Гормональное средство для регуляции половой охоты у мелких домашних животных Российский патент 2024 года по МПК A61K31/567 A61K47/06 A61K47/10 A61K47/14 A61K47/22 A61K47/26 A61K9/08 A61K9/20 A61P15/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для временного снижения половой активности, коррекции поведения, для задержки и прерывания течки у мелких домашних животных. Изобретение обеспечивает высокую эффективность средства данного назначения в более низкой терапевтической дозе, скорость наступления фармакологического эффекта и высокую безопасность. Изобретение предлагается в лекарственной форме раствора для топикального нанесения и для перорального введения в форме капель и таблеток.

Уровень техники

Проблема коррекции половой функции домашних животных, в частности кошек и собак, является чрезвычайно важной и актуальной в ветеринарии. Она решается с помощью хирургических и безоперационных методов контрацепции. Хирургическая контрацепция обеспечивает стойкий и необратимый эффект. Однако необратимость метода является основным недостатком при использовании у племенных животных. Более того возможны послеоперационные осложнения и риск возникновения гормональных нарушений, которые могут привести к ожирению, сахарному диабету, мочекаменной болезни и пр. Альтернативным методом является нехирургическая контрацепция, которая включает в себя применение гормональных контрацептивных средств. Их подразделяют на: комбинированные эстроген-гестагенные препараты (СексКонтроль спот он (АО «НПФ «Экопром»); СЕКС БАРЬЕР капли, таблетки (ООО «НПК «СКиФФ»), КонтрСекс Neo капли и таблетки («НВП «Астрафарм»), Гестренол капли и таблетки («НВП «Астрафарм») (RU №2545745 от 10.04,2015; RU 2649757 от 04.04.2018 и др.); препараты, содержащие только гестагены (Секс-контроль капли, таблетки (АО «НПФ «Экопром»); ЭКС-5, ЭКС-7,5 суспензия, ЭКС-5Т таблетки, Овостоп капли (ООО "НВЦ Агроветзащита"), Пиллкан 5, Пиллкан 20 брикеты («Ceva Sante Animale»), Стоп-Интим капли, таблетки (ООО «НПО «Апи-Сан») (RU 2015126106 от 11.01.2017 и др.) и др.; экстренные (посткоитальные) контрацептивы.

Наибольшее применение в составе моногормональных гестагенных препаратов для задержки на короткое или длительное время сроков наступления половой охоты у домашних животных получили препараты, содержащие в качестве действующих веществ мегестрола ацетат и медроксипрогестерона ацетат, являющиеся синтетическими модификациями природного гормона прогестерона. Общим недостатком мегестрола ацетата и медроксипрогестерона ацетата является необходимость использования значительных разовых и суммарных (курсовых) доз гестагена для достижения супрессивного эффекта (RU 99105964 от 20.01.2001; RU 2163809 от 10.03.2001). Применение больших доз мегестрола ацетата и медроксипрогестерона ацетата небезопасно, так как может привести к гормональным нарушениям с такими последствиями, как комплекс кистозной гиперплазии эндометрия и пиометры, опухолям молочной железы и фиброаденоматозу, а также к клиническим и патологическим изменениям, типичным для сахарного диабета. Нарушение дозирования бигормональных эстроген-гестагенных препаратов приводит к воздействию на факторы свертывания крови и риску тромбоэмболии, оказывает влияние на углеводный и липидный обмены, на ренинангиотензивную систему и способствует возникновению отеков, повышению артериального давления и пр. [Max A., Jurka P., Dobrzynski A., Rijsselaere T. Non surgical contraception in female dogs and cats // Acta Sci. Pol., Zootechnica. - 2014. - Vol. 13, No 1, pages 3-18].

Предлагаемое гормональное средство в качестве действующего вещества содержит диеногест. Производное 19-нортестостерона с прогестагенным эффектом, не обладает существенной минералокортикоидной или глюкокортикоидной активностью in vivo. Стоит отметить, что данное действующее вещество никем из производителей до настоящего времени не использовалось в области ветеринарии. Диеногест - первый гестаген, который дает клинически значимый антиандрогенный эффект, при этом не проявляя эстрогенной и андрогенной активности [Ruan X., Seeger H., Mueck A.O. The pharmacology of dienogest // Maturitas. - 2012. - Vol. 71, No 4., pages 337-344] (фиг. 1).

Преимущества заключаются в отсутствии андрогенного эффекта, наличии антиандрогенной активности; выраженное гестагенное действие на эндометрий; для гормональной контрацепции применяются минимальные дозы; слабом антигонадотропном действии и ингибировании овуляции; минимальном влиянии на показатели обмена веществ и минимальной способности к связыванию с глобулином, связывающим половые стероиды. Препарат полностью всасывается в ЖКТ, не подвергается пресистемному метаболизму и имеет высокую биодоступность (более 90%). Для диеногеста характерна высокая Cmax (23,4 нг/мл), которая в 1,5 раза выше, чем у норэтистерона и практически в 10 раз выше, чем у других производных 19-нортестостерона. Tmax составляет 1-2 ч, т.е. эффект препарата проявляется быстро. Период полувыведения составляет 6,5-12 ч, он существенно короче, чем у большинства других прогестагенов, поэтому эффекты диеногеста хорошо контролируются [Прилепская В.П., Острейкова Л.И. Диеногест (фармакологические, клинические и лечебные эффекты). М, 2005. - 59 с.].

Близким аналогом является фармацевтическая композиция для регулирования полового поведения и контрацепции самок животных (кошек/собак), предназначенная для трансдермального введения, содержащая мелатонин, α-адреноблокатор и гестаген - 0,5-2 (мас. %), которым, может быть диеногест (RU 2617518 от 25.04.2017; EA 036143 B1 05.10.2020). Однако в ветеринарии на данный момент лекарственных препаратов с единственным действующим веществом - диеногестом или других производных 19-нортестостерона в качестве гестагенов нет, а в лекарственном препарате Овостоп капли (ООО "НВЦ Агроветзащита") в составе данной фармацевтической композиции в качестве гестагена используется мегестрола ацетат.

