобной и гидрофильной частям молекулы ЛПС любыми известными методами. Концентрацию ЭТ определяют с использованием ЛАЛ-теста или его модификаций (хромогенный, турбодиметрический, гель-тромб, иных микрометодов, ТАЛ-теста, масс-спекторметрическим методом и др.) Концентрации AT к гидрофобной и гидрофильной частям молекулы ЛПС определяют аналогично [RU 2011993 C1, 30.04.1994] методом иммуноферментного анализа: содержание антител к гидрофобной части молекулы ЛПС, используя штамм Salmonella minnesota R595 (Re-мутант) и к гидрофильной части молекулы ЛПС, применяя штамм E.coli О14.

Вместо Salmonella minnesota R595 (Re-мутант) для определения содержания антител к гидрофобной части молекулы ЛПС могут быть использованы ЛПС любых других генетически дефектных штаммов и видов грамотрицательных бактерий частично или полностью лишенных полимерсинтетаз (в т.ч. и синтетический липид А), а значит и полисахаридной части молекулы. Вместо ЛПС кишечной палочки (E.coli 014) для определения содержания антител к гидрофильной части молекулы ЛПС могут быть использованы штаммы любых других грамотрицательных бактерий, содержащих полисахаридную часть молекулы (генетически полноценных). При этом будут наблюдаться отличия только в нормативных показателях.

Полученные значения показателей концентрации ЭТ и концентраций AT к гидрофобной и гидрофильной частям молекулы ЛПС сравнивают с диапазоном нормативных показателей с учетом возраста обследуемого пациента, выбирая для этого диапазон нормативных показателей, соответствующий возрасту обследуемого пациента.

В таблице 2 приведен диапазон значений возрастных нормативных показателей, определенных эмпирически аналогично [И.М. Салахов, И.А. Аниховская, И.А. Майский, М.М. Маркелова, П.Л. Окороков, Г.Р. Хасанова, В.А. Юркив / Нормативные показатели системной эндотоксинемии как базисный элемент определения роли липополисахаридов кишечной микрофлоры в общей патологии // Патогенез. - 2015. - Т. 13. №1. - С. 18-27] с применением ЛАЛ-теста для определения концентрации ЭТ, и с применением метода СОИС-ИФА для штамма Salmonella minnesota R595 (Re-мутант) и штамма Е. coli О14 для определения концентраций AT к гидрофобной и гидрофильной частям молекулы.

На основании сравнения полученных показателей с диапазоном возрастных нормативных показателей пациента относят к одному из диагностически значимых вариантов состояния антиэндотоксинового иммунитета:

1) состояние антиэндотоксинового иммунитета в норме - при показателях концентраций антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида и показателе концентрации эндотоксина, соответствующим возрастной норме (схематически это можно изобразить как N-N-N);

2) начальные признаки селективного повышения антиэндотоксинового иммунитета без эндотоксиновой агрессии - при показателе концентрации антител к гидрофобной форме молекулы липополисахарида выше возрастной нормы, показателе концентрации антител к гидрофильной форме молекулы липополисахарида ниже возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина, соответствующей возрастной норме (схематически ↑-↓-N);

3) селективное повышение активности антиэндотоксинового иммунитета с эндотоксиновой агрессией - при показателе концентрации антител к гидрофобной форме молекулы липополисахарида ниже возрастной нормы, показателе концентрации антител к гидрофильной форме молекулы липополисахарида выше возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина выше возрастной нормы (схематически ↓-↑-↑);

4) дисбалансированное состояние антиэндотоксинового иммунитета на фоне эндотоксиновой агрессии - при показателе концентрации антител к гидрофобной форме молекулы липополисахарида выше возрастной нормы, показателе концентрации антител к гидрофильной форме молекулы липополисахарида ниже возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина выше возрастной нормы (схематически ↑-↓-↑);

5) резкая активация антиэндотоксинового иммунитета с острой эндотоксиновой агрессией - при показателях концентраций антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида и показателе концентрации эндотоксина значительно - не менее чем в 2 раза - выше возрастной нормы (схематически ↑↑-↑↑-↑↑);

6) резкое угнетение активности антиэндотоксинового иммунитета на фоне эндотоксиновой агрессии - при показателях концентраций антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида значительно - не менее чем в 2 раза - ниже возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина значительно - не менее чем в 2 раза - выше возрастной нормы (схематически ↓↓-↓↓-↑↑).

