Способ подготовки препаратов зубов для морфологических исследований цемента зуба в растровом электронном микроскопе Российский патент 2023 года по МПК A61C19/00 A61C19/04 G01N1/32 G01N1/36 

Изобретение относится к медицине, в частности стоматологии, морфологии, гистологии, и может применяться для исследования морфологической структуры цемента зуба в растровом электронном микроскопе, именно клеточной и бесклеточной зон, их взаимоотношения по всей поверхности цемента различных участков на продольном срезе зуба, рельеф изучаемой поверхности. Полученные данные могут быть использованы в высокоточной диагностике различных форм нарушения прорезывания третьих моляров.

Известен способ препарирования, представляющий собой комбинацию методов фиксации тканей в плотный компаунд эпоксидной смолы с известными техническими приемами изготовления шлифов зубов (Костиленко Ю.П., Бойко И.В. Журнал «Стоматология», №5, 2005).

Зубы после удаления промывают в физиологическом растворе, дегидратируют и пропитывают эпоксидной смолой, помещают в нее. После полимеризации полученный блок разрезают сепаровочным диском, шлифуют торцевые поверхности до получения ровного шлифа. Затем частично протравливают эмаль в хелатообразующем агенте (трилон Б) и наносят на препарат слой электропроводящего вещества. На данном этапе препарат пригоден для изучения в сканирующем электронном микроскопе. Для исследования препарата в трансмиссионном электронном микроскопе при помощи нитроклетчатки снимают отпечатки, с которых готовят угольные реплики путем напыления в вакууме спектрально чистого графита. Реплики наносят на предметные сетки и исследуют (Костиленко Ю.П., Бойко И.В. Метод изготовления препаратов прижизненно сохранных зубов для многоцелевых исследований. Клиническая анатомия и оперативная хирургия 2004; 3:5:63-65).

Недостатком данного способа является неконтролируемое воздействие на неорганический компонент, требуются большие временные затраты на подготовку с привлечением высококвалифицированных специалистов, не учитываются анатомические и гистологические особенности строения корневой части исследуемых зубов.

Известен способ приготовления препаратов для исследования зубов с применением сканирующего акустического микроскопа. Зубы распиливают при помощи алмазной пилы диаметром 50 мм, толщиной 0,5 мм при скорости 1500 об/мин. Поверхность спила обрабатывают на чугунных планшайбах с применением свободного абразива - корундового порошка со средней величиной зерна 40 мкм (М40). После предварительного выравнивания поверхности образцы дошлифовывают вручную на стеклянных пластинах с использованием абразивных порошков меньшего размера зерна - вплоть до 5 мкм (М5). (Л.А. Денисова. Акустическая гистология тканей зуба. http://www.mediasphera.ru/joumals/stomo/detail/261/3954).

Недостатком данного способа является большая вероятность получения искажений и множества артефактов при его применении из-за использования процедуры ручного шлифования на заключительном этапе, недостаточно гладкую и ровную поверхность образцов из-за использования корундового порошка с низкими абразивными свойствами.

Известен способ приготовления препаратов зубов для исследования с применением атомно-силового и инвертированного микроскопов. Препарат шлифуют на шлифовально-полировальном станке шлифовальными кругами «hermes». После шлифования препарат промывают струей дистиллированной воды в течение 2 минут, затем полируют на шлифовально-полировальном станке «Нейрис» с использованием полиэтиленового полировального круга с алмазной суспензией и охлаждают под струей дистиллированной воды в течение 2 минут, высушивают препарат с использованием горелки ГП при температуре 35°С в течение 3 минут. Травят поверхность препарата 37% ортофосфорной кислотой Н₃РО₄ в течение 2 секунд и промывают под струей дистиллированной воды в течение 2 секунд. Высушивают препарат с использование горелки ГП при температуре 39°С в течение 5 минут и укладывают его на предметный стол АСМ или предметный столик инвертированного микроскопа для исследования (Патент RU 2458975 С1 от 04.05.2011 г.).

Недостатки данного способа заключаются в том, что его применение невозможно при исследовании различных участков цемента. Для получения шлифов других слоев необходимо повторно подготавливать образец, что является трудоемким и затруднительным для исследования серийных групп. Данный метод взят нами за прототип.

Заявляемый способ изготовления препаратов цемента зубов для морфологических исследований в растровом электронном микроскопе прост и удобен в применении, отличается высокой точностью и позволяет изготавливать и одновременно исследовать максимально качественные образцы цемента различных участков на продольном распиле зуба.

