ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ОТ ГРЫЖИ МЕЖПОЗВОНОЧНОГО ДИСКА Российский патент 2023 года по МПК A61K38/51 A61P19/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к терапевтическому средству от грыжи межпозвоночного диска, содержащему хондроитиназу ABC в качестве активного ингредиента.

Предпосылки создания изобретения

Грыжа межпозвоночного диска представляет собой заболевание, которое вызывает боль в ногах, боль в пояснице и подобное из-за сдавливания нервов спинного мозга и т.д., что является признаком протрузии ткани межпозвоночных дисков в позвоночном канале, поскольку пульпозное ядро перфорирует фиброзное кольцо, находящееся вокруг него. Сообщалось, что терапевтический принцип представляет собой консервативную терапию, и примерно в 90% случаев при помощи такой консервативной терапии происходило вылечивание. В качестве консервативной терапии проводились различные процедуры, такие как отдых, отдых в постели, лекарственное лечение (нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП), кортикостероиды, миорелаксанты), спинной ортопедический аппарат (корсет), тракционная терапия, термотерапия, эпидуральная блокада, блокада нервных корешков и лечебная физкультура. Если в результате такой консервативной терапии улучшение не наблюдается, применяют хирургическое лечение у 10-30% от всех больных с поясничной грыжей межпозвоночного диска. В последние годы для уменьшения инвазии и нагрузки от хирургии был разработан хемонуклеолиз.

Хемонуклеолиз представляет собой способ инъекции фермента в межпозвоночный диск для того, чтобы вызвать нуклеолиз в пульпозном ядре и уменьшение внутреннего давления межпозвоночного диска, чтобы уменьшить давление на корешки спинного нерва.

До настоящего момента сообщалось о способе применения химопапаина в качестве фермента, инъецируемого в межпозвоночный диск, и о его эффективности сообщалось в 1964 году (непатентный документ 1). Вместе с тем, химопапаин также действует на окружающие ткани межпозвоночного диска, включая не только пульпозное ядро, но и спинной мозг, и продажа его в качестве лекарственного препарата в настоящее время прекращена, поскольку отмечались тяжелые неврологические осложнения (параплегия, поперечный миелит, кровоизлияние в мозг и субарахноидальное кровоизлияние, квадриплегия и т.д.) (непатентный документ 2).

Следовательно, какие-либо лекарственные препараты для проведения хемонуклеолиза в настоящее время коммерчески недоступны, и требуется разработка лекарственного препарата, способного безопасно осуществлять хемонуклеолиз.

Считается, что хондроитиназа ABC разлагает цепи глюкозаминогликана протеогликанов, присутствующих в пульпозном ядре (как, например, цепи хондроитинсульфата и цепи гиалуроновой кислоты), чтобы уменьшить внутридисковое давление за счет уменьшения высокой водоудерживающей способности протеогликана, что в результате приводит к снижению давления на корешки спинного нерва. Кроме того, в 1985 было сообщение, что в отличие от химопапаина хондроитиназа ABC, как ожидается, является безопасным лекарственным средством почти без вреда для таких нервных тканей, окружающих межпозвоночный диск, и проводились исследования по использованию хондроитиназы ABC в качестве фермента, инъецируемого в межпозвоночный диск (патентный документ 1, непатентный документ 3, непатентный документ 4).

При этом, поскольку межпозвоночный диск изначально также выполняет функцию упругой прокладки, используемой в позвоночнике для поддержания массы тела, то при избыточном удалении пульпозного ядра ослабляется амортизирующая функция, которой исходно должен обладать межпозвоночный диск. В самом деле, было показано, что для пациентов с уменьшенной в результате хирургического вмешательства, по меньшей мере, на 30% высотой межпозвоночного диска существует возможность боли в спине, которая является стойкой (непатентный документ 5). Поэтому, если пульпозное ядро подвергается нуклеолизу чрезмерно, даже при хемонуклеолизе путем введения хондроитиназы ABC, то ослабляется амортизирующая функция межпозвоночного диска, который изначально должен ею обладать, что в результате приводит к возможности неблагоприятных побочных эффектов.

Кроме того, поскольку хондроитиназа ABC представляет собой чужеродный белок, который отсутствует в организме человека, необходимо добиваться терапии только с применением однократной, а не многократной дозы, также с точки зрения профилактики анафилактического шока или подобного. Проведение терапии с введением однократной дозы означает, что необходимо продемонстрировать заметный терапевтический эффект только при введении однократной дозы и вывести оптимальную дозу с небольшими неблагоприятными побочными эффектами, поскольку введение многократной дозы до полного выздоровления не может быть выполнено.

Кроме того, было проведено много исследований по дегенерации межпозвоночного диска на животных моделях, однако потребовалось много внимания и усилий исследователей, чтобы применить результаты, полученные на животных моделях, для изучения дегенерации межпозвоночного диска у людей в связи с тем, что межпозвоночные диски различаются у разных видов животных (непатентный документ 6).

Особый характер введения однократной дозы и трудности в применении животных моделей для людей, как описано выше, делает хемонуклеолиз с хондроитиназой ABC затруднительным, и в самом деле, практическое использование хондроитиназы ABC пока не реализовано даже сегодня, хотя с 1985 года, описанного выше, прошло 25 лет.