У пациентов, отнесенных к первой группе, диагностируют с высокой долей вероятности отсутствие скрытопротекающих заболеваний;

у пациентов, отнесенных ко второй группе, диагностируют высокую вероятность наличия обострения хронического специфического или неспецифического воспалительного процесса, например, хламидиоза с суставным синдромом, хламидийных и микоплазменных инфекций бронхолегочной системы, холецистита, гастрита, полипоза желудка, панкреатита;

у пациентов, отнесенных к третьей группе, диагностируют высокую вероятность наличия доброкачественных или злокачественных опухолей или хронического воспалительного процесса (как специфического, так и не специфического) в малом тазу, например, аденома предстательной железы с хроническим простатитом, хронический аднексит, миома матки, хронический вялотекущий пиелонефрит, хронический цистит, обострение геморроя, опухоль прямой кишки, хронический колит и др.;

у пациентов, отнесенных к четвертой группе, высокую вероятность наличия доброкачественных или злокачественных новообразований, например, менингиомы, лимфомы, фибромы, миомы, или токсоплазмоза, или местных флегмон, или кожной патологии со вторичным инфицированием, или хронических неспецифических воспалительных процессов в бронхолегочной системе, или острых вирусных инфекций в фазе обострения, например, герпес 4, 5 и 6 типов;

у пациентов, отнесенных к пятой группе, диагностируют высокую вероятность наличия злокачественных новообразований различной локализации (1-2-3 степени), или при отсутствии патологических изменений в клиническом анализе крови, - системных заболеваний соединительной ткани, в том числе аутоиммунных, или туберкулеза;

у пациентов, отнесенных к шестой группе, диагностируют высокую вероятность наличия различных форм вирусных инфекций, приводящих к иммунодефициту, или поздних стадий онкологических заболеваний, или состояний после тяжелых обширных операционных вмешательств и инфекционных процессов, или врожденной недостаточности иммунноглобулинов.

Результаты исследований могут варьироваться в зависимости от наличия моно- или полиорганной патологии у пациента и, в некоторых случаях, лишь косвенно указывать локализацию патологических процессов в органах и тканях, но с высокой долей вероятности что таковые есть.

Заявляемый способ диагностики скрытопротекающих заболеваний на основании показателей СЭЕ может быть использован для лиц, не имеющих яркой клинической симптоматики какого-либо заболевания, не имеющих патологических изменений в клиническом и биохимическом анализе крови и мочи, т.е. по результатам предыдущих обследований или диспансеризации считающихся практически здоровыми.

Заявляемым способом было обследовано более чем 30000 человек, диагностированные предлагаемым способом скрытопротекающие заболевания были подтверждены известными методами.

Для лучшего понимания заявляемый способ иллюстрируется примерами конкретного выполнения.

Пример 1

Обследуемый пациент В., 28 лет. Жалоб нет.

Системные показатели сыворотки крови обследуемого пациента (концентрация ЭТ определена с использованием ЛАЛ-теста, концентрации AT к гидрофобной и гидрофильной частям молекулы ЛПС определены аналогично [RU 2011993 C1, 30.04.1994]) следующие:

антитела к ГФОБ - 195 у.е.о.п (в норме 190-200), антитела к ГФИЛ - 390 у.е.о.п (в норме 380-400), ЭТ - 0,5 EU/ml (в норме 04,-1,0).

Полученные значения показателей СЭЕ сравнивают с диапазоном нормативных показателей для возраста 25-33 лет, соответствующих возрасту пациента - 28 лет, констатируют, что полученные показатели СЭЕ соответствуют возрастным нормативным показателям (N-N-N), обследуемого относят к первой группе и диагностируют с высокой долей вероятности отсутствие у него скрытопротекающих заболеваний.

Проведенное обследование известными методами - общий и биохимический анализ крови, мочи и длительное наблюдение (на протяжении трех лет) заболеваний не выявило.

Пример 2

Больной П., 45 лет, обратился с жалобами на хроническую ежедневную мучительную головную боль в течение 30 лет. Обследовался во многих неврологических клиниках и проходил стандартный набор лабораторно-диагностических методов обследования, включая МРТ-мозга. Проводилась терапия анальгетиками, ноотропами, аминокислотами с очень кратковременным эффектом. В результате пациент остался под контролем психотерапевта.

Проведены общий и биохимический анализы крови, а также определены показатели СЭЕ аналогично примеру 1.