Техническим результатом заявленного изобретения является усовершенствование способа изготовления препаратов зубов для морфологических исследований структуры цемента различных участков в растровом электронном микроскопе, под точным и объективным контролем сошлифовывания необходимой толщины твердых тканей, позволяющего исследовать клеточный и бесклеточный цемент, рельеф всей изучаемой поверхности корневой части зуба.

Технический результат достигается тем, что в способе изготовления препаратов зубов для морфологических исследований цемента различных участков в растровом электронном микроскопе осуществляется продольное распиливание зуба алмазным диском с водяным охлаждением, дозированное шлифование и комбинированное полирование цемента кругами с алмазной пастой W52500grit, протравливание 37% ортофосфорной кислотой в течение 20 секунд, что позволяет изучать рельеф и взаимоотношение клеточного и бесклеточного участков.

Способ изготовления препаратов зубов для морфологических исследований цемента различных участков осуществляют следующим образом. Зуб после экстракции помещают в 40% раствор формальдегида, затем его фиксируют в столярной струбцине таким образом, чтобы линия распила проходила строго через все участки цемента от пришеечного до апикального, с помощью алмазного диска диаметром 20 мм с охлаждением дистиллированной водой производят вертикальную сепарацию зуба, тем самым получают продольный срез. Готовят патрон из полипропиленовой трубы с внутренним диметром 30 мм, толщиной стенки 5 мм, путем отрезания фрагмента с помощью ножниц для резки труб ПВХ, получают заготовку высотой 10 мм, внутренним диаметром 30 мм, толщиной стенки 5 мм, алмазным надфилем убирают неровности заготовки, штангенциркулем контролируют высоту и параллельность. Подготовленный ранее фрагмент зуба помещают в патрон, размещенный на ровной горизонтальной поверхности, срезом вниз, заливают двухкомпонентной эпоксидной смолой на 24 часа, получают препарат.

На втором этапе препарат шлифуют на шлифовально-полировальном станке «МР-1BGrinderPolisher» шлифовальными кругами «Dexter» зернистостью 1000 grit в течение 2 минут с охлаждением дистиллированной водой, при этом сошлифовывают 0,5 мм препарата. Контроль сошлифованного слоя осуществляют с помощью штангенциркуля. После чего производят последовательную обработку шлифовальными кругами «Dexter» зернистостью 1500, 2000 grit в течение 1 минуты каждым из них с охлаждением дистиллированной водой, при этом сошлифовывают еще 0,5 мм препарата. После шлифования и контроля толщины препарат очищают в ультразвуковой ванне 1 минуту, затем полируют на шлифовально-полировальном станке «МР-1BGrinderPolisher» с использованием фланелевого полировального круга с алмазной пастой W52500grit 2 минуты, охлаждают дистиллированной водой. После полирования препарат очищают в ультразвуковой ванне 2 минуты. Высушивают его с использованием целлюлозной салфетки до исчезновения видимых следов влаги. Протравливают поверхность препарата 37% ортофосфорной кислотой Н₃РО₄ 20 секунд. Далее промывают под струей дистиллированной воды 15 секунд. Высушивают его с использованием целлюлозной салфетки до исчезновения видимых следов влаги и укладывают на предметный стол растрового электронного микроскопа для исследования. Применение описанного способа позволяет исследовать морфологию цемента на продольном срезе в растровом электронном микроскопе. Применение алмазной пасты W52500grit позволяет существенно сократить время полирования препарата, улучшить качество и рельеф изучаемой поверхности, минимизировать вероятность загрязнения красящими компонентами.

Полученный в процессе подготовки рельеф пригоден для морфологического исследования цемента. Полученные данным способом препараты позволяют исследовать структуру различных участков клеточного и бесклеточного цемента, их взаимоотношение и рельеф поверхности. Данный способ удобен для изготовления до 25 высококачественных препаратов за лабораторный день одним препаратором, что делает возможным контролируемое исследование морфологии цемента на больших выборках. Полученные данные могут быть использованы в высокоточной диагностике различных форм нарушения прорезывания третьих моляров.

Пример 1. Пациентка П., 27 лет.

Жалобы: обратилась с целью санации рта, профилактического осмотра.

План лечения: 1. Санация рта. 2. Удаление зуба 48. 3. Подготовка и морфологическое исследование препарата зуба 48 в растровом электронном микроскопе.

