СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2019 года по МПК A61K35/10 B01D11/02 A61P1/16 

Описание патента на изобретение RU2678204C1

Изобретение относится к медицине, а именно к получению препарата, обладающего гепатопротекторным действием.

В настоящее время известна группа гепатопротекторных средств («Карсил», «Силимарин», «Гепабене», «Гептрал», «Гепа-Мерц», «Уросан» и другие) основным недостатком которых является гиперчувствительность к активному или любому из вспомогательных веществ, возможность аллергических реакций, а также диспепсия и диарея.

Целью изобретения является расширение арсенала отечественных гепатопротекторных средств природного происхождения.

Поставленная цель достигается тем, что предложен способ получения ге-патопротекторного средства, содержащего 0,1% раствор гиматомелановых кислот, выделенных из низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, сформированных в восстановительной среде.

Способ включает добавление к 0,50 г гиматомелановых кислот, выделенных из низкоминерализованных иловых сульфидных грязей согласно методике (1), 50,0 см 0,15 моль/дм раствора натрия гидроксида; термостатирование на водяной бане в течение 3-4 часов при температуре 40°С; фильтрование через бумажный фильтр, нейтрализацию раствора 0,10 моль/л раствором хлороводородной кислоты с использованием рН-метра до значения 7,4; доведение объема дистиллированной водой до 500 см. Готовый раствор расфасовывают в склянки темного стекла, плотно укупоривают и стерилизуют УФ-лучами с помощью бактерицидной лампы.

Гепатопротекторная активность препарата, полученного предложенным способом, подтверждена данными экспериментальных исследований. Эксперимент выполняли на 60 белых беспородных крысах-самцах половозрелого возраста массой 180-200 г, которые содержались в стандартных условиях вивария. Интоксикацию лабораторных животных осуществляли введением отечественной смеси полихлордифенилов (ПХД) торговой марки «Совол» состава:26% тетра-, 64,6% пента-, 9% гексахлордифенилов и следовые количества гептахлордифенилов.

Было сформировано три группы экспериментальных животных. Первая группа (контрольная): животные (n=20), получившие однократно внутрижелу-дочно с помощью металлического зонда оливковое масло объемом 1,0 мл. Вторая группа (сравнения): животные (n=20), однократно получившие внутри-желудочным введением при помощи металлического зонда смеси полихлор-дифенилов (ПХД) торговой марки «Совол» в оливковом масле объемом 1,0 мл в расчете 50 мг ПХД на 1 кг массы (0,1LD50).

Третья группа (опытная): животные (n=20), однократно получившие 50 мг/кг ПХД торговой марки «Совол» путем внутрижелудочного введения в растворе оливкового масла, которых далее подвергали терапии путем внутрибрюшинных инъекций полученного по предлагаемому способу 0,10% раствора гиматомелановых кислот по 0,2 мл (0,1 мг/кг массы) 1 раз в день в течение 10 дней. Лечение начинали с первого дня эксперимента.

Забой животных осуществляли методом одномоментной декапитации под хлороформным наркозом на 3-й и 10-ые сутки.

Гепатопротекторную активность средства оценивали по показателям активности аспартатаминотрансферазы (ACT) и аланинаминотрансферазы (АЛТ), количеству билирубина и холестерина в крови и гомогенате печени. Кровь забирали в сухие стерильные пробирки. Материал центрифугировали при 3000 об/мин. Сыворотку отбирали для дальнейшего биохимического анализа. Активность ACT и АЛТ определяли фотометрическим методом Райтмана - Френкеля при помощи стандартных наборов реактивов. Количество общего билирубина определяли методом Иешдрашика-Грофа с использованием кофеинового реактива и диазосмеси. Количество холестерина осуществляли по методу Ильке: пробы обрабатывали реактивом Либермана - Бурхарда, интенсивность окраски определяли фотоколориметрически с толщиной кюветы 5 мм, на красном светофильтре. Концентрацию холестерина в моль/дм3 определяли по калибровочному графику.

Расчеты и оценка полученных результатов выполнены с использованием пакета программ статистической обработки данных SPSS 12.0.2 и программы StatSoft Inc. Statistica, 6.0.

Для морфологического исследования образцы ткани доли печени размером 3x3x2 мм фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина в течении 24 часов. Затем материал проходил стандартную обработку. Для микроскопического исследования срезы окрашивались гематоксилином, эозином и пикро-фуксином. Морфологические исследования гистологических препаратов проводили с помощью светооптического микроскопа «ОГутрш СХ 21 FS 1» с увеличением 400. Микрофотографирование проводили с помощью цифровой камеры «01ympus» С - 4000 ZOOM.

В процессе эксперимента смертность животных не наблюдали. После однократного введения ПХД у экспериментальных животных развивалось токсическое поражение печени, что подтверждалось повышением активности ферментов-маркеров по отношению к контролю.