Выявлено резкое повышение титра антител к ГФОБ - 450 у.е.о.п, (при норме 150-170) и к ГФИЛ - 260 у.е.о.п (при норме 300-350) при повышении концентрации ЭТ в крови до 2,0 EU/ml при норме 0,6-1,0 EU/ml (↑-↓-N), что соответствует второй группе, для которой характерно обострение хронических воспалительных процессов.

В клиническом и биохимическом анализе крови изменений нет. Таким образом результат обследуемого соответствует второй группе, и головная боль связана с наличием хронического воспалительного заболевания или возможного доброкачественного образования. Учитывая, что больному до посещения нашей клиники уже было сделано МРТ мозга, и диагноз опухоль головного мозга был отвергнут, остался один вариант - воспалительный процесс. Т.к. при остром воспалении все показатели антиэндотоксинового иммунитета повышены, в периферической крови выявляются патологические изменения в виде лейкоцитоза с палочкоядерным сдвигом, повышения СОЭ на фоне повышенной температуры и яркая клиническая симптоматика, характерная для острого воспалительного процесса, сделан вывод, что воспалительный процесс имеет хронический характер и проявляется только постоянной головной болью. Дополнительно осмотр оториноларинголога для исключения хронического гайморита и полное рентгенологическое обследование всех черепных пазух не выявили патологического процесса. Таким образом, речь может идти о воспалении одной из мягких наружных оболочек мозга, тесно прилегающей к паутинной, т.е. об арахноидите, именно с ним связана постоянная и не очень интенсивная головная боль.

Выставлен диагноз хронический арахноидит. Учитывая длительность заболевания и отсутствие антибактериальной терапии в анамнезе, проведена антибактериальная терапия (Фортум внутривенно 2 г в сутки) с иммунокоррекцией, так как процесс хронический и показатели титра антител к гидрофильной молекуле снижены. Кроме того, для улучшения фагоцитарной функции включены гепатопротекторы, эубиотики для повышения гуморального иммунитета и стимуляторы лейкопоэза.

Через неделю у больного прошла головная боль, самочувствие улучшилось. В дальнейшем проведено реабилитационное лечение ноотропами, аминокислотами, витаминотерапия. В течение пяти лет больной находился под наблюдением. Головные боли не возобновлялись.

Пример 3

Больная Α., 30 лет. Обратилась с жалобами в клинику на кожные высыпания по всему телу в течение месяца и покраснения голеней, стоп, отечность, повышение температуры в течение двух месяцев до 37,4°С. Сенсибилизирующие препараты, назначенные в других клиниках, не помогли. Причина заболевания не установлена.

При осмотре: По всей поверхности тела мелкопузырьковая сыпь по типу крапивницы. По остальным органам без видимых патологических изменений. Физиологические отправления в норме. В анамнезе: два месяца назад - острая пищевая токсикоинфекция. Находилась на домашнем лечении.

Проведено исследование: Клинический анализ крови: Лейкоциты 6×10⁹/л, Hb 129 г/л, СОЭ 15 мм/ч. Общий анализ мочи без патологии. Биохимический анализ крови без патологии. Рентген грудной клетки без патологии. УЗИ печени, почек малого таза без патологии. Антитела к ГФОБ - 107 у.е.о.п (в норме 190-200), антитела к ГФИЛ - 640 у.е.о.п (в норме 380-400), ЭТ - 2,0 EU/ml (в норме 0,4-1,0) (↓-↑-↑).

Пациентка попала в третью группу, для которой характерен хронический воспалительный процесс в зоне малого таза на фоне эндотоксиновой агрессии. Учитывая результаты теста, было проведено дообследование - посев мочи на стерильность, антитела на хронический шигеллез (с учетом анамнеза). В посеве мочи на стерильность обнаружена - E.coli (норма - стерильно). Титр антител к шигеллам: 1:200 (в норме не обнаруживаются).

Таким образом, причиной температуры является хроническая мочеполовая инфекция, ассоциированная с кишечной палочкой и не долеченный шигеллез, перешедший в хроническую форму дизентерии. В результате нарушений функции слизистой оболочки кишечника и хронического воспалительного процесса в почках (вялотекущий пиелонефрит) появился вышеуказанный недуг. Проведена терапия: Фуразолидон, Кипферон, Линекс, Эсливер форте, Бифидумбактерин, Энтеросгель, без гормонотерапии и антигистаминных препаратов.