В патентном документе 1 описано лечение грыжи межпозвоночного диска введением хондроитиназы ABC в межпозвоночный диск, так что пульпозное ядро подвергается нуклеолизу, и терапевтический эффект на грыжу межпозвоночного диска был достигнут путем введения хондроитиназы ABC в количестве 100 единиц на межпозвоночный диск в межпозвоночный диск человека. При этом ее эффективная доза все же не была определена, поскольку эффект не является достаточным, и не было проведено исследование неблагоприятных побочных эффектов. Кроме того, в непатентном документе 3 описано, что терапевтический эффект на грыжу межпозвоночного диска был получен путем введения хондроитиназы ABC в количестве 0,5 единиц на межпозвоночный диск в межпозвоночный диск человека. В непатентном документе 4 описано, что хондроитиназу ABC вводили в межпозвоночный диск собаки в количестве 0,5-1, 2,5-5 и 5-10 единиц на межпозвоночный диск, но когда эту дозу пересчитывали в дозу для человека, она составляла, по меньшей мере, 35 единиц, поскольку объем пульпозного ядра у человека приблизительно в 70 раз превышает объем пульпозного ядра у собаки. Однако подробного изучения неблагоприятных побочных эффектов после введения хондроитиназы ABC не проводили.

Таким образом, оптимальная доза хондроитиназы ABC, демонстрирующая максимальный лечебный эффект и минимальное неблагоприятное побочное действие, не была ни раскрыта, ни предложена.

Документ уровня техники

Патентный документ 1: патент США 4696816

Непатентные документы

Непатентный документ 1: Smith L. Enzyme dissolution of the nucleus pulposus in humans. JAMA 1964(2); 187: 137-40.

Непатентный документ 2: US Federal Register. Monday Jan 27, 2003; 68(17): 3886-7.

Непатентный документ 3: Rinsho Seikei Geka (The Journal of the Japanese Clinical Orthopaedic Association) Vol. 42, No. 3, pages 223-228, March, 2007.

Непатентный документ 4: SPINE, 1991; 16(7): 816-19.

Непатентный документ 5: SPINE, 1996; 21(13): 1556-64.

Непатентный документ 6: Eur Spine J, 2008; 17: 2-19.

Краткое описание изобретения

Как описано выше, сообщалось, что хондроитиназа ABC полезна в качестве активного ингредиента лекарственного средства для хемонуклеолиза, однако хондроитиназа ABC еще не применяется на практике из-за серьезных неблагоприятных побочных эффектов, связанных с избыточным растворением пульпозного ядра, что также вызывает обеспокоенность, и неизвестно, можно или нет достичь надежного терапевтического эффекта только от применения однократной дозы, и существует или нет доза без неблагоприятных побочных эффектов.

Задачей настоящего изобретения является предоставление терапевтического средства от грыжи межпозвоночного диска, которое имеет очень мало неблагоприятных побочных эффектов, позволяет добиться длительного действия по ослаблению боли при введении только в однократной дозе и может демонстрировать высокий терапевтический эффект и высокую степень безопасности в клинических приложениях.

Средства для решения этой задачи

В результате дальнейших интенсивных исследований, касающихся лечения хондроитиназой ABC, авторами настоящего изобретения было с удивлением обнаружено, что при введении хондроитиназы ABC в определенном количестве неблагоприятные побочные эффекты могут уменьшаться, и проявляется длительный эффект по ослаблению боли/высокий терапевтический эффект в клинических приложениях, и, таким образом, настоящее изобретение было завершено.

То есть, было обнаружено, что при введении дозы 1-8 единиц хондроитиназы ABC на межпозвоночный диск в межпозвоночный диск человека можно ожидать не только терапевтический эффект, но также можно уменьшить неблагоприятные побочные эффекты, и что можно предоставить прекрасное терапевтическое средство от грыжи межпозвоночного диска, в котором используется хондроитиназа ABC и которое является практичным.

Настоящее изобретение относится к лечебному средству от грыжи межпозвоночного диска, содержащему хондроитиназу ABC в качестве активного ингредиента, и вводимому в межпозвоночный диск человека в количестве 1-8 единиц на межпозвоночный диск.

Также изобретение относится к составу для лечения грыжи межпозвоночного диска, который используется для введения хондроитиназы ABC в межпозвоночный диск человека в количестве 1-8 единиц на межпозвоночный диск.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения грыжи межпозвоночного диска, включающего введение состава, содержащего, в качестве эффективной дозы, 1-8 единиц хондроитиназы ABC, пациенту с грыжей межпозвоночного диска.

Более конкретно, настоящее изобретение заключается в следующем.

(1) Терапевтическое средство от грыжи межпозвоночного диска, которое характеризуется содержанием хондроитиназы ABC в качестве активного ингредиента и которое вводится таким образом, что ингредиент может быть введен в межпозвоночный диск человека в количестве 1-8 единиц на межпозвоночный диск.

(2) Терапевтическое средство согласно приведенному выше (1), где грыжа межпозвоночного диска представляет собой грыжу межпозвоночного диска поясничного отдела.

(3) Терапевтическое средство согласно приведенному выше (1) или (2), где хондроитиназа ABC получена из Proteus vulgaris.