В связи с этим наиболее близким гестагеном к заявленному техническому решению и выпускаемому в жидкой и твердой лекарственных формах является мегестрола ацетат - производное природного метаболита прогестерона - 17α-гидроксипрогестерона. Мегестрола ацетат обладает высоким уровнем гестагенной активности. Установлено, что при пероральном применении в рекомендуемых дозах он не оказывает мутагенного, тератогенного, сенсибилизирующего и гепатотоксического действия [Симпсон Дж., Инганд Г., Харви М. Руководство по репродукции и неотологии собак и кошек. М.: Софинон, 2005, с. 229-230]. Гормон действует на гипоталамо-гипофизарную систему и обладает свойством ингибировать секрецию лютеинизирующего (ЛГ) и фолликулостимулирующего (ФСГ) гормона, которые вырабатываются передней долей гипофиза. При использовании препарата до начала эструса (течки) у кошек происходит угнетение синтеза эстрогенов фолликулами яичников, что предотвращает развитие морфологических и психофизиологических изменений у самок, связанных с половым циклом, при недостаточном количестве ЛГ, процесс овуляции становится невозможным. При применении препарата кошкам на 2 или 3 сутки от начала эструса происходит прерывание течки. У котов мегестрол ацетат снижает уровень тестостерона в крови и оказывает опосредованное влияние на регуляцию полового поведения и связанные с ней поведенческие реакции, снижая агрессию, беспокойство и повышенную возбудимость у животного. Однако, известно, что после перорального введения мегестрола ацетат легко адсорбируется в кишечнике, биотрансформируется в печени и выводится из организма в виде солей с мочой через 48 ч, для эффективного подавления уже начавшейся течки дозы необходимо увеличивать. Согласно инструкциям по применению препаратов, содержащих в своем составе ДВ - мегестрола ацетат (СексКонтроль капли, СексКонтроль К в форме таблеток (АО «НПФ «Экопром»)) установлено, что для предотвращения течки у сук требуемая ежедневная доза составляет 0,5 мг/кг за 7-14 суток до предполагаемого желательного эффекта. Допускается повторение курса не чаще 2 раз в год. Для подавления начавшейся течки - 2 мг/кг ежедневно в течение 3 суток, далее 1 мг/кг в течение 7 суток. Кошкам для предотвращения половой охоты в период между течками в дозе 2,5 мг на животное 1 раз в неделю. Для снижения полового возбуждения и коррекции поведения котам - 5 мг на животное ежедневно в течение 3 суток. Для подавления нежелательного поведения у собак начальный курс - 2 мг/кг 1 раз в сутки в течение недели. Далее при наличии положительного результата продолжают по 1 мг/кг ежедневно в течение 2 недель. При отсутствии эффекта от первоначального курса дозу увеличивают до 4 мг/кг ежедневно в течение 1 недели, далее 1 мг/кг ежедневно в течение 2 недель. Некоторым собакам требуется постоянное применение препарата в минимальной дозе 1 раз в неделю.

Стоит отметить, что при введении высоких доз мегестрола ацетата следует учитывать наличие побочных эффектов, например, глюкокортикоидной активности. Применение больших доз мегестрола ацетата небезопасно, так как может привести к гормональным нарушениям с такими последствиями, как комплекс кистозной гиперплазии эндометрия, что нередко сопровождается инфильтрацией лейкоцитами и приводит к развитию пиометры, опухолям молочной железы и фиброаденоматозу, а также к клиническим и патологическим изменениям, типичным для сахарного диабета. При длительном применении мегестрола ацетата у животных наблюдали побочные эффекты, такие как повышенный аппетит, приводящий к увеличению массы тела животного, вялости и беспокойству. Следует отметить, что мегестрола ацетат в составе контрацептивных препаратов в медицине не применяют. Другими возможными побочными эффектами являются дисфункция надпочечников, гепатит, нарушения развития, изменения в поведении и местные кожные изменения. [Max A., Jurka P., Dobrzynski A., Rijsselaere T. Non surgical contraception in female dogs and cats // Acta Sci. Pol., Zootechnica. - 2014. - Vol. 13, No 1, pages 3-18; Зейналов О.А., Савинова Т.С., Андрюшина В.А. Сравнительная характеристика моногормональных и бигормональных гестаген-содержащих препаратов для подавления поведенческих проявлений половой охоты у кошек // Российский ветеринарный журнал. - 2017. № 2. - С. 33-35].

Препараты СексКонтроль капли, СексКонтроль К в форме таблеток и СексКонтроль спот-он с действующим веществом - мегестрола ацетатом могут служить в качестве прототипа гормонального препарата для регуляции полового поведения у мелких домашних животных.

С учетом вышеизложенного, задачей настоящего изобретения было создание гормонального средства для регуляции половой охоты у мелких домашних животных, преимущественно у кошек и собак для угнетения полового возбуждения, коррекции поведения, задержки и прерывания течки.

Технический результат заключается в том, что половое влечение исчезает в короткий срок, начиная с третьих суток использования.

Раскрытие сущности изобретения

Предлагаемое гормональное средство содержит в качестве действующего вещества - диеногест (17-гидрокси-3-оксоэстра-4,9-диен-17α-ил)ацетонитрил, производное нортестостерона. Формула C₂₀H₂₅NO₂, молекулярная масса 311,4. Белый или почти белый или желтоватый кристаллический порошок. Умеренно растворим в метиленхлориде, мало растворим в метаноле, практически не растворим в воде.

Получали в виде жидкой лекарственной формы (капли для перорального применения и раствор для топикального нанесения) и твердой лекарственной формы (таблетки). Фармакологический профиль диеногеста отличается высокой специфичностью в отношении гестагенных рецепторов (связывается только с данным типом рецепторов). В то же время препарат имеет клинически значимую антиандрогенную активность. У диеногеста нет эстрогенного, антиэстрогенного и андрогенного действия. Препарат полностью всасывается в ЖКТ, не подвергается пресистемному метаболизму и имеет высокую биодоступность (более 90%). Эффект гестагена проявляется быстро. Диеногест не подавляет активность цитохрома Р450, экскретируется почками и фекалиями в 86% в первые сутки после его применения.

Представленные средства имеют следующий состав (мас. %).

Жидкие формы (капли для перорального применения):

диеногест 0,01-1%;

вспомогательные вещества: эфирное масло кошачьей мяты - 0,1%, бутилгидроксианизол - 0,2%, бутилгидрокситолуол - 0,1%, N - Метилпирролидон - 5%, альфа-токоферол ацетат - 0,1%, масло соевое - до 99,99%.

Твердые формы (таблетки):

диеногест - 0,01-1%;

вспомогательные вещества: лактоза - до 99,99%, кроскармеллоза натрия - 5,0%, стеарат кальция - 1,0%, желатин - 1,0%, аэросил - 1% и краситель Понсо Е 124 - 0,05%.

Жидкие формы (раствор для топикального нанесения):

Диеногест 0,01-1%;

вспомогательные вещества: D,L-токоферол - 0,005%, 3-метил-6-изопропилциклогексанол - 0,01%, моноэтиловый эфир диэтиленгликоля - до 99,99%.

Краткое описание чертежей.

Фиг.1 - представлена химическая формула диеногеста.

Пример 1. Испытание эффективности действия лекарственного средства в форме капель для перорального применения

В качестве объекта исследования были взяты здоровые половозрелые кошки разных пород и возраста (с 6 месячного возраста до 5 лет массой тела от 1,8 кг до 6,0 кг). Всего в исследованиях участвовало 150 животных: 50 кошек в состоянии половой охоты - фаза эструса полового цикла (1-2 сутки от ее начала) (применяли средства с целью снижения полового возбуждения и прерывания течки), 50 кошек в фазах анэструса и проэструса (применяли препарат с целью задержки течки), 50 котов в состоянии полового возбуждения, сопровождающегося агрессивностью, мечением территории. Отобранных животных разделили на опытные и контрольные группы по 10 особей.

Каждой опытной группе кошек применяли капли с содержанием в 1 мл 0,1 мг (0,01%); 1 мл 0,6 мг диеногеста (0,06%) и в 1 мл 10 мг (1%) для задержки течки и угнетения полового возбуждения в фазах анэструса и проэструса в дозе 3 капли для животных массой тела до 5 кг (0,12 мл/5 кг), т.е. 0,0024 мг/кг; 0,0144 мг/кг и 0,24 мг/кг по ДВ соответственно один раз в неделю в течение 2 недель; для прерывания течки при появлении ее первых признаков в дозе 6 капель для животных массой тела до 5 кг (0,25 мл/5 кг), т.е. 0,005; 0,03 и 0,5 мг/кг в течение 4-7 суток (до исчезновения признаков течки плюс один день) с интервалом 24 часа.

