Искусственная питательная среда для культивирования гусениц непарного шелкопряда Lymantria dispar L. Российский патент 2019 года по МПК A01K67/04 

Описание патента на изобретение RU2707631C1

Изобретение относится к питательным средам для выращивания гусениц непарного шелкопряда (Lymantria dispar L) и может быть использовано в биотехнологии для культивирования вируса ядерного полиэдроза в гусеницах непарного шелкопряда при производстве вирусных энтомопатогенных препаратов, лесном хозяйстве при защите растений от насекомых-вредителей, а также в массовом разведении целевых насекомых для научных целей.

Известна питательная среда, содержащая фолиевую кислоту, агар-агар, набор витаминов и минеральных солей (Цветаева И.А., Питательные среды для насекомых, «Защита растений», 1976, №3, с. 27).

Известна также питательная среда для разведения гусениц непарного шелкопряда (авторское свидетельство СССР №577001, МПК А01К 67/00, опубл. 26.10.1977 г.), включающая глюкозу, агар-агар, метабен, холин-хлорид, льняное масло, аскорбиновую кислоту, калий фосфорнокислый двузамещенный, формалин и воду. С целью удешевления и упрощения среды, в нее введена в качестве источника клетчатки свекловичный жом, в качестве источника белков введены фасолевая мука, кормовые дрожжи и солодовые ростки, а в качестве источников солей и витаминов - премикс для птиц. Причем, компоненты взяты в следующем соотношении, вес.%: кормовые дрожжи 2,70-3,40; фасолевая мука 0,75-3,42; солодовые ростки 0,95-1,91; свекловичный жом 3,40-6,90; глюкоза 0,82-1,23; калий фосфорнокислый двузамещенный 0,12-0,27; агар-агар 0,82-1,40; формалин 10%-ный, мл 0,12-0,20; льняное масло сырое, мл 0,12-0,23; метабен 0,12-0,21; холин-хлорид технический 70%-ный, мл 0,06-0,20; аскорбиновая кислота 0,20-0,43; премикс для птиц 0,68-1,36; вода - остальное до 100%.

Известна питательная среда (авторское свидетельство СССР №681761, МПК А01К 67/00, опубл. 1979 г.), содержащая кормовые дрожжи (40 г), агар-агар (15 г), солодовые ростки (60 г), кукурузную муку (100 г), спирт этиловый (10 г.), формалин 20% (5 мл) и воду (остальное). Однако такая питательная среда имеет низкую выживаемость гусеиц.

Известна питательная среда (авторское свидетельство СССР №731938, МПК А01К 67/00, опубл. 05.05.1980 г.), содержащая глицерофосфат кальция, свекловичный жом, кормовые дрожжи, премикс для птиц, аскорбиновую кислоту, метабен и воду. Компоненты взяты в соотношении, вес.%: свекловичный жом 18,00-22,00; кормовые дрожжи 3,10-3,30; премикс для птиц 1,50-1,70; аскорбиновая кислота 0,14-0,16; метабен (20%-ный в спирте-ректификате) 0,10-0,14; глицерофосфат кальция 0,35-0,45; вода остальное. Однако такая питательая среда имеет низкий выход живых гусениц.

Известна питательная среда для разведения гусениц насекомых, в частности гусениц непарного шелкопряда (авторское свидетельство СССР №884643, МПК А01К 67/00, опубл. 30.11.1981 г.), содержащая агар-агар, семена бобовых, порошок из сухих листьев дуба, яблони, тополя, березы и липы, льняное масло, аскорбиновую кислоту, витамины В1, В2, В6, и фолиевую кислоту, сорбиновую кислоту, автолизат пивных дрожжей и воду. В качестве семян бобовых среда содержит проросшие семена маша. Питательная среда имеет следующее количественное содержание компонентов, вес.%: агар-агар (1,13-1,59), семена бобовых (проросшие семена маша - 12,06-15,26), порошок из сухих листьев дуба (5,28-5,72), яблони (2,26-3,18), тополя (2,26-3,18), березы (0,75-1,91) и липы (0,75-1,91), льняное масло (1,13-1,59), аскорбиновая кислота (0,19-0,48), витамины В1, В2, В6 + фолиевая кислота (0,16-0,19), сорбиновая кислота (0,11-0,16), автолизат пивных дрожжей (13,57-13,99) и вода дистиллированная (остальное до 100%). Питательная среда обеспечивает расширение питающегося видового состава листогрызущих насекомых.