(4) Состав, содержащий хондроитиназу ABC, для лечения грыжи межпозвоночного диска путем введения в межпозвоночный диск человека в количестве 1-8 единиц на диск.

(5) Состав согласно приведенному выше (4), где состав представляет собой состав с однократной дозой.

(6) Состав согласно приведенному выше (4) или (5), где состав представляет собой инъекцию.

(7) Состав по любому из приведенных выше (4)-(6), где грыжа межпозвоночного диска представляет собой грыжу межпозвоночного диска поясничного отдела.

(8) Способ лечения грыжи межпозвоночного диска, включающий введение хондроитиназы ABC в межпозвоночный диск пациента-человека с грыжей межпозвоночного диска в эффективном количестве 1-8 единиц на межпозвоночный диск.

(9) Хондроитиназа ABC для применения в качестве терапевтического средства от грыжи межпозвоночного диска, которая характеризуется использованием таким образом, что она может вводиться в межпозвоночный диск человека в количестве 1-8 единиц на межпозвоночный диск.

Эффекты изобретения

Согласно настоящему изобретению, может быть предоставлено терапевтическое средство от грыжи межпозвоночного диска, которое имеет меньше неблагоприятных побочных эффектов, позволяет завершить лечение грыжи межпозвоночного диска при помощи всего однократной дозы, является безопасным, обладает высоким терапевтическим эффектом и высокой клинической полезностью и является в высшей степени практичным.

Настоящее изобретение предполагает сначала выяснение существования дозы, которая является безопасной и обладает высоким терапевтическим эффектом, а также является клинически полезной при хемонуклеолизе с использованием хондроитиназы ABC, а также выяснение сначала ограниченного диапазона дозы, включающего 1-8 единиц, предпочтительно 1-5 единиц, способствующего в значительной степени практическому использованию хемонуклеолиза путем введения хондроитиназы ABC.

Краткое описание фигур

На фиг.1 представлен график, показывающий изменение боли в ногах (VAS) в зависимости от времени, прошедшего после введения терапевтического средства.

На фиг.2 представлен график, показывающий частоту появления неблагоприятных побочных эффектов в каждой из групп введения соответствующего количества единиц.

На фиг.3 представлен график, показывающий среднюю скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска в каждой из групп введения соответствующего количества единиц.

Способы осуществления изобретения

Ниже описывается вариант осуществления настоящего изобретения.

(1) Активный ингредиент терапевтического средства по настоящему изобретению

Хондроитиназа ABC, используемая в качестве активного ингредиента терапевтического средства по настоящему изобретению, не является особенно ограниченной, при условии, что она является ферментом, обладающим активностью хондроитиназы ABC. Несмотря на то, что ее происхождение также не является особенно ограниченным, предпочтительна хондроитиназа ABC, полученная из микроорганизмов и, предпочтительно, полученная из Proteus vulgaris.

Способ получения такой хондроитиназы ABC также не является особенно ограниченным, и хондроитиназу ABC можно получать, например, путем культивирования микроорганизма, такого как Proteus vulgaris и подобного, или с помощью генной инженерии с использованием ДНК, кодирующей хондроитиназу ABC.

Хондроитиназа ABC как таковая предпочтительно представляет собой фермент, который очищается до такой степени, что может быть использован в медицине и не содержит каких-либо загрязняющих веществ, неприемлемых с медицинской точки зрения.

Более конкретно, такая хондроитиназа ABC обладает ферментативной активностью 270 ед./мг белка или более и содержит эндотоксины, нуклеиновые кислоты и протеазы в количествах, не превышающих количества, соответствующие пределам обнаружения. Такая хондроитиназа ABC может быть получена, например, способом, описанным в JP 6-153947-А.

Далее, в настоящем изобретении за «1 единицу» хондроитиназы ABC принимается количество фермента, высвобождающее 1 мкмоль (мкМ) ненасыщенного дисахарида в минуту в случае, когда ферменту предоставляется возможность вступать в реакцию с хондроитинсульфатом С в качестве субстрата при pH 8,0 и 37°С.

При использовании хондроитиназы ABC, обладающей ферментативной активностью 270 ед./мг белка и более, можно соответствующим образом разрушать протеогликан в участке-мишени, не повреждая ткани вокруг участка-мишени, путем ее введения в живой организм в качестве инъецируемого фармацевтического препарата. Таким образом, фермент может представлять собой безопасное и эффективное лекарственное средство.

(2) Заболевание, на которое направлено действие терапевтического средства

Заболевание, на которое направлено действие терапевтического средства по настоящему изобретению, не является ограниченным, при условии, что оно представляет собой грыжу межпозвоночного диска, и таким заболеванием, на которое направлено действие терапевтического средства, предпочтительно является грыжа межпозвоночного диска поясничного отдела, и особенно предпочтительно среди этого, грыжа межпозвоночного диска поясничного отдела, имеющая место в межпозвоночном диске между четвертым поясничным позвонком и пятым поясничным позвонком, или в межпозвоночном диске между пятым поясничным позвонком и первым крестцом.

(3) Участок/способ/частота введения

Терапевтическое средство по настоящему изобретению применяют для инъекции в пульпозное ядро, находящееся в межпозвоночном диске, где имеет место грыжа межпозвоночного диска. Частота инъекции представляет собой однократную инъекцию.