Котам капли диеногест-содержащего лекарственного средства в концентрациях 0,01%, 0,06% и 1% применяли для снижения полового возбуждения и коррекции поведения в дозе 6 капель для животных массой тела до 5 кг (0,25 мл/5 кг). Первые 7 суток средство назначали в суточной дозе, в последующие 7 суток при положительном результате суточную дозу препарата снижали в два раза. Для животных массой тела более 5 кг средство применяли в соответствующей дозировке плюс 1 капля раствора на каждый последующий кг массы тела.

Прототип СексКонтроль - капли с содержанием в 1 мл 25 мг мегестрола ацетата вводили перорально в дозе 0,5 мг на кг массы животного для задержки течки и угнетения полового возбуждения и в дозе 1 мг/кг - для прерывания течки у кошек и для снижения полового возбуждения у котов по инструкции.

На момент проведения исследований за животными устанавливали ежедневное наблюдение, оценивали общее состояние и поведение.

Во время применения диеногест-содержащего лекарственного средства во всех концентрациях течка не наступила ни у одной из кошек опытных групп. Физиологический половой цикл восстанавливался через 2-3 месяца после прекращения использования диеногест-содержащего средства в 0,06% концентрации, через 58-68 суток после применения 0,01% диеногест-содержащего средства и через 3-4 месяца после назначения 1% диеногест-содержащего средства, а в случае с прототипом - через 3-3,5 месяца. У животных контрольной группы, которым не применяли препараты, наступила фаза эструса.

Прерывание течки у большинства животных опытной группы, которым задавали 0,01% раствор диеногест-содержащего средства, наступало через 4 суток после начала применения средства; после введения 0,06% диеногест-содержащего средства - через 2-3 суток и на 1-2 сутки после 1% диеногест-содержащего средства. После применения прототипа прерывание течки регистрировали у большинства животных на 3-4 сутки. У животных контрольной группы прерывание течки не происходило в течение 10 суток наблюдения за ними.

У большинства котов опытной группы после введения 0,01% диеногест-содержащего лекарственного средства половое возбуждение исчезало на 5-6 сутки применения средства; после введения 0,06% диеногест-содержащего лекарственного средства - на 3-4 сутки; после применения 1% диеногест-содержащего лекарственного средства - на 3 сутки. У котов признаки сатириазиса исчезали на 4-5-е сутки с начала введения прототипа. В контрольной группе у котов сохранялась агрессия, возбуждение и инстинктивное мечение территории. Побочных явлений и осложнений не было отмечено за весь период наблюдений за животными.

В результате установлено, что диеногест-содержащее лекарственное средство в форме капель для перорального применения в трех исследуемых концентрациях вызывало задержку течки у кошек всех опытных групп. Однако наблюдается дозозависимое действие, выражающееся в более быстром проявлении эффекта (прерывании течки и уменьшении признаков полового возбуждения) при увеличении концентрации заявляемого средства. При этом оптимальной можно назвать концентрацию 0,06%, в которой диеногест-содержащее лекарственное средство проявляет высокую скорость фармакологического эффекта в сравнении с прототипом и обладает минимальным риском развития побочных эффектов.

Пример 2. Испытание эффективности действия лекарственного средства в форме таблеток для перорального применения

В качестве объекта исследования были взяты здоровые половозрелые кошки и коты разных пород и возраста (с 6 месячного возраста до 5 лет массой тела от 1,8 кг до 6,0 кг). Всего в исследованиях участвовало 90 животных: 30 кошек в состоянии половой охоты - в фазе эструса полового цикла (1-2 сутки от ее начала) (применяли лекарственное средство с целью снижения полового возбуждения и прерывания течки), 30 кошек в фазах анэструса и проэструса (с целью задержки течки), 30 котов в состоянии полового возбуждения, сопровождающегося агрессивностью, мечением территории. Отобранных животных разделили на опытные и контрольные группы по 6 особей в каждой.

Лекарственное диеногест-содержащее средство в 0,01; 0,2 и 1% концентрации в форме таблеток применяли кошкам трех опытных групп перорально на корень языка за 1-2 часа до кормления для задержки течки и угнетения полового возбуждения в фазах анэструса и проэструса в дозах 0,002; 0,04 и 0,2 мг/кг по ДВ один раз в 2 недели; для прерывания течки при появлении ее первых признаков в этих же дозах 1 раз в сутки в течение 4-7 суток (до исчезновения признаков течки плюс один день).

Котам для снижения полового возбуждения и коррекции поведения применяли диеногест-содержащее средство в форме таблеток в дозах 0,002; 0,04 и 0,2 мг/кг по ДВ 1 раз в сутки в течение 7 суток. Далее дозы уменьшали в два раза и вводили 1 раз в сутки в течение 14 суток.

Прототип - препарат СексКонтроль К в форме таблеток с содержанием в 1 таблетке 5 мг мегестрола ацетата вводили перорально в дозе 0,5 мг/кг массы тела животного в пересчете на мегестрола ацетат для задержки течки и угнетения полового возбуждения, в дозе 1 мг/кг - для прерывания течки у кошек и для снижения полового возбуждения у котов согласно инструкции.

На момент проведения исследований за животными устанавливали ежедневное наблюдение, оценивали их общее состояние и поведение.

Во время применения лекарственного средства в трех применяемых концентрациях течка не наступила ни у одной из кошек опытных групп. Физиологический половой цикл восстанавливался через 2-3 месяца после прекращения использования диеногест-содержащего средства в 0,2% концентрации, через 55-60 суток после применения 0,01% диеногест-содержащего средства и через 3-3,5 месяца после назначения 1% диеногест-содержащего средства, а в группе с прототипом - через 3-3,5 месяца.

Прерывание течки у большинства животных опытной группы, которым вводили 0,01% диеногест-содержащее средство, наступало через 4-5 суток после начала применения средства; после применения 0,2% диеногест-содержащего средства - через 3 суток и на 2-3 сутки после 1% диеногест-содержащего средства. Прерывание течки регистрировали у большинства животных на 3-4 сутки после применения прототипа. Кроме этого, при применении средства для задержки течки, эструс не наступил ни у одной из кошек опытной группы. У животных контрольной группы прерывание течки не происходило в течение 10 суток наблюдения за ними.

У большинства котов опытной группы после введения 0,01% диеногест-содержащего лекарственного средства половое возбуждение проходило на 6 сутки применения средства; после назначения 0,2% диеногест-содержащего лекарственного средства - на 3-4 сутки; после применения 1% средства - на 3 сутки. У 2 котов из последней опытной группы, начиная с 18 суток исследования и до конца эксперимента, отмечали повышенный аппетит. В опытной группе, где вводили прототип, признаки возбуждения проходили на 4-5-е сутки. В контрольной группе у котов сохранялась агрессия, возбуждение и инстинктивное мечение территории. За весь период опыта ни у одного животного не было отмечено каких-либо побочных явлений и осложнений.

Полученные данные позволяют заключить, что предлагаемое диеногест-содержащее лекарственное средство в форме таблеток проявляет более высокую скорость наступления фармакологического эффекта в дозе 0,04 мг/кг в сравнении с прототипом, применяемым в дозе 0,5 мг/кг.

Пример 3. Испытание эффективности действия лекарственного средства в форме раствора для топикального нанесения

Всего в исследованиях участвовало 180 животных: 30 кошек и 30 сук в состоянии в фазе эструса полового цикла (1-2 сутки от ее начала), 30 кошек и 30 сук в фазах анэструса и проэструса (с целью задержки течки), 30 котов и 30 кобелей в состоянии полового возбуждения, сопровождающегося агрессивностью, мечением территории. Отобранных животных разделили на опытные и контрольные группы по 6 особей в каждой.

