СРЕДСТВО ДЛЯ ПРЕРЫВАНИЯ ПОЛОВОЙ ОХОТЫ У САМОК КОШЕК "АНТИМЯУ" Российский патент 1994 года по МПК A61K37/02 A01K67/02 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к средству для прерывания половой охоты у самок кошек.

Кошки являются одним из самых распространенных видов домашних животных. Миллионы людей содержат их дома. Однако, учитывая, что кошки - плодовитые животные и могут приносить потомство 2-3 раза в год, у владельцев кошек часто возникают проблемы с тем, чтобы не допустить появления нежелательного потомства. Тем более, что в период течки поведение кошки доставляет много неудобств владельцам из-за ее громких криков и попыток уйти из дома на поиски партнера. До недавнего времени практически единственным выходом для решения этих проблем был хирургический метод - операция овариэктомии у самок. Но такой выход из положения часто является нежелательным, особенно когда имеют дело с разведением породистых животных.

Общеизвестно, что половое поведение самок отражает функциональное состояние периферических половых желез - яичников. В овариальном цикле происходит последовательная смена трех стадий: стадия роста и развития фолликулов и яйцеклеток, стадия овуляции, то есть выброс яйцеклеток из созревших фолликулов и стадия развития желтого тела и его инволюции. В стадию роста и развития фолликулов происходит нарастание продукции эстрогенов, которая нарастает до максимальных значений во время предовуляции. Чередование стадий цикла опосредуется циклической продукцией гипофизарных гонадотропных гормонов: фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), лютеинизирующего гормона (ЛГ) и лютеотропного гормона (ЛТГ, пролактин). Рост и развитие фолликулов и яйцеклеток происходит под влиянием повышенной продукции ФСГ и ЛГ. Когда продукция эстрогенов яичниками достигает максимума, по принципу отрицательной обратной связи подавляется выработка гипофизом ФСГ и резко активируется продукция ЛГ (по принципу положительной обратной связи между яичниками и гипофизом). Пик секреции ЛГ гипофизом определяет овуляцию, то есть выброс яйцеклеток из зрелых фолликулов с последующим образованием желтого тела, которое вырабатывает прогестерон. В активном состоянии желтое тело поддерживается ЛТГ. При повышении продукции прогестерона происходит подавление продукции ЛГ и ЛТГ (отрицательная обратная связь) и стимуляция продукции ФСГ. Под влиянием последнего вновь начинается рост и развитие новых фолликулов (см. Н.И.Лазарев и др. "Экспериментальные модели эндокринных гинекологических заболеваний", М., 1976). Половые стероидные гормоны осуществляют свое влияние на гипофиз как непосредственно, так и опосредованно: через центральное звено регуляции эндокринных функций - гипоталамус.

Гипоталамус, относящийся к образованиям головного мозга, вырабатывает ряд биологически активных пептидных гормонов, которые названы рилизинг-гормонами. Эти гормоны контролируют продукцию гипофизарных гормонов. В частности, гипоталамический рилизинг-гормон гонадотропных гормонов (Гн-РГ,ЛГ-РГ, люлиберин) стимулирует продукцию и секрецию двух гонадотропинов - ФСГ и ЛГ. В зависимости от гормонального фона половых стероидных гормонов и концентрации Гн-РГ в воротной крови гипофиза стимулируется продукция гипофизом либо одного ФСГ, либо ФСГ + ЛГ, либо одного ЛГ. То есть, в конечном счете, гипоталамус является центральным нейроэндокринным регулятором, посредством которого различные факторы внешней среды (например, освещенность) и внешние раздражители (вид партнера, окрас, запах, звуковые раздражители) оказывают свое влияние на половое поведение животных.

Известно, что у самок кошек, как и у самок кроликов, пиковое повышение продукции ЛГ и, вслед за этим, овуляция происходит в норме во время спаривания. Когда продукция эстрогенов фолликулами достигает высоких значений, у кошек наступает стадия предовуляции. Самки кошек становятся беспокойными, они заняты активным поиском самца и очень крикливы. Их поведение настолько резко меняется, что их содержание в этот период в домах и семьях становится весьма обременительным для хозяев. Период течки достаточно длителен - от недели и более, и продолжается до тех пор, пока не наступит спаривание, часто нежелательное для хозяев, либо не наступит атрезия фолликулов, то есть образование желтого тела без овуляции.

Учитывая физиологические эндокринные механизмы функционирования репродуктивной системы у самок, можно было допустить, что введение самкам кошек экзогенного ЛГ-РГ или его аналогов-агонистов может привести к выработке прогестерона желтым телом яичников, то есть к состоянию ложной беременности и, как следствие этого, к изменению полового поведения животных.