Цепи хондроитинсульфата и цепи гиалуроновой кислоты в пульпозном ядре межпозвоночного диска разрушаются в результате этой инъекции, так что высокая водоудерживающая способность протеогликанов уменьшается в результате уменьшения внутридискового давления, что приводит к уменьшению давления на спинальные нервные корешки, обусловленного грыжей межпозвоночного диска, исправляя тем самым грыжу межпозвоночного диска.

(4) Доза

Хондроитиназу ABC, которая является активным ингредиентом терапевтического средства по настоящему изобретению, вводят в дозе 1-8 единиц на межпозвоночный диск. Из этого, предпочтительно вводят 1-6 единиц, более предпочтительно вводят 1-5 единиц, более предпочтительно вводят 1-3 единицы, дополнительно предпочтительно вводят 1-2,5 единицы или 1,25-3 единицы, особенно предпочтительно вводят 1,25-2,5 единицы и наиболее предпочтительно вводят 1,25 единицы или 2,5 единицы.

В частности, при дозе 1,25-5 единиц терапевтический эффект является почти таким же (см. фиг.1), и частота появления (%) неблагоприятных побочных эффектов является минимальной при дозе 2,5 единицы (см. фиг.2). Таким образом, для обеспечения эффективного терапевтического эффекта и безопасности только в однократной дозе требуется 1-5 единиц, предпочтительно 1-3 единицы.

(5) Лекарственная форма и т.д.

Терапевтическое средство по настоящему изобретению может быть предоставлено в лекарственной форме, которая обычно применяется в виде инъекций. Например, лекарственная форма может представлять собой любую из форм, являющихся раствором, замороженной формой и лиофилизированной формой. Инъекция может быть изготовлена путем заполнения этим соответствующей емкости, например ампул, флаконов, шприцев для инъекций и т.д. и герметизации контейнера.

Кроме того, при заполнении и герметизации терапевтического средства по настоящему изобретению подходящей емкости, как, например, ампул, флаконов, шприцев для инъекции, в целях предотвращения химической реакции терапевтического средства по настоящему изобретению, особенно окисления, емкость может быть заполнена или герметизирована вместе с инертным газом, таким как азот и редкий газ.

Материал емкости, такой как ампулы, флаконы, шприцы для инъекций, которые можно заполнить терапевтическим средством по настоящему изобретению, не является особенно ограниченным, при условии, что он не воздействует на терапевтическое средство по настоящему изобретению и является фармацевтически приемлемым материалом.

Можно использовать известные способы для составления терапевтического средства по настоящему изобретению. В составе могут быть использованы другие фармацевтически активные ингредиенты и компоненты, которые обычно используются в лекарственных средствах, такие как традиционные эксципиенты, стабилизаторы, связующие, эмульгаторы, осмотические агенты, буферы, регуляторы pH, изотонические агенты, консерванты, успокаивающие средства, красители или подобные, при условии, что они не оказывают негативного эффекта на активность собственно хондроитиназы ABC и не оказывают негативного эффекта на действие хондроитиназы ABC.

ПРИМЕРЫ

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно при помощи примеров, но они являются иллюстративными для настоящего изобретения, и сферу применения настоящего изобретения не следует рассматривать как ограниченную ими.

Пример 1

Получение терапевтического средства по настоящему изобретению

(1) Получение хондроитиназы ABC

Хондроитиназу ABC получали путем культивирования Proteus vulgaris и очистки супернатанта культуры согласно способу, описанному в JP 6-153947-А.

Все соответствующие ферментативные активности полученной хондроитиназы ABC находились в диапазоне от 270 до 480 ед/мг белка. Кроме того, содержание эндотоксинов, нуклеиновых кислот и протеаз в хондроитиназе ABC для каждого препарата находилось на границе обнаружения или ниже этого предела.

(2) Состав

Следующие три вида лиофилизированных препаратов для инъекций (A)-(C), содержащие хондроитиназу ABC, каждый содержал следующее количество единиц и следующие входящие в состав ингредиенты.

(A) 5 единиц хондроитиназы ABC

(B) 10 единиц хондроитиназы ABC

(C) 20 единиц хондроитиназы ABC

Ингредиенты состава:

Гидрат вторичного кислого фосфата натрия 1,125 мг Первичный кислый фосфат натрия 0,3 мг Сахароза 5 мг Полиэтиленгликоль 3350 10 мг

(Примечание: полиэтиленгликоль 3350 соответствует macrogol 4000, включенному в перечень японской фармакопеи.)

Кроме того, лиофилизированный препарат для инъекции, содержащий только входящие в состав ингредиенты (не содержащие хондроитиназы ABC), полученные таким же образом, использовали в качестве плацебо.

(3) Растворение перед введением

Готовый к использованию раствор (4 мл), имеющий следующий состав, перед использованием добавляли в каждому из составов (A)-(C) (в том числе плацебо), описанным выше, чтобы растворить составы для подготовки состава с 1,25 ед./мл для введения, состава с 2,5 ед./мл для введения и состава с 5 ед./мл для введения, соответственно. Состав плацебо готовили таким же образом.