Диеногест-содержащее лекарственное средство в форме раствора в трех различных концентрациях: 0,01; 0,06 и 1% (с содержанием в 1 мл 0,1; 0,6 и 10 мг диеногеста соответственно) точечно наносили на сухую неповрежденную кожу точечно в области затылка для задержки течки кошкам трех опытных групп в дозе 0,1 мл на животное массой до 5 кг и 0,2 мл на животное массой 5-10 кг, т.е. в дозах 0,002; 0,012 и 0,2 мг/кг по ДВ один раз в неделю в течение 3 месяцев. Сукам для задержки течки средства использовали за 7-15 суток до ее начала ежедневно в дозах 0,002; 0,012 и 0,2 мг/кг по ДВ (0,1 мл на 5 кг массы животного).

Для прерывания течки у кошек лекарственное средство в трех концентрациях: 0,01; 0,06 и 1% наносили при появлении ее первых признаков (но не позже, чем через 2 суток от ее начала) в дозах 0,004; 0,024 и 0,4 мг/кг по ДВ (0,2 мл на животное массой до 5 кг и 0,4 мл на животное массой 5-10 кг) один раз в сутки в течение 4-7 суток (до исчезновения признаков течки плюс один день).

Для прерывания течки у сук трех опытных групп применяли заявляемые средства в 0,01; 0,06 и 1% концентрации при появлении ее первых признаков (но не позже, чем через 2 суток от начала течки), первые трое суток в дозах: 0,008; 0,048 и 0,8 мг/кг по ДВ (0,4 мл на 5 кг массы животного) и последующие семь суток в дозах: 0,004; 0,024 и 0,4 мг/кг по ДВ (0,2 мл на 5 кг массы).

Котам для снижения полового возбуждения и коррекции поведения диеногест-содержащие лекарственные средства использовали в дозах 0,004; 0,024 и 0,4 мг/кг по ДВ. Первые 7 суток средства применяли в этих дозах, в последующие 14 суток при положительном результате их снижали в два раза. Кобелям для снижения полового возбуждения и коррекции поведения заявляемые лекарственные средства наносили в дозах: 0,008; 0,048 и 0,8 мг/кг по ДВ в течение первых 7 суток, в последующие 14 суток при положительном результате дозы снижали в два раза.

Прототип - СексКонтроль спот-он наносили по аналогичной схеме в дозе 0,5 мг/кг веса животного в пересчете на мегестрола ацетат для задержки течки и угнетения полового возбуждения, в дозе 1 мг/кг по ДВ - для прерывания течки у кошек и для снижения полового возбуждения у котов; в дозе 2 мг/кг - для прерывания течки у сук и для снижения полового возбуждения и коррекции поведения у кобелей.

Во время применения диеногест-содержащих лекарственных средств и прототипа течка не наступила ни у одной из кошек и сук. Физиологический половой цикл восстанавливался через 50-62 суток у кошек и через 3,5-4,5 месяцев у сук после применения 0,01% диеногест-содержащего средства; через 2,5-3 месяца у кошек и через 4-6 месяцев у сук после прекращения использования диеногест-содержащего средства в 0,06% концентрации и через 3-3,5 месяца у кошек и через 5-10 месяцев у сук после обработки 1% диеногест-содержащим средством у кошек. В группе с прототипом цикл восстанавливался через 3-3,5 месяцев у кошек и через 4-6 месяцев у сук. Прерывание течки у большинства животных опытной группы, которым наносили топикально 0,01% диеногест-содержащее средство, наступало через 4-5 суток после начала применения средства; после применения 0,06% диеногест-содержащего средства - через 3-4 суток и на 2-3 сутки после 1% диеногест-содержащего средства у кошек и сук. После применения прототипа прерывание течки регистрировали у большинства животных на 3-4 сутки. Снижение полового возбуждения у большинства котов и кобелей опытных групп отмечали на 5-6 сутки после применения 0,01% диеногест-содержащего лекарственного средства; после нанесения 0,06% диеногест-содержащего лекарственного средства - на 3-4 сутки; после применения 1% средства - на 3 сутки. В опытных группах, где вводили прототип, признаки возбуждения проходили на 4-5-е сутки. За весь период наблюдений ни у кого из животных не было отмечено каких-либо побочных эффектов и осложнений.

В результате установлено, что предлагаемое диеногест-содержащее лекарственное средство в форме раствора для топикального нанесения проявляет более высокую скорость наступления фармакологических эффектов в меньших дозах в сравнении с прототипом у кошек и собак.

Пример 4. Изучение параметров острой токсичности

Для установления параметров острой пероральной токсичности использовали 120 белых крыс самок (5 опытных групп и 1 контрольная по 5 особей в каждой) и 240 мышей самцов (5 опытных групп и 1 контрольная по 10 особей в каждой). Диеногест-содержащее лекарственное средство вводили из шприца с канюлей в желудок опытным животным однократно в дозах: 2500; 5000; 7500; 9000 и 11500 мг/кг. Контрольным животным вводили крахмальный клейстер. Для изучения параметров острой накожной токсичности лекарственного средства в форме капель для топикального нанесения были сформированы две опытные группы белых беспородных крыс-самцов массой тела 220-240 г. Третья группа служила чистым контролем и им препарат не применяли. В каждой группе находилось по 6 особей. Перед применением средства крысам машинкой для стрижки выстригали шерстный покров площадью 6×6 см в области спины. Опытным крысам лекарственное средство наносили однократно без разведения в дозах 5000 и 11500 мг/кг. После нанесения каждое животное помещали в индивидуальную клетку на 20 минут для полного впитывания препарата и предотвращения его слизывания другими животными. Животным контрольной группы наносили физиологический раствор. В течение 14 суток вели наблюдение за клиническим состоянием животных, их массой тела, признаками местной накожной реакции, возможной гибелью, а также проявлением симптомов интоксикации.

По результатам проведенных исследований установлено, что в опыте по определению острой токсичности среднесмертельная доза (ЛД₅₀) при введении в желудок лабораторным животным каждого из опытных образцов выше 11500 мг/кг и отсутствие летальности среди лабораторных животных дает основание отнести опытные образцы к малоопасным веществам - 4 классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76 (табл. 1) [ГОСТ 12.1.007-76. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности].

Таблица 1. Показатели острой токсичности лекарственного средства в форме капель для перорального применения при введении в желудок белым мышам и крысам Доза Наблюдавшийся эффект % животных,
у которых наблюдалась реакция мг/кг мл/гол Мыши крысы мыши Крысы мыши крысы 2500 0,05 0,5 0/10 0/5 0 0 5000 0,1 1,0 0/10 0/5 0 0 7500 0,15 1,5 0/10 0/5 0 0 9000 0,2 2,0 0/10 0/5 0 0 11500 0,25 2,5 0/10 0/5 0 0 Контроль 0/10 0/5 0 0

При изучении острой накожной токсичности лекарственного средства в форме капель для топикального нанесения на крысах общее состояние животных было стабильным и удовлетворительным, изменений в поведении не отмечали, аппетит и жажда - в норме, судорог не было; координация в пространстве была естественной; тонус скелетных мышц и мускулатуры соответствовал норме; реакция на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители была адекватной.

Полученные результаты изучения накожного нанесения крысам приведены в таблице 2.