Известна питательная среда для выращивания гусениц насекомых - фитофагов (авторское свидетельство СССР №1161046, МПК А01К 67/00, опубл. 15.06.1985 г.), включающая кормовые дрожжи (3,0-5,0), солодовые ростки (5,0-7,0), аскорбиновую кислоту (0,3-0,5), бензойную кислоту (0,25-0,35), этиловый спирт (1,0-1,2), хлопковый жмых (2,0-4,0), пшеничные отруби (2,0-4,0), свекловичный жом (11,0-13,0), фолиевую кислоту 0,0008-0,0012), уксусную кислоту 4,5%-ную (2,0-4,0) и воду (остальное до 100 масс. %). Однако такая питательная среда имеет недостаточную выживаемость гусениц насекомых - фитофагов.

Известны питательные среды для получения тест - гусениц непарного шелкопряда природной кладки и гусениц младших и старших возрастов лабораторной выкормки (авторское свидетельство СССР №1209131, МПК А01К 67/00, опубл. 07.02.1986 г.). Питательная среда для получения гусениц старших возрастов лабораторной выкормки содержит свекловичный жом, дрожжевой компонент, солодовые ростки, премикс для птиц, дисахара, агар-агар, муку фасолевую, водный раствор формалина, аскорбиновую кислоту, калий двузамещенный фосфорно-кислый, метабен, масло льняное, холинхлорид и воду. С целью повышения качества среды за счет приближения ее состава к природному корму, в качестве дрожжевого компонента она содержит дрожжи пивные, в качестве дисахаров - сахарозу, формалин в виде 40%-ного водного раствора, а также дополнительно казеин и фолиевую кислоту при следующем соотношеии компонентов, масс. %: свекловичный жом 5,6-5,8; дрожжевой компонент (дрожжи пивные) 3,14-3,18; солодовые ростки 2,2-2,22; казеин 2,2-2,22; премикс для птиц 1,57-1,59; дисахара (сахароза) 1,41-1,44; агар-агар 1,25-1,28; мука фасолевая 0,86-0,88; 40%-ный водный раствор формалина 0,78-0,81; аскорбиновая кислота 0,65-0,68; калий двузамещенный фосфорно-кислый 0,31-0,33; метабен 0,31-0,33; масло льняное 0,22-0,25; холинхлорид 0,22-0,25; фолиевая кислота 0,001-0,003; вода остальное. Состав среды обеспечивает круглогодичное получение гусениц и приближен к естественному корму.

Непрерывное получение тест-гусениц непарного шелкопряда необходимо для оперативной оценки качества инсектицидов при их промышленном производстве. Постоянно высокая жизнеспособность тест-насекомых и их стандартность обеспечивает высокое качество оценки инсектицидов в любое время года, а также возможность получения бабочек лабораторной выкормки, не уступающих по биологическим показателям природным особям.

Известна питательная среда для гусениц дендрофильных фитофагов (авторское свидетельство СССР №1507277, МПК А01К 67/00, опубл. 15.09.1989 г.), в частности непарного шелкопряда, включающая верхний слой лесной подстилки (6,0-17,0), свекловичный жом (3,0-10,0), кормовые дрожжи (3,0-5,0), солодовые ростки (5,0-7,0), хлопковый жмых (2,0-4,0), пшеничные отруби (2,0-4,0), аскорбиновая кислота (0,3-0,5), фолиевая кислота (0008-0,012), уксусная кислота 4,5%-ная (2,0-4,0), бензойная кислота (0,25-0,35), этиловый спирт (1,0-1,2), вода (остальное до 100 мас. %). Питательная среда обеспечивает повышение синхронности и скорости развития гусениц за счет использования дополнительного компонента - верхнего слоя лесной подстилки.