Выписана с выздоровлением. После проведенной терапии контроль анализов через месяц: антитела к ГФОБ - 172 у.е.о.п, антитела к ГФИЛ - 339 у.е.о.п, ЭТ - 1,0 EU/ml. Контроль анализов через 3 месяца: антитела к ГФОБ - 182 у.е.о.п, антитела к ГФИЛ - 391 у.е.о.п, ЭТ - 0,6 EU/ml. Клинический анализ крови в норме. Здорова.

Пример 4

Больная Е., 49 лет. Обратилась 04.02.2013 г. с жалобами на слабость, вялость, недомогание. В анамнезе: в 2008 году удаление липомы в области шеи, сахарный диабет II типа компенсированный, артериальная гипертензия I ст., миома матки 11-12 недель, остеохондроз. В январе 2011 г. экстирпация матки с придатками. Лизис спаек. 07.02.13 г.: Клинический анализ крови: Лейкоциты 6,3×10⁹/л, Hb 132 г/л, СОЭ 17 мм/ч; Эритроциты 4,68×10¹²/л; ЦП 0,85, Тромбоциты 304×10⁹/л; Железо 0,4 (N 6,6-25,9); антитела к ГФОБ - 364 у.е.о.п (в норме 150-170), антитела к ГФИЛ - 213 у.е.о.п (в норме 300-350), ЭТ - 3,0 EU/ml (в норме 0,6-1,0) (↑-↓-↑). Отнесена к четвертой группе по заявляемому способу.

Учитывая анамнез пациентки, внимательно осмотрена врачом (онконастороженность), тщательно несколько раз опрошена врачом. Обратила внимание, что беспокоит небольшая язвочка на языке во рту. Врач при внимательном осмотре ранки на языке заподозрил рак языка. На биопсии: Плоскоклеточный рак. Проведен курс химиотерапии. 19.11.13 г. проведена операция: резекция языка слева, футлярно-фасциальное удаление лимфатических узлов.

Проведено обследование в июне 2014 г.: Клинический анализ крови: Лейкоциты 10,4×10⁹/л, Hb 145 г/л, СОЭ 22 мм/ч; Эритроциты 4,79×10¹²/л; ЦП 0,91, Тромбоциты 350×10⁹/л; Железо 10,9 (N 6,6-25,9); Антитела к ГФОБ - 403 у.е.о.п, антитела к ГФИЛ - 194 у.е.о.п. Титр антител к Токсплазме 77,4 (N<10). 14.08.14 г. при контроле выявлено резкое повышение двух показателей: ГФОБ - 456 у.е.о.п, ГФИЛ - 650 у.е.о.п, ЭТ - 3,0 EU/мл. 15-19.01.2015 г. проведен 2-й курс химиотерапии и повторная операция в связи с рецидивом опухоли. Пациент переведен в пятую группу (↑↑-↑↑-↑↑).

Результаты обследования 01.04.15 г.: Клинический анализ крови: Лейкоциты 4,3×10⁹/л, Hb 133 г/л, СОЭ 38 мм/ч; Эритроциты 4,19×10¹²/л; ЦП - 0,95, Тромбоциты 193×10⁹/л; антитела к ГФОБ - 260 у.е.о.п, антитела к ГФИЛ - 146 у.е.о.п, ЭТ - 2,0 EU/мл. Пациентка чувствует себя лучше. Находится под наблюдением онколога.

Пример 5

Больная П., 1974 г. р. Обратилась 12.12.2013 г. (на момент обращения 39 лет) с жалобами на сильные головные боли, боль в пятке, отек ноги, боли в эпигастрии, слабость, вялость, недомогание, хруст в суставах. Проведено исследование 12.12.13 г.: Клинический анализ крови - Лейкоциты 6,4×10⁹/л, Hb 102 г/л, СОЭ 5 мм/ч; Эритроциты 3,89×10¹²/л; ЦП 0,78, Тромбоциты 350×10⁹/л; Железо 1,6 (Ν 8,9-30,4). Антитела к ГФОБ - 288 у.е.о.п (в норме 170-190), антитела к ГФИЛ - 560 у.е.о.п (в норме 350-380), ЭТ - 3,6 EU/ml (↑↑-↑↑-↑↑).

Больная определена в пятую группу. Проведена гастроскопия, УЗИ печени, селезенки без патологии. Выявлен хронический эрозивный гастрит. Рекомендована гастроскопия через месяц в связи с риском онкологии. Выставлен диагноз: Хронический эрозивный гастрит. Железодефицитная анемия. Проведено лечение с улучшением. Повторное обследование через месяц.