Таблица 2. Результаты накожного нанесения лекарственного средства в форме капель для топикального нанесения крысам Доза, мг/кг Общее число животных (павших/выживших) 5000 0/6 11500 0/6 Контроль 0/6

Во всех дозах падежа животных не регистрировали. Кроме того, признаки интоксикации не наблюдали за весь период опыта (14 суток). Необходимо отметить, что доза 11500 мг/кг оказалась максимально возможной для аппликации на кожу крысам. С учетом этого ограничивающего фактора ЛД₅₀ лекарственного средства будет превышать дозу 11500 мг/кг. Согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007-76), лекарственного средства в форме капель для топикального нанесения относится к 4 классу опасности.

Пример 5. Изучение параметров субхронической токсичности

При изучении субхронической токсичности лекарственных средств сформированы контрольная и опытные группы беспородных белых крыс-самцов с исходной массой тела 200 г по 10 голов в каждой для каждого опытного образца. Препараты вводили в дозах 1/10 и 1/20 от максимально вводимой дозы, условно принятой за ЛД₅₀ ежедневно в течение 3 месяцев. Регистрировали массу тела. Через 12 недель животных убивали, отбирали пробы крови для последующих морфологических и биохимических исследований. Внутренние органы взвешивали, определяли массовые коэффициенты и проводили макроскопическое исследование органов.

В течение 12 недель после ежедневного внутрижелудочного введения препарата в 1/10 и 1/20 части от максимальной пероральной дозы, которую вводили для определения острой пероральной токсичности, у животных не наблюдали патологических изменений в общем состоянии и поведении; прием корма, воды, видимые физиологические функции были сопоставимы с началом опыта.

В таблице 3 представлены данные по динамике прироста массы тела у крыс, которым вводили лекарственное средство в форме капель для перорального введения, в сравнении с контрольными животными. При всех использованных дозах изменение массы тела носило положительный характер и было сопоставимо с контрольными значениями. В таблице 4 приведены значения массовых коэффициентов ряда органов; они не различаются достоверно между собой и контролем. В таблице 5 приведены морфологические показатели у крыс после многократного применения лекарственного средства. Все дозы не приводили к изменениям функционального состояния периферической крови опытных крыс.

Таблица 3. Динамика прироста массы тела у крыс при пероральном применении лекарственного средства в форме капель в течение 90 суток (n=10; р≥0,05) Группа Масса (г, M±m) после нанесения через (суток): 0 18 36 54 72 90 % к исходной массе 1 200,0 253,5±0,8 313,1±0,5 353,9±0,9 403,4±0,6 437,6±0,8 - 2 200,0 246,4±1,0 302,6±0,8 354,2±0,6 403,3±0,8 425,9±0,7 - Контр. 200,0 257,1±0,5 318,3±0,4 363,8±0,6 418,4±0,5 439,0±0,5 -

Таблица 4. Массовые коэффициенты органов крыс при пероральном применении лекарственного средства в форме капель в течение 90 суток (n=10; р≥0,05) Группа Печень Легкие Сердце Почки Селезенка 1 10,50±0,04 2,54±0,03 1,49±0,04 3,55±0,04 1,66±0,02 2 10,53±0,02 2,59±0,03 1,32±0,01 3,55±0,02 1,55±0,02 Контр. 10,64±0,02 2,75±0,01 1,31±0,02 3,61±0,02 1,57±0,02

По результатам макроскопического исследования органов различий между группами не было установлено, в связи с чем, данные некропсии крыс представлены как средние для всех групп. При наружном осмотре крыс выделений из естественных отверстий не обнаружено. Шерсть блестящая, без очагов аллопеции, зубы сохранены. Видимые слизистые оболочки бледно-розовые, блестящие. Деформации или отека конечностей не выявлено. Развитие наружных половых органов соответствует физиологической норме.

Грудная и брюшная полости выпота не содержали. Положение внутренних органов грудной и брюшной полостей анатомически правильные. Париетальный и висцеральный листки плевры и брюшины тонкие, блестящие, гладкие.

При макроскопическом исследовании печени, легких, почек, сердца, селезенки и кожного покрова, после нанесения препарата крысам в трех испытанных дозах отмечено следующее.

Печень. Изменений в строении органа не обнаружено. Форма и величина печени соответствуют норме. Поверхность печени гладкая, однородной темно-красной окраски, капсула тонкая, прозрачная. Ткань печени на разрезе полнокровная, умеренно плотная.

Легкие. Во всех дозах строение органа соответствовало норме. Просвет трахеи и крупных бронхов не изменен, слизистая оболочка блестящая, гладкая, бледного цвета. Легкие воздушные, без уплотнений на ощупь, бледно-розовой окраски.

Почки. Во всех дозах изменения отсутствовали. Величина и форма почек не изменены. Поверхность почек коричневатого цвета, гладкая, капсула тонкая, прозрачная, легко снимаемая. На разрезе органа хорошо различимы корковое и мозговое вещество.

Сердце. Во всех дозах строение органа соответствовало норме. Хорошо были видны протоки артериальных и венозных вен. Величина и форма сердца контрольных крыс не отличалась от опытных. В правом и левом желудочках содержится незначительное количество темной жидкой крови. Клапаны сердца тонкие, блестящие, гладкие. Сердечная мышца на разрезе однородной вишнево-коричневатой окраски, умеренно плотная.

Селезенка обычной формы, темно-вишневого цвета, умеренно плотной консистенции. Поверхность органа гладкая, капсула тонкая. На разрезе на темно-красном фоне селезенки видны мелкие сероватого цвета фолликулы.

Кожа. У всех животных не было отмечено каких-либо патологических изменений кожи (отек, гиперемия, язва, сыпь).

Таблица 5. Морфологические показатели крови крыс при пероральном применении лекарственного средства в форме капель в течение 90 суток (n=10; р≥0,05) Показатели Дозы Контроль 1150 мг/кг 750 мг/кг Гемоглобин, г/л 112,0±1,2 110,8±1,4 113,6±2,0 Эритроциты, 10¹²/л 7,8±0,1 8,4±0,1 7,7±0,2 Лейкоциты, 10⁹/л 7,7±0,1 7,6±0,2 7,9±0,1 СОЭ, мм/час 1,35±0,02 1,64±0,03 1,43±0,02 Гематокрит, % 42,9±2,1 43,0±2,4 42,8±1,9 Тромбоциты, 10⁹/л 572,2±3,2 579,2±3,0 576,9±2,8

В опыте по изучению подострой токсичности на лабораторных животных было установлено, что лекарственные средства в форме капель и таблеток для перорального введения в дозах 1/10 и 1/20 от максимально вводимой дозы - 11500 мг/кг не оказывают негативного влияния на общее состояние, поведение, гематологические и биохимические показатели крови крыс, а также не были выявлены патологии во внутренних органах при вскрытии животных.

Пример 6. Переносимость лекарственного средства в форме капель для перорального применения (кошки)

Переносимость лекарственного средства в форме капель для перорального проводили на 15 клинически здоровых беспородных половозрелых (с 6 мес. возраста до 3 лет) кошках массой 2-5 кг содержащихся в боксах на стандартном полнорационном кормлении. Животные по принципу пар-аналогов (пол, возраст, масса тела животного, физиологическое состояние) были разделены на три группы по 5 голов в каждой. Лекарственное средство вводили животным перорально за 1-2 часа до кормления, закапывая в рот 1 раз в неделю в течение 14 суток в следующих дозах: первым опытным группам - кошкам и котам 0,24 мл на животное (двукратно увеличенная терапевтическая доза); вторым опытным - кошкам и котам 1,2 мл на животное (пятикратно увеличенная терапевтическая доза); третья группа служила контролем - препарат не применяли. В процессе опыта за животными вели ежедневное наблюдение, отмечая их общее состояние, поведение, аппетит, контролировали их вес, температуру тела. До начала опыта и через 30 и 45 суток после начала применения препарата отбирали образцы крови и мочи для исследования ряда параметров, характеризующих состояние внутренних органов и систем организма - гематологические и биохимические показатели.