Готовый к использованию раствор:

Гидрат вторичного кислого фосфата натрия 3,375 мг Первичный кислый фосфат натрия 0,9 мг Сахароза 15 мг Полиэтиленгликоль 3350 (соответствующий macrogol 4000, включенному в перечень японской фармакопеи) 30 мг Натрия хлорид 36 мг Вода для инъекций 4 мл

Пример 2

Исследование на пациентах с грыжей межпозвоночного диска

1. Субъекты

Японские пациенты (194 случаев, в общей сложности) в возрасте 20-70 лет и со следующими грыжами межпозвоночного диска поясничного отдела служили в качестве субъектов:

пациенты с протрузионной грыжей или сублигаментозной экструзионной грыжей (не выступающие в задний продольный лигамент), у которых грыжа межпозвоночного диска поясничного отдела, имеющая место в межпозвоночном диске между четвертым поясничным позвонком и пятым поясничным позвонком или в межпозвоночном диске между пятым поясничным позвонком и первым крестцом была подтверждена ЯМР-томографией и клинические симптомы соответствовали расположению поврежденных нервных корешков; и

пациенты в случаях, при которых наблюдается шестой поясничный позвонок и у которых поврежден нервный корешок пятого поясничного позвонка или нервный корешок первого крестца и клинические симптомы соответствовали расположению поврежденных нервных корешков.

Описанные выше субъекты были отнесены к каждой из групп введения плацебо (47 субъектов), группы введения 1,25 единицы хондроитиназы ABC (49 субъектов), группы введения 2,5 единицы хондроитиназы ABC (49 субъектов) и группы введения 5 единиц хондроитиназы ABC (49 человек), и соответствующие составы, как описано выше, вводили соответственно.

2. Способ введения терапевтического средство по настоящему изобретению

Из каждого состава (4 мл) для введения, как описано в примере 1, 1 мл такого состава использовали для введения. Таким образом, количество фермента, который должен быть введен, составляет 1,25 ед/мл в случае состава для введения 1,25 единиц, 2,5 ед/мл в случае состава для введения 2,5 единиц и 5 ед/мл в случае состава для введения 5 единиц.

Используя такие составы, однократную дозу 1 мл каждого инъецировали в пульпозное ядро межпозвоночного диска, как показано ниже.

3. Оценка

(1) Фармакологическая оценка

(а) Оценка боли субъектом (визуальная аналоговая шкала: VAS)

В каждой временной точке 1 неделя, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недели, 6 недель, 13 недель, 26 недель, 39 недель и 52 недели после введения состава проводили определение «сильнейшей боли в ногах за прошедший 24-часовой период (оценка по VAS)», которая оценивалась самим субъектом (определение значения по VAS).

Оценку по VAS субъект проводил перед сном. На 100 мм прямой линии «листка по оценке боли», в котором «отсутствие боли» соответствует левому концу прямой линии, а «самая большая боль в прошлом» соответствует правому концу, степень боли отмечалась самим субъектом точкой.

Расстояние (мм) от левого конца той же прямой линии до точки, отмеченной субъектом, измеряли, чтобы оценить степень боли. Результаты этой оценки анализировали с помощью теста множественного сравнения типа Dunnett с использованием группы плацебо в качестве контроля.

Кроме того, оценивали скорость изменения боли (скорость изменения по VAS). Скорость изменения по VAS определяли путем получения вариации по VAS путем вычитания значения по VAS на 13 неделе после введения состава из значения по VAS до введения состава, и деления вариации по VAS на значение по VAS до введения состава. Для этой вариации по VAS проводили ковариационный анализ (p<0,05), используя группу плацебо в качестве контроля.

(b) Неврологическое обследование

Тест на подъем прямой ноги (SLR-тест) выполняли через 13 недель после введения состава, чтобы исследовать нервное возбуждение, вызванное грыжей межпозвоночного диска.

SLR-тест представляет собой одно из неврологических обследований грыжи межпозвоночного диска поясничного отдела, и, при напряжении нижних конечностей, случай, при котором угол подъема прямой ноги составляет 70 градусов или менее, определяется как «положительный», и случай, при котором угол подъема прямой ноги превышает 70 градусов, определяется как «отрицательный». До введения состава в данном исследовании все субъекты были положительными.

Частота положительных и отрицательных случаев в SLR-тесте для каждой группы суммировали, и соотношение отрицательных случаев в SLR-тесте исследовали при помощи множественного сравнения Steel-type с использованием группы плацебо в качестве контроля.

Кроме того, оценку эффективности действия препарата проводили в 193 случаях подвергаемых лечению субъектов.

(2) Оценка безопасности

Оценку безопасности проводили в 193 случаях подвергаемых лечению субъектов.

Было определено число появлений и частота неблагоприятных побочных эффектов. Оценку проводили до 13 недель после введения состава. При этом среди неблагоприятных побочных эффектов, следующие пункты (а) и (b) оценивали до 52 недель после введения;

при сравнении со значением до введения состава, (а) случаи, при которых скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска была эквивалентна 30% или больше после такого введения, и (b) случаи, при которых вертебральный задний угол тела позвонка был эквивалентен 5 градусам или больше.

Кроме того, оценка безопасности по пункту (b), такая, что вертебральный задний угол тела позвонка должен быть эквивалентен 5 градусам или более, является показателем, связанным с нестабильностью межпозвоночного диска, который устанавливается Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA).