Известна питательная среда для гусениц лесных насекомых-фитофагов (авторское свидетельство СССР №1824126, МПК А01К 67/00, опубл. 30.06.1993 г.), содержащая (масс. %): агар-агар 2,0, соевую муку 3,0, зародыши пшеницы 14,0, кормовые дрожжи 2,4, аскорбиновую кислоту 0,6, бензойную кислоту 0,3, этиловый спирт 1,2, фильтровальную бумагу 0,5, льняное семя 0,4, 0,6%-ный раствор глутамевита 0,3 и воду 75,3 мас. %. Искусственная питательная среда (ИПС) обеспечивает повышение выхода гусениц при разведении непарного шелкопряда за счет увеличения их выживаемости. ИПС содержит повышенное количество белка за счет введения в нее соевой муки, фагостимулятора в виде фильтровальной бумаги; линолевую и линоленовую кислоты, содержащиеся в льняном семени; набор необходимых витаминов и минеральных солей, содержащихся в препарате «Глутамевит» и бензойную кислоту в качестве консерванта

Наиболее близким аналогом (прототипом) является искусственная питательная среда (Ильиных А.В. Оптимизированная искусственная питательная среда для культивирования непарного шелкопряда // Биотехнология. - 1996. - №7. - С.42-43) для культивирования гусениц непарного шелкопряда (Lymantria dispar L), содержащая измельченные зернобобовые культуры (кукурузная мука, соевая мука), дрожжи кормовые, агар-агар, стимулятор роста гусениц (аскорбиновая кислота), консервант (метабен и 50%-ная уксусная кислота) и дистиллированную воду.

При разработке оптимального состава искусственной питательной среды при культивировании непарного шелкопряда для получения препаративной формы вирусного препарата перед исследователями стоят следующие проблемы:

- наработка гусеницами оптимальной жировой массы;

- наиболее быстрое достижение целевого возраста гусеницами;

- легкая подверженность заражению.

Анализ выше приведенных аналогов ИПС, в том числе прототипа показывает, что известные составы ИПС содержат большое количество дорогостоящих, а в некоторых случаях и токсичных компонентов. Кроме того, время развития гусениц на данных средах является достаточно длительным, что делает их ресурсо- и энергозатратными, а также обеспечивают низкий выход гусениц непарного шелкопряда.

Техническим результатом заявляемого изобретения является повышение выхода гусениц непарного шелкопряда.

Указанный технический результат достигается тем, что в искусственной питательной среде для культивирования гусениц непарного шелкопряда (Lymantria dispar L), содержащей измельченные зернобобовые культуры, дрожжи кормовые, агар-агар, стимулятор роста гусениц, консервант и дистиллированную воду, согласно изобретения, питательная среда дополнительно содержит масло льняное пищевое, в качестве зернобобовых культур она содержит измельченные бобы чечевицы, муку ржаную и муку гречневую, в качестве консерванта - 10%-ный спиртовый раствор бензойной кислоты, а в качестве стимулятора роста гусениц - раствор комплекса витаминов и микроэлементов при следующем соотношении компонентов, масс. %:

измельченные бобы чечевицы 10,0-15,0 мука ржаная 3,0-7,0 мука гречневая 5,0-10,0 дрожжи кормовые 3,0-6,0 агар-агар 1,0-3,0 масло льняное пищевое 3,0-7,0 водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов 3,0-5,0 10%-ный спиртовый раствор бензойной кислоты 2,0-3,0 вода дистиллированная остальное до 100%.

Водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов содержит воду дистиллированную, витамины С (аскорбиновая кислота), А (ретинол) - 0,7912 мг, В1 (тиамин), В2 (рибофлавин), В5 (пантотеновая кислота), В6 (пиридоксин), В12 (цианокобаламин), Е (токоферол), D2 (эргокальциферол), Р (рутин), РР (никотиновая кислота), микроэлементы Са (кальций), Mg (магний), Р (рутин), Fe (железо), Сu (медь), Zn (цинк), Мn (марганец), I (иод), Se (селен) при следующем соотношении компонентов, мг/литр:

Витамины:

С (аскорбиновая кислота) 50,0 А (ретинол) 0,7912 B1 (тиамин) 1,0 B2 (рибофлавин) 1,0 B5 (пантотеновая кислота) 5,0 B6 (пиридоксин) 1,5 В12 (цианокобаламин) 0,003 Е (токоферол) 10,0 D2 (эргокальциферол) 0,0025 Р (рутин) 10,0 РР (никотиновая кислота) 7,5

микроэлементы:

Са (кальций) 35,0 Mg (магний) 22,0 Р (фосфор) 27,0 Fe (железо) 10,0 Сu (медь) 0,004 Zn (цинк) 0,05 Мn (марганец) 0,05 I (иод) 0,04 Se (селен) 0,1 вода дистиллированная остальное до 1 литра

Предлагаемый состав искусственной питательной среды является более богатым белками, углеводами, витаминами и микроэлементами, чем рецептура у известных аналогов, а также исключает использование формалина или метабена.