В результате ежедневного наблюдения за животными в течение экспериментального периода было установлено, что общее состояние кошек и собак опытных групп существенно не отличалось от состояния животных контрольной группы: они находились в удовлетворительном состоянии, были подвижны, активны, охотно принимали корм и пили воду, не отмечалось отклонений физиологических функций, каких-либо токсических явлений, условные рефлексы были сохранены. Динамика изменения массы тела кошек представлена в таблице 6.

Таблица 6. Контроль массы тела кошек (кг) Группы До опыта Через 30 суток Через 45 суток Опытная группа 1 3,6±0,2 3,8±0,1 4,0±0,2 Опытная группа 2 3,3±0,3 3,4±0,3 3,5±0,3 Контрольная 3,1±0,3 3,5±0,3 3,6±0,3 Примечание: во всех случаях р≥0,05

Данные показывают, что статистически достоверных изменений массы тела кошек во всех группах через 30 и 45 суток эксперимента от его начала не установлено.

Температура тела кошек подопытных и контрольных групп находилась в пределах физиологической нормы до и после применения препарата.

Результаты исследования ряда гематологических показателей крови кошек опытных и контрольных групп представлены в таблице 7.

Таблица 7. Гематологические показатели крови кошек (M±m) Сроки исследования Эритроциты, 10¹²/л Лейкоциты,10⁹/л Гемоглобин, г/л СОЭ, мм/час
по Панченкову Опытная группа 1 До опыта
Через 30 суток
Через 45 суток 8,2±0,3
8,3±0,2
8,6±0,2 10,8±0,3
11,5±0,2
11,5±0,2 121,9±1,4
125,7±2,1
128,7±2,3 4,4±0,3
4,7±0,3
4,9±0,2 Опытная группа 2 До опыта
Через 30 суток
Через 45 суток 7,8±0,2
8,1±0,2
8,1±0,3 11,2±0,2
11,4±0,1
11,8±0,1 126,3±2,9
128,6±2,3
128,8±1,5 3,8±0,3
4,1±0,2
3,9±0,2 Контрольная группа До опыта
Через 30 суток
Через 45 суток 8,3±0,3
8,5±0,2
8,8±0,2 11,6±0,2
11,8±0,2
11,9±0,2 122,2±1,4
122,6±1,5
123,8±1,6 3,9±0,2
4,1±0,2
4,3±0,2 Примечание: во всех случаях р≥0,05

Из таблицы 7 видно, что количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина и скорость оседания эритроцитов в крови кошек опытных и контрольных групп статистически не различались и находились в пределах физиологической нормы как до начала опыта, так и на 30 и 45 сутки после обработки животных.

Результаты изучения ряда биохимических показателей сыворотки крови животных опытных и контрольных групп представлены в таблице 8.

Таблица 8. Биохимические показатели сыворотки крови кошек (M±m) Сроки исследования ЩФ, ЕД/л АСТ, ЕД/л АЛТ, ЕД/л Мочевина, ммоль/л Общий билирубин, ммоль/л Креатинин, мкмоль/л Общий белок, г/л Кошки Опытная группа 1 До опыта 43,3±1,0 28,4±2,5 42,5±1,9 7,9±0,4 6,6±0,6 105,9±3,1 64,5±1,9 Через 30 суток 48,5±1,5 27,3±2,2 43,1±1,6 6,9±0,5 6,7±0,5 101,9±3,7 64,6±1,6 Через 60 суток 47,3±2,0 25,6±1,8 43,5±1,9 7,5±0,5 7,1±0,4 104,1±3,3 64,4±1,6 Опытная группа 2 До опыта 45,6±1,7 19,1±1,2 43,6±1,7 7,7±0,4 7,4±0,4 103,4±3,6 64,1±1,5 Через 30 суток 46,5±1,9 19,8±1,1 42,9±2,5 7,6±0,4 7,4±0,4 103,2±3,5 65,4±1,7 Через 60 суток 47,2±1,8 19,4±1,3 41,6±2,3 7,7±0,4 7,5±0,4 104,9±4,1 65,4±1,4 Контрольная группа До опыта 48,4±1,8 23,8±2,2 41,1±1,0 8,1±0,2 6,1±0,4 104,3±2,5 66,4±1,5 Через 30 суток 48,6±1,6 25,8±2,4 40,7±1,3 7,4±0,6 6,4±0,3 105,7±3,1 66,2±1,8 Через 60 суток 47,2±1,8 25,3±1,9 42,8±1,8 7,1±0,4 6,8±0,3 104,7±3,1 65,7±1,6 Примечание: во всех случаях р≥0,05

Из таблицы 8 видно, что исследуемые биохимические показатели сыворотки крови кошек опытных и контрольных групп достоверно не различались и находились в пределах физиологической нормы до и после применения препарата.

Лейкограмма крови кошек опытных и контрольных групп представлена в таблице 9.

Таблица 9 - Лейкограмма крови кошек (M±m) Группы
Животных Б Э Нейтрофилы Л М М Ю П С 1 до опыта 0 3,4±0,43 0 0 2,4±0,2 54,5±3,2 36±2,4 3±0,33 через 45 суток 0 3,7±0,42 0 0 2,6±0,2 55,6±2,6 37±1,8 3±0,29 2 до опыта 0 3,6±0,42 0 0 2,5±0,2 53,9±2,8 40±3,0 3±0,37 через 45 суток 0 4,1±0,43 0 0 2,6±0,2 57,2±2,3 36±2,9 3±0,26 Контр. до опыта 0 3,2±0,44 0 0 2,5±0,2 58,2±2,0 35±2,1 2±0,29 через 45 суток 0 3,7±0,42 0 0 2,3±0,3 56,1±1,5 37±2,1 2±0,29 Примечание: во всех случаях р≥0,05

Из таблицы 9 видно, что лейкограмма крови кошек опытных и контрольных групп статистически не различалась между собой, процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов находилось в пределах физиологической нормы до и после применения препарата.

Результаты исследования мочи кошек представлены в таблице 10.

Таблица 10. Физико-химические показатели мочи кошек (M±m) Показатели Группы Опытная 1 Опытная 2 Контрольная До начала опыта Цвет Желтый Светло-желтый Желтый Запах Специфический Специфический Специфический Прозрачность Прозрачная Прозрачная Прозрачная Плотность, г/см³ 1,031-1,031 1,030-1,032 1,030-1,030 рН 6,3±0,1 6,1±0,1 6,3±0,1 Белок Отсутствует Отсутствует Отсутствует Организованные осадки Отсутствуют Отсутствуют Отсутствуют Индикан Отсутствует Отсутствует Отсутствует Ацетоновые тела Отсутствуют Отсутствуют Отсутствуют Через 30 суток Цвет Светло-желтый Светло-желтый Желтый Запах Специфический Специфический Специфический Прозрачность Прозрачная Прозрачная Прозрачная Плотность, г/см³ 1,031-1,031 1,030-1,030 1,029-1,031 рН 6,1±0,1 6,3±0,1 6,2±0,1 Белок Отсутствует Отсутствует Отсутствует Организованные осадки Отсутствуют Отсутствуют Отсутствуют Индикан Отсутствует Отсутствует Отсутствует Ацетоновые тела Отсутствуют Отсутствуют Отсутствуют Через 45 суток Цвет Желтый Светло-желтый Светло-желтый Запах Специфический Специфический Специфический Прозрачность Прозрачная Прозрачная Прозрачная Плотность, г/см³ 1,030-1,030 1,031-1,031 1,030-1,030 рН 6,1±0,1 6,4±0,1 6,1±0,1 Белок Отсутствует Отсутствует Отсутствует Организованные осадки Отсутствуют Отсутствуют Отсутствуют Индикан Отсутствует Отсутствует Отсутствует Ацетоновые тела Отсутствуют Отсутствуют Отсутствуют Примечание: во всех случаях р≥0,05

У всех животных до опыта и на протяжении всего эксперимента моча была светло-желтого цвета, специфического запаха, прозрачная, водянистой консистенции, слабо кислой реакции, показатель плотности находился в пределах физиологической нормы, белок, индикан и ацетоновые тела отсутствовали.