Пациентке проведено удаление зуба 48, который поместили в 40% раствор формалина. Зуб фиксировали в столярной струбцине таким образом, чтобы линия распила проходила строго через все участки цемента от пришеечного до апикального, с помощью алмазного диска диаметром 20 мм с охлаждением дистиллированной водой произвели вертикальную сепарацию зуба, тем самым получили продольный срез. Изготовили патрон, с помощью ножниц для резки труб ПВХ отрезали от полипропиленовой трубы с внутренним диаметром 30 мм, толщиной стенок 5 мм, заготовку высотой 10 мм с внутренним диаметром 30 мм, толщиной стенок 5 мм, алмазным надфилем сошлифовали неровности, провели контроль толщины и параллельности заготовки с помощью штангенциркуля. Патрон разместили на ровной горизонтальной поверхности, в него поместили фрагмент зуба срезом вниз, залили двухкомпонентной эпоксидной смолой на 24 часа.

Провели поэтапное и последовательное шлифование препарата на станке «МР-1В GrinderPolisher» шлифовальными кругами «Dexter» зернистостью 1000, 1500, 2000grit с охлаждением дистиллированной водой и точным контролем снимаемого слоя поверхности препарата с помощью штангенциркуля, при этом шлифовальным кругом «Dexter» зернистостью 1000 grit сошлифовали 0,5 мм препарата, после чего обработали шлифовальными кругами «Dexter» зернистостью 1500, 2000 grit, сошлифовали еще 0,5 мм препарата, произвели очистку препарата в ультразвуковой ванне 1 минуту, после провели полирование на шлифовально-полировальном станке «МР-1В GrinderPolisher» с использованием фланелевого полировального круга с алмазной пастой W52500grit 2 минуты, охладили и промыли дистиллированной водой, очистили в ультразвуковой ванне 2 минуты, препарат высушили с использованием целлюлозной салфетки до исчезновения видимых следов влаги, протравили поверхность 37% ортофосфорной кислотой Н₃РО₄ 20 секунд, промыли под струей дистиллированной воды 15 секунд, высушили с использованием целлюлозной салфетки до исчезновения видимых следов влаги.

Полученный препарат зуба 48 поместили в поле зрения растрового электронного микроскопа Jeol JCM - 5700, получили ряд изображений, описали морфологическую структуру цемента зуба 48. Полученное описание позволило объективно подтвердить задержку прорезывания зуба 48 и необходимость в его плановом удалении. Сделана соответствующая запись в медицинскую карту стоматологического больного.

Следовательно, предложенный способ подготовки препаратов зубов для морфологических исследований цемента в растровом электронном микроскопе позволяет подготовить высококачественные препараты для исследования с максимальным сохранением рельефа за более кроткие сроки.

Пример 2. Пациентка В., 21 год.

Жалобы: обратилась с целью подготовки к ортодонтическому лечению.

План лечения: 1. Санация рта. 2. Удаление зуба 38. 3. Подготовка и морфологическое исследование препарата зуба 38 в растровом электронном микроскопе.

Пациентке проведено удаление зуба 38, который поместили в 40% раствор формалина. Зуб фиксировали в столярной струбцине таким образом, чтобы линия распила проходила строго через все участки цемента от пришеечного до апикального, с помощью алмазного диска диаметром 20 мм с охлаждением дистиллированной водой произвели вертикальную сепарацию зуба, тем самым получили продольный срез. Изготовили патрон, с помощью ножниц для резки труб ПВХ отрезали от полипропиленовой трубы с внутренним диаметром 30 мм, толщиной стенок 5 мм, заготовку высотой 10 мм с внутренним диаметром 30 мм, толщиной стенок 5 мм, алмазным надфилем сошлифовали неровности, провели контроль толщины и параллельности заготовки с помощью штангенциркуля. Патрон разместили на ровной горизонтальной поверхности, в который поместили фрагмент зуба срезом вниз, залили двухкомпонентной эпоксидной смолой на 24 часа.

Провели поэтапное и последовательное шлифование препарата на станке «МР-1В GrinderPolisher» шлифовальными кругами «Dexter» зернистостью 1000, 1500, 2000grit с охлаждением дистиллированной водой и точным контролем снимаемого слоя поверхности препарата с помощью штангенциркуля, при этом шлифовальным кругом «Dexter» зернистостью 1000 grit сошлифовали 0,5 мм препарата, после чего обработали шлифовальными кругами «Dexter» зернистостью 1500, 2000 grit, сошлифовали еще 0,5 мм препарата, произвели очистку препарата в ультразвуковой ванне 1 минуту, после провели полирование на шлифовально-полировальном станке «МР-1В GrinderPolisher» с использованием фланелевого полировального круга с алмазной пастой W52500 grit 2 минуты, охладили и промыли дистиллированной водой, очистили в ультразвуковой ванне 2 минуты, препарат высушили с использованием целлюлозной салфетки до исчезновения видимых следов влаги, протравили поверхность 37% ортофосфорной кислотой Н₃РО₄ 20 секунд, промыли под струей дистиллированной воды 15 секунд, высушили с использованием целлюлозной салфетки до исчезновения видимых следов влаги.