На фиг. 1 представлены данные общего веса гусениц при культивировании на предлагаемой ИПС (в граммах).

Ниже приведены примеры 1-3 составов заявляемой питательной среды.

Пример 1. Искусственная питательная среда для культивирования гусениц непарного шелкопряда с минимальным содержанием компонентов, масс. %:

измельченные бобы чечевицы 10,0 мука ржаная 3,0 мука гречневая 5,0 дрожжи кормовые 3,0 агар-агар 1,0 масло льняное пищевое 3,0 водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов 3,0 10%-ный спиртовый раствор бензойной кислоты 2,0 вода дистиллированная остальное до 100%.

Водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов содержит следующие компоненты, мг/литр:

Витамины:

С (аскорбиновая кислота) 50,0 А (ретинол) 0,7912 B1 (тиамин) 1,0 B2 (рибофлавин) 1,0 B5 (пантотеновая кислота) 5,0 B6 (пиридоксин) 1,5 В12 (цианокобаламин) 0,003 Е (токоферол) 10,0 D2 (эргокальциферол) 0,0025 Р (рутин) 10,0 РР (никотиновая кислота) 7,5

микроэлементы:

Са (кальций) 35,0 Mg (магний) 22,0 Р (фосфор) 27,0 Fe (железо) 10,0 Сu (медь) 0,004 Zn (цинк) 0,05 Мn (марганец) 0,05 I (иод) 0,04 Se (селен) 0,1 вода дистиллированная остальное до 1 литра

Пример 2. Искусственная питательная среда для культивирования гусениц непарного шелкопряда со средним содержанием компонентов, мас. %:

измельченные бобы чечевицы 12,5 мука ржаная 5,0 мука гречневая 7,5 дрожжи кормовые 4,5 агар-агар 2,0 масло льняное пищевое 5,0 водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов 4,0 10%-ный спиртовый раствор бензойной кислоты 2,5 вода дистиллированная остальное до 100%.

Состав водного раствора комплекса витаминов и микроэлементов приведен в примере 1.

Пример 3. Искусственная питательная среда для культивирования гусениц непарного шелкопряда с максимальным содержанием компонентов, мас. %:

измельченные бобы чечевицы 15,0 мука ржаная 7,0 мука гречневая 10,0 дрожжи кормовые 6,0 агар-агар 3,0 масло льняное пищевое 7,0 водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов 5,0 10%-ный спиртовый раствор бензойной кислоты 3,0 вода дистиллированная остальное до 100%.

Состав водного раствора комплекса витаминов и микроэлементов приведен в примере 1.

Пример. 4. Способ приготовления искусственной питательной среды

Искусственную питательную среду готовят следующим образом. В емкости вместимостью 500 мл помещают (10±0,1) г агар-агара, добавляют к нему (300±1) мл дистиллированной воды и выдерживают на кипящей водяной бане в течение (45±3) мин. Отдельно готовят и смешивают кормовую часть (мучные компоненты) в емкости вместимостью 500 мл согласно приведенной рецептуре, также добавляют масло льняное пищевое нерафинированное прессовое и витаминный раствор. Бобы чечевицы промывают под проточной водой и ополаскивают дистиллированной водой, замачивают бобы чечевицы за сутки до приготовления ИПС в дистиллированной воде, перед использованием в составе корма размоченные бобы гомогенизируют.

После охлаждения агар-агара до температуры (53±2)°С обе части смешивают согласно рецептуре. Перемешивание осуществляется гомогенизатором при скорости вращения 4000 об/мин.