Таким образом, проведенные исследования показали, лекарственное средство в форме капель для перорального применения для кошек при обработке в двукратно и пятикратно увеличенных терапевтической дозах не оказывает отрицательного влияния на общее состояние животных, их физиологический статус и поведение, не изменяет гематологические показатели крови и физико-химические показатели мочи.

Пример 7. Переносимость лекарственного средства в таблетированной форме для перорального применения (кошки)

Переносимость лекарственного средства в таблетированной форме для перорального применения проводили на 15 клинически здоровых беспородных половозрелых (с 6 мес. возраста до 3 лет) кошках массой 2-5 кг содержащихся в боксах на стандартном полнорационном кормлении. Животные по принципу пар-аналогов (пол, возраст, масса тела животного, физиологическое состояние) были разделены на три группы по 5 голов в каждой. Препарат вводили животным перорально за 1-2 часа до кормления на корень языка в течение 14 суток в следующих дозах: первой опытной группе - 2 таблетки на животное (двукратно увеличенная терапевтическая доза); второй опытной группе - 5 таблеток на животное (пятикратно увеличенная терапевтическая доза); третья группа служила контролем - препарат не применяли.

В процессе опыта за животными вели ежедневное наблюдение, отмечая их общее состояние, поведение, аппетит, контролировали их вес, температуру тела. До начала опыта и через 30 и 45 суток после начала применения препарата брали кровь и мочу для исследования ряда параметров, характеризующих состояние внутренних органов и систем организма - гематологические и биохимические показатели.

В результате ежедневного наблюдения за животными в течение экспериментального периода было установлено, что общее состояние кошек опытных групп существенно не отличалось от состояния животных контрольной группы: они находились в удовлетворительном состоянии, были подвижны, активны, охотно принимали корм и пили воду, не отмечалось отклонений физиологических функций, каких-либо токсических явлений, условные рефлексы были сохранены.

Данные показывают, что статистически достоверных изменений массы тела кошек во всех группах через 30 и 45 суток эксперимента от его начала не установлено. Температура тела кошек подопытных и контрольных групп находилась в пределах физиологической нормы до и после применения препарата.

Результаты исследования ряда гематологических показателей крови кошек опытных и контрольных групп представлены в таблице 11.

Таблица 11. Гематологические показатели крови кошек (M±m) Сроки исследования Эритроциты, 10¹²/л Лейкоциты, 10⁹/л Гемоглобин, г/л СОЭ, мм/час
по Панченкову Кошки Опытная группа 1 До опыта 7,42±1,91 12,98±5,59 131,80±13,18 2,80±2,04 Через 30 суток 7,40±2,09 12,60±6,62 128,80±14,98 3,0±1,76 Через 45 суток 7,10±1,66 13,14±5,21 133,60±14,33 3,0±1,24 Опытная группа 2 До опыта 7,64±2,05 11,30±5,12 126,40±22,25 2,40±1,88 Через 30 суток 7,40±2,15 10,94±5,61 125,80±21,09 2,60±1,67 Через 45 суток 7,56±2,40 12,22±2,05 131,0±14,15 2,80±1,36 Контрольная группа До опыта 7,64±1,72 15,64±3,08 137,40±9,44 3,50±0,92 Через 30 суток 7,64±1,61 15,90±3,03 137,50±12,50 3,75±0,80 Через 45 суток 7,80±1,20 14,32±2,17 133,50±6,17 3,75±1,52 Примечание: во всех случаях р≥0,05

Из таблицы 11 видно, что количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина и скорость оседания эритроцитов в крови кошек опытных и контрольных групп статистически не различались и находились в пределах физиологической нормы как до начала опыта, так и на 30 и 45 сутки после обработки животных.

Лейкограмма крови животных опытных и контрольной групп представлена в таблице 12.

Таблица 12 - Лейкограмма крови кошек (%), М±m Сроки исследования Б Э Нейтрофилы Л М М Ю П С Кошки Опытная группа 1 До опыта 0,40±0,68 6,0±2,91 0 0 1,40±1,42 55,20±6,99 34,80±9,35 2,20±1,04 Через 30 суток 0,40±0,68 6,0±2,32 0 0 1,60±1,11 55,0±7,40 34,60±10,48 2,40±0,68 Через 45 суток 0,40±0,68 5,80±2,39 0 0 1,60±1,11 53,60±6,24 35,80±4,76 2,20±0,56 Опытная группа 2 До опыта 0,20±0,56 6,0±0,88 0 0 1,20±1,04 57,40±6,60 33,20±6,88 2,0±1,52 Через 30 суток 0,40±0,68 6,40±1,67 0 0 1,20±1,04 56,80±7,42 32,80±8,53 2,40±1,42 Через 45 суток 0,40±0,68 7,0±0,88 0 0 1,0±1,52 55,0±7,24 34,60±6,89 2,0±1,24 Контрольная группа До опыта 0,25±0,80 7,25±1,52 0 0 1,25±1,52 56,50±14,27 33,0±14,65 1,75±1,52 Через 30 суток 0,50±0,92 7,0±2,60 0 0 1,0±1,30 55,75±14,32 33,50±12,50 2,25±1,52 Через 45 суток 0,25±0,80 5,75±2,72 0 0 2,0±2,25 55,25±11,36 33,75±13,65 3,0±1,30 Примечание: во всех случаях р≥0,05

Из таблицы 12 видно, что лейкограмма крови кошек опытных и контрольных групп статистически не различалась между собой, процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов находилось в пределах физиологической нормы до и после применения препарата.

Результаты исследования ряда биохимических показателей сыворотки крови животных опытных и контрольных групп представлены в таблице 13.