Проведено исследование 20.01.14 г.: Клинический анализ крови - Лейкоциты 5,7×10⁹/л, Hb 119 г/л, СОЭ 4 мм/ч; Эритроциты 4,16×10¹²/л; ЦП 0,85, Тромбоциты 322×10⁹/л; Железо 8,0 (N 8,9-30,4). Антитела к ГФОБ - 288 у.е.о.п, антитела к ГФИЛ - 560 у.е.о.п, ЭТ - 3,6 EU/ml.

Повторное исследование назначено через 2 месяца. Проведено исследование 17.03.14 г.: Клинический анализ крови - Лейкоциты 11,4×10⁹/л, Hb 118 г/л, СОЭ 20 мм/ч, ЦП - 0,8, Тромбоциты 289×10⁹/л; Антитела к ГФОБ - 275 у.е.о.п, антитела к ГФИЛ - 680 у.е.о.п, ЭТ - 4,6 EU/ml (↑↑-↑↑-↑↑). Назначена повторная гастроскопия с биопсией: Выявлен рак желудка 1-2 стадии. Направлена на оперативное лечение в онкологическую больницу.

Пример 6А

Больная М., 40 лет, обратилась с жалобами на постоянную головную боль в течение года. Данные анализов и исследований аналогичны предыдущему клиническому примеру. При исследовании показателей антиэндотоксинового иммунитета у больной отмечалось резкое снижение показателей антител к ЛПС и резкое повышение количества эндотоксина в крови (↓↓-↓↓-↑↑) - эндотоксиновая агрессия. Отнесена к шестой группе. Такие показатели характерны для острой вирусной инфекции и рака 3-4 стадий. Больной был проведен ряд специальных исследований на антитела к вирусам герпеса и на определение самого вируса в крови и в слюне. Результат оказался положительным на ЦМВ. Пациентке был выставлен диагноз: Острая цитомегаловирусная инфекция, осложненная энцефалопатией. Проведена противовирусная терапия так же путем внутривенного введения противовирусных препаратов с иммуномодуляторами. Головные боли купированы. Общее самочувствие улучшилось.

Пример 6Б

Больная Я., 48 лет. В анамнезе (год назад) - первично-множественный рак яичников, рак шейки матки. Проведена операция в объеме экстирпации матки с придатками. При поступлении выявлено прогрессирование заболевания - рецидивная опухоль с вовлечением органов малого таза, метастазы в печень, селезенку, кости, брюшину.

Антитела к ГФОБ - 74 у.е.о.п (в норме 150-170), антитела к ГФИЛ - 154 у.е.о.п (в норме 300-350), ЭТ - 3,6 EU/ml (0,6-1,0).

Примеры 5 и 6 свидетельствуют, что одна и та же симптоматика, протекающая у пациентов нестандартно, была единственным признаком совершенно разных заболеваний, и применение заявляемого способа позволило правильно диагностировать заболевания, что ранее не было сделано известными методами. Именно применение патогенетического, а не симптоматического лечения привело к своевременному оказанию медицинской помощи.

Таким образом, предложен высокоэффективный способ диагностики скрытопротекающих заболеваний на основании показателей системной эндотоксинемии, позволяющий выявить заболевания на ранних стадиях (в том числе онкологические), повысить эффективность диагностического и лечебного процесса за счет ранней диагностики скрытопротекающих заболеваний и коррекции иммунного ответа на ту или иную патологию с применением различных групп иммуномодуляторов, целенаправленно проводить необходимое дообследование.

Способ особенно эффективен для пациентов, не имеющих яркой клинической симптоматики какого-либо заболевания, без выявленных известными методами патологических изменений, т.е. по результатам предыдущих обследований или диспансеризации считающихся практически здоровыми.

Заявленный способ позволяет избежать ошибки способов-аналогов – отнесение пациентов с онкологическими заболеваниями, у которых показатели антител к ЛПС находятся в пределах нормы, к группе, для которой характерно отсутствие заболеваний.

Способ позволяет применить дифференцированный подход для лечения пациентов с одинаковой симптоматикой, вызванной различными заболеваниями.

Заявляемый способ выявления скрытопротекающих заболеваний может быть с успехом применен для диспансеризации населения, в том числе при проведении плановых корпоративных медицинских осмотров.