Средняя скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска в каждой группе введения, получающей определенное количество единиц, определялась через 13 недель после введения состава.

4. Результат

(1) Фармакологическая оценка

(a) VAS

На фиг.1 продемонстрирована сильнейшая боль в ногах (VAS) после введения состава. На горизонтальной оси фиг.1 показано время (недели) после введения, и на вертикальной оси показано значение (мм) по VAS. Ромбический значок (♦) на графике показывает результаты для группы плацебо, черный кружок (●) показывает результаты для группы введения 1,25 единицы хондроитиназы ABC, квадратный значок (■) показывает результаты для группы введения 2,5 единицы хондроитиназа ABC, и значок черного треугольника (▲) показывает результаты для группы введения 5 единиц хондроитиназы ABC.

Эффект подавления боли наблюдался с первой недели в любой из групп введения составов. В частности, значительный эффект подавления боли (p<0,05) наблюдался, начиная с первой недели в группе введения состава с 1,25 единицы хондроитиназы ABC, и в группе введения состава с 5 единицами хондроитиназы ABC, по сравнению с группой плацебо. Кроме того, в недели 39 и 52 после введения, значительный эффект подавления боли (p<0,01 и p<0,001) был продемонстрирован во всех группах введения, по сравнению с группой плацебо. Эффекты подавления боли были в существенной степени равными в группе введения 1,25 единицы, группе введения 2,5 единицы и группе введения 5 единиц, и было показано, что такой эффект подавления был эффективным в течение одного года (52 недели). В результате, было показано, что однократное введение состава демонстрировало значительный эффект подавления боли.

Кроме того, скорость изменения по VAS через 13 недель после введения составляла 66% в группе введения 1,25 единицы хондроитиназы ABC, 61% в группе введения 2,5 единицы хондроитиназы ABC и 69% в группе введения 5 единиц хондроитиназы ABC, и было подтверждено существенное снижение скорости изменения в VAS в любой из групп введения вышеприведенных единиц, по сравнению с таковой (45%) для контрольной группы введения.

(a) Неврологическое обследование (SLR-тест)

Отрицательная скорость в группе плацебо составляла около 50%, однако отрицательная скорость в группах введения составляла для всех случаев 60% или более. В частности, отрицательная скорость в группе введения 1,25 единицы хондроитиназы ABC достигала 80% и более.

В любой из групп введения наблюдалось увеличение доли отрицательного ответа. В частности, доля отрицательных ответов была значительно увеличена (p<0,01) в группе введения 1,25 единицы хондроитиназы ABC, по сравнению с группой введения плацебо.

(2) Оценка безопасности

Показатель частоты неблагоприятных побочных эффектов показан на фиг.2. На горизонтальной оси фиг.2 представлены каждая из групп введения, и на вертикальной оси показан показатель частоты (%) неблагоприятных побочных эффектов. Показатель частоты неблагоприятных побочных эффектов в группе введения 5 единиц хондроитиназы ABC составлял 61,2%, 44,9% в группе введения 2,5 единицы хондроитиназы ABC и 46,9% в группе введения 1,25 единицы хондроитиназы ABC. Из этого, было показано, что минимальное значение показателя частоты неблагоприятных побочных эффектов было в районе 2,5 единиц на межпозвоночный диск для группы введения, и было выявлено наличие дозы, способной вызывать минимальные неблагоприятные побочные эффекты.

Затем, были изучены неблагоприятные побочные эффекты, как эффекты нестабильности межпозвоночного диска: (a) в случаях, когда вертебральный задний угол тела позвонка был эквивалентен 5 градусам или более, и (b) в случаях, когда средняя скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска была равна 30% или более. Результаты приведены в таблице 1 ниже.

Таблица 1 Группа введения Группа плацебо N=47 1,25 ЕД. группа N=49 2,5 ЕД. группа
N=49 5 ЕД. группа N=49 10 Ед. группа N=6 Вертебральный задний угол тела позвонка 0 (0%) 0 (0%) 0 (0%) 1 (2,0%) 2 (33,3%) Уменьшение высоты межпозвоночного диска 0 (0%) 4 (8,2%) 4 (8,2%) 7 (14,3%) - - Нет данных

В результате, в группе введения 5 единиц хондроитиназы ABC наблюдали 1 случай (показатель частоты 2%), где вертебральный задний угол тела позвонка 5 или более градусов. С другой стороны, не было ни одного случая, когда вертебральный задний угол тела позвонка составлял 5 градусов или более в группе введения 1,25 единицы хондроитиназы ABC и в группе введения 2,5 единицы хондроитиназы ABC. Далее, в группе введения 10 единиц хондроитиназы ABC в качестве сравнительного примера наблюдалось 2 случая (показатель частоты 33,3%), где вертебральный задний угол тела позвонка составлял 5 градусов или более, показывая, что неблагоприятные побочные эффекты, связанные с нестабильностью межпозвоночного диска, происходили с высокой частотой, что было несовместимо с практическим применением.