Таблица 13. Биохимические показатели сыворотки крови кошек (M±m) Сроки исследования Щелочная фосфатаза, ЕД/л АСТ, ЕД/л АЛТ, ЕД/л Общий белок, г/л Мочевина, ммоль/л Креатинин, мкмоль/л Общий билирубин, ммоль/л Прямой билирубин, ммоль/л Кошки Опытная группа 1 До опыта 36,0±28,78 27,0±8,78 40,60±16,80 68,60±3,58 5,92±1,75 111,40±29,93 5,28±3,05 1,80±1,39 Через 30 суток 37,0± 29,88 28,20± 7,92 39,60±17,35 70,20±3,44 5,96±1,63 111,0±31,24 4,90±3,21 1,70±1,29 Через 45 суток 45,0±26,08 29,40±12,49 36,0±18,12 64,60±7,88 5,88±1,30 115,0±27,43 5,62±3,21 1,72±1,28 Опытная группа 2 До опыта 42,80±23,48 28,20±6,35 45,80±7,57 65,40±6,24 6,94±2,38 97,20±22,81 4,96±4,10 2,54±1,29 Через 30 суток 41,40±20,37 26,0±7,29 46,20±10,87 65,0±5,62 6,80±2,72 96,80±17,85 5,40±4,74 2,46±1,61 Через
45 суток 55,20±23,90 39,0±14,55 59,40±16,27 65,80±10,33 7,02±2,42 128,40±34,68 5,26±3,86 2,38±1,24 Контрольная группа До опыта 43,0±3,01 36,25±11,72 56,25±14,20 72,50±6,56 5,35±1,51 126,50±55,18 4,73±4,89 2,08±2,22 Через 30 суток 42,25±31,55 35,75±10,51 55,25±11,36 71,25±8,85 5,35±1,57 126,25±55,65 4,78±5,18 2,20±2,53 Через
45 суток 66,75±11,51 37,25±14,14 52,25±10,51 66,25±10,18 6,08±2,11 126,25±51,62 4,60±4,44 2,28±2,13 Примечание: во всех случаях р≥0,05

Из таблицы 13 видно, что исследуемые биохимические показатели сыворотки крови кошек опытных и контрольных групп достоверно не различались и находились в пределах физиологической нормы до и после применения препарата.

У всех животных до опыта и на протяжении всего эксперимента моча была от светло-желтого до желтого цвета, специфического запаха, прозрачная, водянистой консистенции, слабо кислой реакции, показатель плотности находился в пределах физиологической нормы, белок, индикан и ацетоновые тела отсутствовали.

Таким образом, проведенные исследования показали, что лекарственное средство в таблетированной форме для перорального применения при обработке в двукратно и пятикратно увеличенных терапевтических дозах не оказало отрицательного влияния на общее состояние животных, их физиологический статус и поведение. Морфологические и биохимические показатели крови и физико-химические показатели мочи животных были в пределах референсных значений до и после применения препарата.

По результатам проведенных исследований были сделаны следующие выводы.

Использование лекарственного средства с содержанием в качестве действующего вещества принципиально нового компонента, впервые используемого в области ветеринарии - производного 19-нортестостерона - диеногеста для регуляции половой охоты у домашних животных является более эффективным в гораздо меньших терапевтических дозах по сравнению с прототипом, использующимся повсеместно в моно- и бигормональных препаратах - мегестрола ацетатом. При его применении время ожидания эффекта было меньше, чем у прототипа. При правильном применении препарат не обладает побочными эффектами и осложнениями.

Изобретение является промышленно применимым и новым, а также обладает изобретательским уровнем. Известные аналоги, содержащие в своем составе мегестрола ацетат, имеют в десятки раз более высокие дозы гормона, что увеличивает риск появления нежелательных побочных эффектов.

Изобретение предлагается для использования в трех лекарственных формах: в виде раствора для топикального применения, в виде капель и таблеток для перорального применения, что обеспечивает свободу выбора и удобство применения в каждом конкретном случае.

Результаты исследований по изучению острой, субхронической токсичности на лабораторных животных и переносимости лекарственного средства целевыми животными в двух- и пятикратных терапевтических дозах свидетельствуют о его безопасности.

Список использованных источников, принятых во внимание при составлении заявки

Max A., Jurka P., Dobrzynski A., Rijsselaere T. Non surgical contraception in female dogs and cats // Acta Sci. Pol., Zootechnica. - 2014. - Vol. 13, No 1, pages 3-18.

Ruan X., Seeger H., Mueck A.O. The pharmacology of dienogest // Maturitas. - 2012. - Vol. 71, No 4. - P. 337-344.

ГОСТ 12.1.007-76. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности.

Зейналов О.А., Савинова Т.С., Андрюшина В.А. Сравнительная характеристика моногормональных и бигормональных гестаген-содержащих препаратов для подавления поведенческих проявлений половой охоты у кошек // Российский ветеринарный журнал. - 2017. - № 2. - С. 33-35

Приказ МЗ РФ №708н от 23 августа 2010 г. «Правила лабораторной практики в Российской Федерации».

Прилепская В.П., Острейкова Л.И. Диеногест (фармакологические, клинические и лечебные эффекты). М.: 2005. - 59 с.

RU 99105964 от 20.01.2001

RU 2163809 от 10.03.2001

RU 2545745 от 10.04.2015

RU 2015126106 от 11.01.2017

RU 2617518 от 25.04.2017

EA 036143 B1 от 05.10.2020.

Группа изобретений относится к области ветеринарии, а именно к средствам для регуляции половой охоты у мелких домашних животных. Средство для регуляции половой охоты у мелких домашних животных в форме раствора для перорального применения содержит диеногест 0,01-1 мас.% и вспомогательные вещества: эфирное масло кошачьей мяты – 0,1 мас.%, бутилгидроксианизол – 0,2 мас.%, бутилгидрокситолуол – 0,1 мас.%, N – Метилпирролидон – 5 мас.%, альфа-токоферол ацетат – 0,1 мас. %, масло соевое – до 99,99 мас. %. Средство для регуляции половой охоты у мелких домашних животных в таблетированной форме для перорального применения содержит диеногест – 0,01-1 мас.% и вспомогательные вещества:, кроскармеллоза натрия – 5,0 мас.%, стеарат кальция – 1,0 мас.%, желатин – 1,0 мас.%, аэросил – 1 мас. % и краситель Понсо Е 124 – 0,05 мас.%, лактоза – до 99,99 мас.%. Средство для регуляции половой охоты у мелких домашних животных в форме раствора для топикального нанесения содержит диеногест 0,01-1 мас.% и вспомогательные вещества: D,L-токоферол – 0,005 мас.%, 3-метил-6-изопропилциклогексанол – 0,01 мас.%, моноэтиловый эфир диэтиленгликоля – до 99,99 мас.%. Вышеописанная группа изобретений позволяет скорректировать половое влечение, а именно половое влечение исчезает в короткий срок, начиная с третьих суток использования указанных средств. 3 н.п. ф-лы, 1 ил., 13 табл., 7 пр.

1. Средство для регуляции половой охоты у мелких домашних животных в форме раствора для перорального применения, содержащее диеногест 0,01-1 мас.% и вспомогательные вещества: эфирное масло кошачьей мяты – 0,1 мас.%, бутилгидроксианизол – 0,2 мас.%, бутилгидрокситолуол – 0,1 мас.%, N – Метилпирролидон – 5 мас.%, альфа-токоферол ацетат – 0,1 мас. % , масло соевое – до 99,99 мас. %.

2. Средство для регуляции половой охоты у мелких домашних животных в таблетированной форме для перорального применения, содержащее диеногест – 0,01-1 мас.% и вспомогательные вещества: кроскармеллоза натрия – 5,0 мас.%, стеарат кальция – 1,0 мас.%, желатин – 1,0 мас.%, аэросил – 1 мас. % и краситель Понсо Е 124 – 0,05 мас.%, лактоза – до 99,99 мас.%.

3. Средство для регуляции половой охоты у мелких домашних животных в форме раствора для топикального нанесения, содержащее диеногест 0,01-1 мас.% и вспомогательные вещества: D,L-токоферол – 0,005 мас.%, 3-метил-6-изопропилциклогексанол – 0,01 мас.%, моноэтиловый эфир диэтиленгликоля – до 99,99 мас.%.