Изменения показателей АлТ и ACT на 3 и 10 сутки эксперимента в плазме крови, представлены в Таблице 1 Приложения 1:

- АлТ и АсТ на третьи соответственно на 18% и 27% (р<0,05) в плазме крови;

- АлТ и АсТ на и десятые сутки соответственно на 36% и 59% (р<0,05) в плазме крови;

Изменения показателей АлТ и ACT на 3 и 10 сутки эксперимента в гомогенате печени, представлены в Таблице 2 Приложения 1:

- АлТ и АсТ на третьи сутки соответственно на 27% и 28%) (р<0,05) в гомогенате печени;

- АлТ и АсТ на десятые сутки соответственно на 37% и 35% (р<0,05) в гомогенате печени.

Введение раствора гуминовых кислот пелоидов снижает выраженность цитоли-тических процессов по отношению ко 2-ой группе животных:

- АлТ и АсТ на третьи сутки соответственно на 34% и 25% (р<0,05) в плазме крови;

- АлТ и АсТ на десятые сутки соответственно на 31% и 36% (р<0,05) в плазме крови;

- АлТ и АсТ на третьи сутки соответственно на 40% и 37% (р<0,05) в гомоге-нате печени;

- АлТ и АсТ на десятые сутки соответственно на 32% и 27% (р<0,05) в гомоге-нате печени.

Общее количество билирубина на 3 сутки после интоксикации смесью поли-хлордифенилов (ПХД) торговой марки «Совол»(Таблица 3 Приложения 1) в гомогенате печени животных превысило норму в 10 раз. Уровень холестерина в группе сравнения держался во все время эксперимента на 25% выше нормы.

После применения средства, полученного по предложенному способу, содержание билирубина в гомогенате печени животных третьей группы уменьшилось в 2 раза на 3 сутки и на 10 сутки соответствовало физиологической норме (Таблица 3 Приложения 1).

Общее количество билирубина и холестерина в плазме крови на 10 сутки после интоксикации смесью полихлордифенилов (ПХД) торговой марки «Совол» превысило норму на 50% и 25% соответственно. После применения средства, полученного по предложенному способу, на 10 сутки количество билирубина и холестерина в плазме животных третьей группы стало ниже физиологической нормы на 8% и 20% соответственно (Таблица 4 Приложения 1). Следовательно, терапия 0,1% раствором гиматомелановых кислот, полученным по разработанному способу, в течение 10 дней вызвала регрессию биохимических показателей в сыворотке крови и гомогенате печени крыс, интоксициро-ванных ПХД и нормализовала исследуемые показатели по сравнению с контролем.

Гистологические срезы ткани печени экспериментальных животных после интоксикации ПХД выявили нарушение структуры печени. На третьи сутки эксперимента наблюдается массивная гибель эпителиоцитов, нарушение радиального расположения печеночных балок и разрыв анастомозов. На десятые сутки наблюдения в центральных зонах печеночных долек формируются очаги некроза и усиливается венозный застой.

Под действием терапии животных третьей группы 0,10% раствором гиматомелановых кислот, полученным по разработанному способу на третьи сутки эксперимента наблюдали уменьшение патологических изменений: синусоиды ге-мокапилляров умеренно расширены; при этом дистрофические изменения носят очаговый характер, большинство гепатоцитов имеют нормальную форму, размеры и структуру. На 10 сутки в клетках обнаруживается гликоген, очаги некроза отсутствуют, структура стенки междольковых артерий и желчных протоков в триадах практически не отличается от структуры ткани печени крыс контрольной группы.

Таким образом результаты лабораторных и морфологических исследований в эксперименте на животных свидетельствуют о гепатопротекторной активности средства, содержащего 0,1% раствор гиматомелановых кислот, полученного по разработанному способу. Заявленное средство не вызывало у животных аллергических реакций.

Заявленный способ можно использовать для получения средства, обладающего гепатопротекторной активностью с целью расширение арсенала отечественных гепатопротекторных средств природного происхождения.