Было 7 случаев (показатель частоты 14,3%), где скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска составляла 30% и более в группе введения 5 единиц хондроитиназы ABC, 4 случая (показатель частоты 8,2%) в группе введения 1,25 единицы хондроитиназы ABC и 4 случая (показатель частоты 8,2%) в группе введения 2,5 единицы хондроитиназы ABC. Было обнаружено, что проявление неблагоприятных побочных эффектов быстро уменьшалось.

Далее, средняя скорость снижения высоты межпозвоночного диска в группах введения каждого их количеств единиц показана на фиг.3. На горизонтальной оси фиг.3 показана каждая из групп введения, и на вертикальной оси указана скорость уменьшения (в %) высоты межпозвоночного диска.

В результате, было установлено, что средняя скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска в группах введения 5 единиц, 2,5 единицы и 1,25 единицы хондроитиназы ABC везде составляла менее 3-0%. Каждая из этих групп введения демонстрировала большую скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска по сравнению с группой плацебо, и было показано наличие терапевтического эффекта. Кроме того, в группе введения 10 единиц хондроитиназы ABC в сравнительном примере скорость уменьшения составляла 30% или более.

Кроме того, увеличение титра антител IgG против хондроитиназы ABC, что является неблагоприятным побочным эффектом, наблюдалось в 1 случае в группе введения 2,5 единицы и в 1 случае в группе введения 5 единиц. Такое увеличение титра антител не наблюдалось в группе введения 1,25 единиц.

(Сравнительный пример) Оценка безопасности при введении 10 единиц

10 единиц хондроитиназы ABC на межпозвоночный диск вводили пациентам (6 человек) с поясничной грыжей межпозвоночного диска таким же образом, как описано выше. В качестве оценки безопасности определяли (а) скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска на 12 неделе после введения, и (b) случай с числом и показателем частоты вертебрального заднего угла тела позвонка, равного 5 градусам или более.

Скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска через 12 недель после введения показана на фиг.3. В результате, средняя скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска составляла 45,4%, что было значительно больше, чем значение (30%), при котором могут возникать проблемы с безопасностью.

Кроме того, результаты для вертебрального заднего угла тела позвонка, равного 5 градусам или более, также представлены в таблице 1. Как показано в таблице 1, 33,3% пациентов, которые продемонстрировали вертебральный задний угол тела позвонка, равный 5 градусам или более, наблюдались в группе введения 10 единиц хондроитиназы ABC. Из этих результатов сделано заключение, что группа введения 10 единиц имеет высокий риск, связанный с нестабильностью позвоночника.

Объем пульпозного ядра у людей и собак определяли при помощи МРТ для того, чтобы оценить дозу хондроитиназы ABC, эффективной для людей, исходя из дозы хондроитиназы ABC для собак, как описано в непатентном документе 4.

(Сравнительный пример) Сравнение объема пульпозного ядра с помощью МРТ

Т2-взвешенные изображения получали путем МРТ-отражения межпозвоночного диска между четвертым поясничным позвонком и пятым поясничным позвонком у 9 здоровых добровольцев (6 мужчин и 3 женщины) и резекционных образцов собак (6 животных), и измеряли малую ось, главную ось и область коронарного отображения пульпозного ядра, и малую ось сагиттального отображения пульпозного ядра. Рассчитывали объем пульпозного ядра (коронарная площадь поперечного сечения x малую ось сагиттального поперечного сечения). Результаты приведены в таблице 2 ниже.

Таблица 2 Виды животных Объем пульпозного ядра (мм³) (Расчетное значение по МРТ-изображению) Отношение среднего объема пульпозного ядра по МРТ-изображению Человек 7852,2±2041,2 Человек/собака=70,2 Собака (Гончая) 111,8±70,3 Среднее±стандартное отклонение

5. Результаты

Показатель частоты демонстрировавших вертебральный задний угол тела позвонка, равный 5 градусам или более, составлял 33,3% при введении 10 единиц хондроитиназы ABC, тогда как было обнаружено, что такой показатель частоты может быть значительно снижен до 2% при половинной дозе, т.е. при введении 5 единиц.

Кроме того, в то время как средняя скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска также достигала даже 45,4% при введении 10 единиц хондроитиназы ABC, скорость уменьшения высоты межпозвоночного диска составляла 17,6% в группе введения 5 единиц хондроитиназы ABC. Таким образом, было показано, что уменьшение высоты межпозвоночного диска можно заметно подавить путем снижения дозы с 10 единиц до половинной дозы, т.е. 5 единиц.

В непатентном документе 3 описано, что когда 0,5 единицы хондроитиназы ABC на межпозвоночный диск вводили в межпозвоночный диск человека, быстрого ослабления боли в ноге не возникало, указывая на то, что 0,5 единиц являлось незначительной дозой, однако не было выполнено подробных исследований на предмет выявления неблагоприятных побочных эффектов, и клинически эффективная доза была неизвестна.

Путем введения хондроитиназы ABC в диапазоне 1-8 единиц на межпозвоночный диск, предпочтительно 1-5 единиц на межпозвоночный диск согласно настоящему изобретению можно уменьшить неблагоприятные побочные эффекты, тогда как значительное ослабление боли достигалось только при однократной дозе. Кроме того, было установлено, что при выборе количества введения хондроитиназы ABC в диапазоне 1-3 единицы, неблагоприятные побочные эффекты можно в дальнейшем уменьшить, несмотря на проявление такого же эффекта в ослаблении боли при более высокой дозе в 5 единиц.