Среду разливают в чашки Петри диаметром 90 мм по (9±2) мл в центр чашки. После этого поверхность корма стерилизуют бактерицидными лампами в течение (40±10) мин.

Среду хранят в холодильнике при температуре (4±1)°С не более 7 сут.

Пример 5. Оценку качества искусственной питательной среды проводили посредством учета таких показателей: соотношение в составе корма макронутриентов, скорости достижение целевого возраста и веса насекомых.

Как показывают полученные экспериментальные данные (таблицы 1, 2 и фиг. 1), при использовании заявляемого состава ИПС скорость достижения целевого возраста гусеницами непарного шелкопряда возрастает, общий вес насекомых имеет положительную тенденцию к росту, а количество макронутриентов и витаминов получаемых вместе с новым кормом в два раза превышает известный наиболее близкий аналог (прототип).

Таким образом, применение предлагаемой ИПС позволит оптимизировать процесс культивирования целевых насекомых и повысить выход гусениц непарного шелкопряда.

Похожие патенты RU2707631C1

название год авторы номер документа
Питательная среда для гусениц лесных насекомых-фитофагов 1990
  • Дубко Людмила Александровна
  • Сивцова Людмила Ивановна
  • Блинова Наталья Сергеевна
SU1824126A1
Питательная среда для разведения гусениц насекомых 1980
  • Гамаюнова Светлана Геннадиевна
  • Кубайчук Вадим Павлович
SU884643A1
Питательная среда для выращивания гусениц непарного шелкопряда 1979
  • Орловская Евгения Владимировна
  • Масюк Юрий Анатольевич
  • Моисеева Раиса Васильевна
  • Андрианова Нина Ильинична
SU731938A1
Питательная среда для выращивания гусениц насекомых-фитофагов 1983
  • Орловская Евгения Владимировна
  • Монастырский Александр Лазаревич
  • Масюк Юрий Анатольевич
SU1161046A1
Питательная среда разведения гусениц непарного шелкопряда 1976
  • Зиновьева Любовь Афанасьевна
  • Орловская Евгения Владимировна
  • Захарченко Ия Сергеевна
  • Масюк Юрий Анатольевич
SU577001A1
Способ получения тест-гусениц непарного шелкопряда и питательные среды для получения тест-гусениц непарного шелкопряда природной кладки и гусениц младших и старших возрастов лабораторной выкормки 1983
  • Новикова Любовь Константиновна
  • Захарченко Ия Сергеевна
  • Шагов Евгений Михайлович
  • Синицына Людмила Павловна
SU1209131A1
Штамм вируса ядерного полиэдроза непарного шелкопряда Lymantria dispar L., используемый для получения инсектицидного препарата 2017
  • Колосов Алексей Владимирович
  • Моисеева Анастасия Алексеевна
  • Охлопкова Олеся Викторовна
  • Сафатов Александр Сергеевич
RU2662960C1
СПОСОБ ПРОИЗВОДСТВА СПОР МИКРОСПОРИДИИ Nosema pyrausta 2020
  • Токарев Юрий Сергеевич
  • Малыш Юлия Михайловна
  • Грушевая Инна Валентиновна
  • Фролов Андрей Николаевич
RU2763055C1
СПОСОБ РАЗВЕДЕНИЯ КОКЦИНЕЛЛИДЫ Harmonia axyridis Hall 2012
  • Бугаёва Людмила Николаевна
  • Кашутина Евгения Викторовна
  • Кашутин Евгений Николаевич
  • Слободянюк Галина Андреевна
  • Хейшхо Ирина Владимировна
  • Игнатьева Татьяна Николаевна
  • Морозова Лариса Владимировна
RU2520860C2
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИСКУССТВЕННОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ КРУГЛОГОДИЧНЫХ ВЫКОРМОК ТУТОВОГО ШЕЛКОПРЯДА 2023
  • Евлагина Елена Григорьевна
  • Евлагин Виктор Григорьевич
  • Лейнвебер Евдокия Федотовна
  • Юматов Евгений Николаевич
  • Газарян Юлия Александровна
RU2821318C1