Похожие патенты RU2678204C1

название год авторы номер документа
СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ АДАПТОГЕННОЙ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ 2013
  • Лубсандоржиева Пунцык-Нима Базыровна
  • Шантанова Лариса Николаевна
  • Балдандоржиева Мария Васильевна
  • Хобракова Валентина Бимбаевна
  • Дашинамжилов Жаргал Балдуевич
  • Николаев Сергей Матвеевич
  • Кохан Сергей Тихонович
RU2516886C1
ЛЕКАРСТВЕННЫЙ СБОР, ОБЛАДАЮЩИЙ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТЯМИ 2009
  • Николаев Сергей Матвеевич
  • Лубсандоржиева Пунцык-Нима Базыровна
  • Дашинамжилов Жаргал Балдуевич
  • Убашеев Иннокентий Оширович
RU2419447C2
СРЕДСТВО С ПАНКРЕО- И ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ДЛЯ ПАРЕНТЕРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ 2017
  • Яснецов Владимир Викторович
  • Цублова Елена Геннадьевна
  • Яснецов Виктор Владимирович
  • Иванов Юрий Викторович
  • Скачилова София Яковлевна
RU2662324C1
СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ГЕПАТОЗАЩИТНЫМ И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫМ ДЕЙСТВИЕМ, И СПОСОБЫ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ (ВАРИАНТЫ) 2009
  • Баранов Валерий Дмитриевич
  • Сотников Павел Степанович
  • Буркова Валентина Николаевна
  • Боев Сергей Григорьевич
  • Сизова Светлана Викторовна
RU2406496C1
Способ получения средства, обладающего антиоксидантной, гепатозащитной и желчегонной активностью 2019
  • Туртуева Татьяна Анатольевна
  • Туртуев Цыбикжап Доржиевич
RU2715274C1
СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ПОСЛЕДСТВИЙ ИШЕМИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ПЕЧЕНЬ 2011
  • Перьков Андрей Алексеевич
  • Лазаренко Сергей Викторович
RU2456678C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ, ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ, ЖЕЛЧЕГОННОЙ АКТИВНОСТЯМИ 2018
  • Лубсандоржиева Пунцык-Нима Базыровна
  • Федоров Андрей Витальевич
  • Николаев Сергей Матвеевич
  • Самбуева Зинаида Гомбожаповна
  • Дашинамжилов Жаргал Бадлуевич
RU2684729C1
СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ИШЕМИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ ПЕЧЕНИ 2014
  • Перьков Андрей Алексеевич
  • Лазаренко Виктор Анатольевич
  • Лазаренко Сергей Викторович
RU2563796C1
СБОР ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ 2012
  • Чехани Нино Рамазовна
  • Павлова Людмила Анатольевна
  • Козин Сергей Валерьевич
  • Лузин Александр Владимирович
  • Черников Владимир Александрович
RU2500418C1
Применение пентааминокислотных производных фуллеренов в качестве антиоксидантов и антидиабетических средств 2016
  • Котельникова Раиса Алексеевна
  • Арешидзе Давид Александрович
  • Солдатова Юлия Валериевна
  • Смолина Анастасия Васильевна
  • Козлова Мария Александровна
  • Сёмин Иван Александрович
  • Жиленков Александр Викторович
  • Трошин Павел Анатольевич
  • Котельников Александр Иванович
  • Алдошин Сергей Михайлович
RU2669341C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 678 204 C1

Реферат патента 2019 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения препарата, обладающего гепатопротекторной активностью. Способ получения препарата, обладающего гепатопротекторной активностью, включает добавление к гиматомелановым кислотам, выделенным из низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, раствора натрия гидроксида; термостатирование на водяной бане; фильтрование через бумажный фильтр, нейтрализацию полученного раствора раствором хлороводородной кислоты; доведение объема дистиллированной водой; готовый раствор гиматомелановых кислот расфасовывают в склянки темного стекла, плотно укупоривают и стерилизуют УФ-лучами с помощью бактерицидной лампы. Вышеописанный способ позволяет расширить арсенал препаратов с гепатопротектерной активностью. 4 табл.

Формула изобретения RU 2 678 204 C1

Способ получения препарата, обладающего гепатопротекторной активностью, включающий добавление к 0,50 г гиматомелановых кислот, выделенных из низкоминерализованных иловых сульфидных грязей, 50,0 см3 0,15 моль/дм3 раствора натрия гидроксида; термостатирование на водяной бане в течение 3-4 часов при температуре 40°C; фильтрование через бумажный фильтр, нейтрализацию раствора 0,10 моль/л раствором хлороводородной кислоты с использованием pH-метра до значения 7,4; доведение объема дистиллированной водой до 500 см3; готовый 0,10% раствор гиматомелановых кислот расфасовывают в склянки темного стекла, плотно укупоривают и стерилизуют УФ-лучами с помощью бактерицидной лампы.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2678204C1

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ГИМАТОМЕЛАНОВЫХ КИСЛОТ НИЗКОМИНЕРАЛИЗОВАННЫХ ИЛОВЫХ СУЛЬФИДНЫХ ГРЯЗЕЙ ДЛЯ ФИЗИОТЕРАПИИ 1997
  • Гильмиярова Ф.Н.
  • Агапов А.И.
  • Аввакумова Н.П.
RU2122414C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ СУБСТАНЦИИ ГУМИНОВЫХ КИСЛОТ ИЗ НИЗКОМИНЕРАЛИЗОВАННЫХ ИЛОВЫХ СУЛЬФИДНЫХ ГРЯЗЕЙ 2011
  • Аввакумова Надежда Петровна
  • Кривопалова Мария Ариевна
  • Фомин Игорь Викторович
RU2480224C2
KR 20020036830 А, 16.05.2002
АВВАКУМОВА Н.П
Влияние гуминовых веществ пелоидов на процессы свободно радикального окисления// Средство коррекции экологического неблагополучия
Известия Самарского научного центра Российской академии наук, том 13, N 1(8), 2011, с
Пробочный кран 1925
  • Ладыженский И.А.
SU1960A1

RU 2 678 204 C1

Авторы

Аввакумова Надежда Петровна

Кривопалова Мария Ариевна

Жданова Алина Валитовна

Глубокова Мария Николаевна

Катунина Елена Евгеньевна

Зайцева Елена Николаевна

Даты

2019-01-24Публикация

2018-05-21Подача