Полученный препарат зуба 38 поместили в поле зрения растрового электронного микроскопа Jeol JCM - 5700, получили ряд изображений, описали морфологическую структуру цемента зуба 38. Полученное описание позволило объективно подтвердить задержку прорезывания зуба 38 и необходимость в его плановом удалении. Сделана соответствующая запись в медицинскую карту стоматологического больного.

Следовательно, предложенный способ подготовки препаратов зубов для морфологических исследований цемента в растровом электронном микроскопе позволяет подготовить высококачественные препараты для исследования с максимальным сохранением рельефа за более короткие сроки.

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к способу подготовки препаратов зубов для морфологических исследований цемента в растровом электронном микроскопе. После удаления зуб помещают в 40% раствор формалина, а затем фиксируют с возможностью проведения распила через все участки цемента от прищеечного до апикального. С помощью алмазного диска диаметром 20 мм проводят вертикальную сепарацию зуба, получая продольный срез, с охлаждением дистиллированной водой. Полученный фрагмент зуба помещают в патрон, размещенный на горизонтальной поверхности, срезом вниз и заливают двухкомпонентной эпоксидной смолой. Через 24 часа полученный препарат шлифуют на станке «МР-1BGrinderPolisher», с охлаждением дистиллированной водой, шлифовальными кругами «Dexter» - с зернистостью 1000 grit в течение 2-х минут, сошлифовывая 0,5 мм препарата. Далее препарат шлифуют шлифовальными кругами «Dexter» с зернистостью 1500, 2000 grit поочередно в течение 1 минуты каждым, при этом сошлифовывают еще 0,5 мм препарата. Контроль снимаемого слоя поверхности препарата осуществляют с помощью штангенциркуля, далее препарат очищают в ультразвуковой ванне 1 минуту, затем полируют на станке «МР-1BGrinderPolisher» с использованием фланелевого полировального круга с алмазной пастой W52500 grit и в течение 2-х минут, охлаждают дистиллированной водой и очищают в ультразвуковой ванне 2 минуты. После этого препарат высушивают с использованием целлюлозной салфетки до исчезновения следов влаги, протравливают поверхность 37% ортофосфорной кислотой Н₃РО₄ 20 секунд, и промывают под струей дистиллированной воды 15 секунд, окончательно высушивают. Техническим результатом является усовершенствование способа изготовления препаратов зубов для морфологических исследований структуры цемента различных участков в растровом электронном микроскопе, под точным и объективным контролем сошлифовывания необходимой толщины твердых тканей, позволяющего исследовать клеточный и бесклеточный цемент, рельеф всей изучаемой поверхности корневой части зуба. 2 пр.

Способ подготовки препаратов зубов для морфологических исследований цемента в растровом электронном микроскопе, осуществляется следующим образом, после удаления зуб помещают в 40% раствор формалина, а затем фиксируют с возможностью проведения распила через все участки цемента от прищеечного до апикального, после этого, с помощью алмазного диска диаметром 20 мм проводят вертикальную сепарацию зуба, получая продольный срез, с охлаждением дистиллированной водой, полученный фрагмент зуба помещают в патрон, размещенный на горизонтальной поверхности, срезом вниз и заливают двухкомпонентной эпоксидной смолой, через 24 часа полученный препарат шлифуют на станке «МР-1BGrinderPolisher», с охлаждением дистиллированной водой, шлифовальными кругами «Dexter» - с зернистостью 1000 grit в течение 2-х минут, сошлифовывая 0,5 мм препарата, далее препарат шлифуют шлифовальными кругами «Dexter» с зернистостью 1500, 2000 grit поочередно в течение 1 минуты каждым, при это сошлифовывают еще 0,5 мм препарата, контроль снимаемого слоя поверхности препарата осуществляют с помощью штангенциркуля, далее препарат очищают в ультразвуковой ванне 1 минуту, затем полируют на станке «МР-1BGrinderPolisher» с использованием фланелевого полировального круга с алмазной пастой W52500 grit и в течение 2-х минут, охлаждают дистиллированной водой и очищают в ультразвуковой ванне 2 минуты, после этого препарат высушивают с использованием целлюлозной салфетки до исчезновения следов влаги, протравливают поверхность 37% ортофосфорной кислотой Н₃РО₄ 20 секунд, и промывают под струей дистиллированной воды 15 секунд, окончательно высушивают.