Изобретение относится к медицине и касается способа диагностики скрытопротекающих заболеваний на основании показателей системной эндотоксинемии, включающего определение в крови обследуемого пациента концентрации антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида, сравнение полученных значений показателей с диапазоном нормативных показателей и отнесение обследуемого пациента на основе указанного сравнения к одному из вариантов состояния антиэндотоксинового иммунитета. Дополнительно определяют концентрацию общего эндотоксина в крови обследуемого пациента, сравнивают полученный показатель с диапазоном нормы. Сравнение каждого показателя системной эндотоксинемии с нормативными показателями осуществляют с возрастными нормативными диапазонами с учетом возраста обследуемого пациента. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностического и лечебного процесса за счет выявления скрытопротекающих заболеваний на ранних стадиях. 6 пр., 2 табл.

Способ диагностики скрытопротекающих заболеваний на основании показателей системной эндотоксинемии, включающий определение в крови обследуемого пациента концентрации антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида, сравнение полученных значений показателей с диапазоном нормативных показателей и отнесение обследуемого пациента на основе указанного сравнения к одному из вариантов состояния антиэндотоксинового иммунитета, отличающийся тем, что

дополнительно определяют концентрацию общего эндотоксина в крови обследуемого пациента, сравнивают полученный показатель с диапазоном нормы,

сравнение каждого из трех показателей системной эндотоксинемии с нормативными показателями осуществляют с возрастными нормативными диапазонами с учетом возраста обследуемого пациента,

на основании указанного сравнения определяют один из следующих диагностически значимых вариантов состояния антиэндотоксинового иммунитета обследуемого пациента:

1) при показателях концентраций антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида и показателе концентрации эндотоксина, соответствующим возрастной норме - состояние антиэндотоксинового иммунитета в норме,

2) при показателе концентрации антител к гидрофобной форме молекулы липополисахарида выше возрастной нормы, показателе концентрации антител к гидрофильной форме молекулы липополисахарида ниже возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина, соответствующей возрастной норме - начальные признаки селективного повышения антиэндотоксинового иммунитета без эндотоксиновой агрессии,

3) при показателе концентрации антител к гидрофобной форме молекулы липополисахарида ниже возрастной нормы, показателе концентрации антител к гидрофильной форме молекулы липополисахарида выше возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина выше возрастной нормы - селективное повышение активности антиэндотоксинового иммунитета с эндотоксиновой агрессией,

4) при показателе концентрации антител к гидрофобной форме молекулы липополисахарида выше возрастной нормы, показателе концентрации антител к гидрофильной форме молекулы липополисахарида ниже возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина выше возрастной нормы - дисбалансированное состояние антиэндотоксинового иммунитета на фоне эндотоксиновой агрессии,

5) при показателях концентраций антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида и показателе концентрации эндотоксина значительно выше возрастной нормы - резкая активация антиэндотоксинового иммунитета с острой эндотоксиновой агрессией,

6) при показателях концентраций антител к гидрофобной и гидрофильной формам молекулы липополисахарида значительно ниже возрастной нормы, показателе концентрации эндотоксина значительно выше возрастной нормы - резкое угнетение активности антиэндотоксинового иммунитета на фоне эндотоксиновой агрессии,

и на основании выбранного диагностически значимого варианта состояния антиэндотоксинового иммунитета диагностируют:

1) при состоянии антиэндотоксинового иммунитета в норме - отсутствие скрытопротекающих заболеваний,

2) при начальных признаках селективного повышения антиэндотоксинового иммунитета без эндотоксиновой агрессии - обострение хронического специфического или неспецифического воспалительного процесса,

3) при селективном повышении активности антиэндотоксинового иммунитета с эндотоксиновой агрессией - наличие доброкачественных или злокачественных опухолей или специфический или неспецифический хронический воспалительный процесс в малом тазу,

4) при дисбалансированном состоянии антиэндотоксинового иммунитета на фоне эндотоксиновой агрессии - наличие доброкачественных или злокачественных новообразований, или токсоплазмоза, или местных флегмон, или кожной патологии со вторичным инфицированием, или хронических неспецифических воспалительных процессов в бронхолегочной системе, или острых вирусных инфекций в фазе обострения,

5) при резкой активации антиэндотоксинового иммунитета с острой эндотоксиновой агрессией - наличие 1-3 стадий злокачественных новообразований различной локализации или системных заболеваний соединительной ткани, включая аутоиммунные, или туберкулез,

6) при резком угнетении активности антиэндотоксинового иммунитета на фоне эндотоксиновой агрессии - наличие различных форм вирусных инфекций, приводящих к иммунодефициту, или поздних стадий онкологических заболеваний, или состояний после тяжелых обширных операционных вмешательств и инфекционных процессов, или врожденной недостаточности иммуноглобулинов.