Иллюстрации к изобретению RU 2 707 631 C1

Реферат патента 2019 года Искусственная питательная среда для культивирования гусениц непарного шелкопряда Lymantria dispar L.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для выращивания гусениц непарного шелкопряда (Lymantria dispar L.). Питательная среда для культивирования гусениц непарного шелкопряда содержит измельченные бобы чечевицы, муку ржаную, муку гречневую, дрожжи кормовые, агар-агар, масло льняное пищевое, водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов, 10%-ный спиртовой раствор бензойной кислоты и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов. При этом водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов содержит витамины С, витамин А, витамин В1, витамин В2, витамин В5, витамин В6, витамин В12, витамин Е, витамин D2, витамин Р, витамин РР и микроэлементы: Са, Mg , Р, Fe, Сu, Zn, Мn, I, Se и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов. Изобретение позволяет повысить выход гусениц непарного шелкопряда. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 5 пр.

Формула изобретения RU 2 707 631 C1

1. Искусственная питательная среда для культивирования гусениц непарного шелкопряда (Lymantria dispar L), содержащая измельченные зернобобовые культуры, дрожжи кормовые, агар-агар, стимулятор роста гусениц, консервант и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что питательная среда дополнительно содержит масло льняное пищевое, в качестве зернобобовых культур она содержит измельченные бобы чечевицы, муку ржаную и муку гречневую, в качестве консерванта - 10%-ный спиртовой раствор бензойной кислоты, а в качестве стимулятора роста гусениц - раствор комплекса витаминов и микроэлементов при следующем соотношении компонентов, масс. %:

измельченные бобы чечевицы 10,0-15,0 мука ржаная 3,0-7,0 мука гречневая 5,0-10,0 дрожжи кормовые 3,0-6,0 агар-агар 1,0-3,0 масло льняное пищевое 3,0-7,0 водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов 3,0-5,0 10%-ный спиртовой раствор бензойной кислоты 2,0-3,0 вода дистиллированная остальное до 100%

2. Искусственная питательная среда по п. 1, отличающаяся тем, что водный раствор комплекса витаминов и микроэлементов содержит воду дистиллированную, витамины С (аскорбиновая кислота), А (ретинол), В1 (тиамин), В2 (рибофлавин), В5 (пантотеновая кислота), В6 (пиридоксин), В12 (цианокобаламин), Е (токоферол), D2 (эргокальциферол), Р (рутин), РР (никотиновая кислота), микроэлементы Са (кальций), Mg (магний), Р (фосфор), Fe (железо), Cu (медь), Zn (цинк), Mn (марганец), I (йод), Se (селен) при следующем соотношении компонентов, мг/л:

Витамины:

С (аскорбиновая кислота) 50,0 А (ретинол) 0,7912 B1 (тиамин) 1,0 B2 (рибофлавин) 1,0 B5 (пантотеновая кислота) 5,0 B6 (пиридоксин) 1,5 В12 (цианокобаламин) 0,003 Е (токоферол) 10,0 D2 (эргокальциферол) 0,0025 Р (рутин) 10,0 РР (никотиновая кислота) 7,5

микроэлементы:

Са (кальций) 35,0 Mg (магний) 22,0 Р (фосфор) 27,0 Fe (железо) 10,0 Cu (медь) 0,004 Zn (цинк) 0,05 Mn (марганец) 0,05 I (йод) 0,04 Se (селен) 0,1 вода дистиллированная остальное до 1 литра

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2019 года RU2707631C1

ИЛЬИНЫХ А.В
Питательная среда разведения гусениц непарного шелкопряда 1976
  • Зиновьева Любовь Афанасьевна
  • Орловская Евгения Владимировна
  • Захарченко Ия Сергеевна
  • Масюк Юрий Анатольевич
SU577001A1
ОХЛОПКОВА О.В., МОИСЕЕВА А.А
и др
Влияние различных искусственных питательных сред на скорость достижения целевого возраста непарным шелкопрядом (Lymantria dispar L.) Сборник тезисов IV

RU 2 707 631 C1

Авторы

Охлопкова Олеся Викторовна

Моисеева Анастасия Алексеевна

Колосов Алексей Владимирович

Кузнецов Виталий Евгеньевич

Дручинина Анастасия Владимировна

Томилов Алексей Александрович

Борецкая Кристина Александровна

Даты

2019-11-28Публикация

2019-03-27Подача