С другой стороны, в непатентном документе 4 описано, что даже когда 0,5-1 единицу хондроитиназы ABC на межпозвоночный диск вводили в межпозвоночный диск собаки, быстрого уменьшения пульпозного ядра не происходило, указывая на то, что доза была слишком мала. Кроме того, в непатентном документе 6 описано, что установка масштабирования необходима при анализе экспериментальных результатов на животных моделях, поскольку поведение межпозвоночного диска зависит от размера межпозвоночного диска. Затем в примере из указанной выше ссылки было подтверждено, что объем пульпозного ядра человека был в 70 раз больше, чем объем пульпозного ядра собаки. Принимая во внимание описания в непатентных документах 4 и 6, и учитывая, что объем пульпозного ядра человека был гораздо больше, чем объем пульпозного ядра собаки, даже при введении 35-70 единиц хондроитиназа ABC, что в 70 раз превышало 0,5-1 единицу, такая доза, по оценкам, не была достаточна.

Таким образом, доза для человека, оцененная по результатам экспериментов на собаках, как описано в непатентном документе 4, совершенно отличается от дозы, которая была найдена в настоящем изобретении, и было чрезвычайно сложно прогнозировать эффективную дозу для человека.

Таким образом, было установлено, что неблагоприятные побочные эффекты можно уменьшить при введении 1-8 единиц хондроитиназы ABC на межпозвоночный диск в межпозвоночный диск человека, и грыжа межпозвоночного диска может подвергаться лечению только в однократной дозе.

Промышленная применимость

Настоящее изобретение может предоставлять терапевтическое средство от грыжи межпозвоночного диска, которое имеет очень мало неблагоприятных побочных эффектов, позволяет добиться длительного эффекта по ослаблению боли при введении только в однократной дозе и может демонстрировать высокий терапевтический эффект и высокую безопасность при клиническом применении.

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для лечения грыжи межпозвоночного диска. Способ лечения грыжи межпозвоночного диска включает инъекцию 1-3 единиц хондроитиназы ABC в однократной дозе в межпозвоночный диск пациента-человека, в котором присутствует пульпозное ядро и грыжа межпозвоночного диска. Предложен также вариант указанного способа лечения, включающий инъекцию 1,25 единицы хондроитиназы ABC в однократной дозе в межпозвоночный диск поясничного отдела пациента-человека, в котором присутствует пульпозное ядро и грыжа межпозвоночного диска, причем хондроитиназа ABC содержится в лиофилизированном составе. Группа изобретений обеспечивает максимальный лечебный эффект при минимальных неблагоприятных побочных эффектах, позволяет добиться длительного действия по ослаблению боли при введении только в однократной дозе. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 2 пр.

1. Способ лечения грыжи межпозвоночного диска, включающий инъекцию 1-3 единиц хондроитиназы ABC в однократной дозе в межпозвоночный диск пациента-человека, в котором присутствует пульпозное ядро и в котором присутствует грыжа межпозвоночного диска, при этом хондроитиназа ABC содержится в составе.

2. Способ по п.1, где состав является лиофилизированным.

3. Способ по п.1, где состав дополнительно содержит по меньшей один ингредиент, выбранный из группы, состоящей из эксципиента, стабилизатора, связующего, эмульгатора, осмотического агента, буфера, регулятора pH, изотонического агента, консерванта, успокаивающего средства и красителя.

4. Способ по п.1, где способ способен обеспечить значительное снижение боли, оцениваемое посредством VAS, в сравнении с плацебо в течение 13 недель после инъекции.

5. Способ по п.1, где грыжа межпозвоночного диска представляет собой грыжу межпозвоночного диска поясничного отдела.

6. Способ по п.1, где хондроитиназа ABC получена из Proteus vulgaris.

7. Способ по п.1, где 1,25 единицы хондроитиназы ABC вводят посредством инъекции.

8. Способ по п.1, где 1,25 единицы хондроитиназы ABC вводят посредством инъекции в межпозвоночный диск поясничного отдела пациента-человека,

при этом хондроитиназа ABC содержится в составе,

при этом способ способен обеспечить значительное снижение боли, оцениваемое посредством VAS, в сравнении с плацебо в течение 13 недель после инъекции.

9. Способ лечения грыжи межпозвоночного диска поясничного отдела, включающий

инъекцию 1,25 единицы хондроитиназы ABC в однократной дозе в межпозвоночный диск поясничного отдела пациента-человека, в котором присутствует пульпозное ядро и в котором присутствует грыжа межпозвоночного диска,

при этом хондроитиназа ABC содержится в составе,

где состав является лиофилизированным,

где состав дополнительно содержит по меньшей один ингредиент, выбранный из группы, состоящей из эксципиента, стабилизатора, связующего, эмульгатора, осмотического агента, буфера, регулятора pH, изотонического агента, консерванта, успокаивающего средства и красителя,

где способ способен обеспечить значительное снижение боли, оцениваемое посредством VAS, в сравнении с плацебо в течение 13 недель после инъекции, и

где хондроитиназа ABC получена из Proteus vulgaris.