В последние годы благодаря успехам химии успешно синтезирован ряд пептидных гормонов гипоталамуса и их суперактивные аналоги-агонисты. Эти агонисты предлагаются в виде основных активных веществ в качестве лекарственных препаратов для лечения и коррекции функций эндокринной системы. Замена одной левовращающей аминокислоты в 6-ом положении молекулы ЛГ-РГ на правовращающие аминокислоты и замена Гли¹⁰ на этиламид приводит к созданию аналогов ЛГ-РГ, обладающих свойствами агонистов.

В заявке РСТ 88/05308 /МКИ: A 61 K 39/385/ описан гормон, подавляющий репродуктивную функцию. Он представляет собой пептид, содержащий 5, 6 или 7 любых последовательных аминокислот из декапептида
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Glu-Leu-
-Arg-Pro-Gly-NH₂, который является рилизинг-фактором лютеинизирующего гормона, и подходящий иммуноадъювант, например, диэтиламинодекстран. Для вакцинации используют эмульсию препарата в минеральном масле. Предпочтительно использовать фрагменты декапептида, имеющие на азотном конце р-Glu или на углеродном конце p-Gly-NH₂, например, 1-5, 1-6, 1-7, 2-8, 3-8, 4-10, 5-10 аминокислотные остатки. Инъекция такого гормона приводит к иммунокастрации млекопитающих.

Как хирургическая, так и иммунологическая стерилизация хотя и снимает ряд неудобств, связанных с содержанием домашних животных, в частности кошек, однако они приводят к необратимым результатам и непригодны в тех случаях, когда владельцы хотят иметь животных с нормальной репродуктивной функцией и избежать нежелательной беременности без связанных с этим осложнений; к тому же иммунологическая стерилизация обычно требует многократных введений препарата для выработки антител к эндогенному ЛГ-РГ, что занимает много времени.

Целью настоящего изобретения является разработка препарата, способного быстро прервать период течки у животных, например, у кошек, и перевести животное в состояние покоя без нарушений репродуктивной функции.

Другой целью является разработка способа, удобного для владельца, введения этого препарата животному.

Поставленные цели достигаются при использовании в качестве средства для прерывания половой охоты (течки) у самок животных пептида, имеющего структуру
pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-
-Leu-Arg-Pro-этиламид.

Этот пептид является агонистом ЛГ-РГ (суперрилизинг-фактором гонадотропинов) и был предложен нами ранее как главная составная часть препарата сурфагон для лечения гипофункции яичников, фолликулярных кист яичников у телок, коров, овец, свиней и других сельскохозяйственных животных и для коррекции нарушений функции воспроизводства (см. авт. свидетельство СССР N 1683611 Кл. А 01 К 67/02; A 61 K 37/02, 1991 г.). Сурфагон в настоящее время разрешен для широкого применения в сельском хозяйстве (см. "Наставление по применению сурфагона в ветеринарии Главного управления ветеринарии N 042-15 от 01.12.89 г.). Этот пептид производят известными методами пептидной химии (см. "Пробл. эндокринол., т. XXXIY, N 6, 1988, с. 62-66) и его биологические свойства уже хорошо изучены (см. Там же и в кн.: "Нейропептиды в экспериментальной и клинической практике", М., 1986, с. 140-164).

В опытах на лабораторных крысах было показано, что сурфагон в дозах от 4 мкг/кг и выше оказывал стимулирующее влияние на продукцию как ФСГ, так и ЛГ (см. Кривошеев О.Г. с соавт. "Пробл. эндокринол., 1988, т. XXXIV, N 6, с. 62-66), а в дозах ниже 2 мкг/кг у самок белых крыс он увеличивал концентрацию в крови только ЛГ.

Оказалось, что 1-3-кратное введение пептида или в виде инъекции, или перорально в молоке прерывало течку у самок кошек без каких-либо отрицательных побочных явлений. Препарат хорошо переносился кошками при обоих способах введения. Кошки, получавшие предлагаемый пептид, в последующем способны к нормальному воспроизводству потомства. Беременность и роды протекали без осложнений и рождались здоровые котята. Следует отметить, что во время течки кошкам не следует давать сырое мясо.

Лекарственный препарат, созданный на основе предлагаемого синтетического пептида, мы назвали "антимяу".

Эффективность применения антимяу при инъекционном способе введения и при приеме внутрь в качестве препарата, повышающего секрецию ЛГ и вызывающего овуляцию, была показана нами на лабораторных крысах. Прерывание стадии течки у самок кошек была доказана в опытах на самках кошек, содержащихся в домашних условиях. В результате опытов было разработано наставление по использованию препарата антимяу на самках кошек, согласно которому препарат проходил проверку во Всероссийском государственном научно-исследовательском институте контроля, стандартизации и сертификации ветеринарии препаратов, где была подтверждена его высокая эффективность. Ниже приводятся примеры, которые иллюстрируют изобретение, но не ограничивают его.

П р и м е р 1. Проводят проверку эффективности применения антимяу в тесте увеличения концентрации ЛГ под влиянием его парентерального, подкожного и внутримышечного введения и в тесте индукции овуляции у крыс линии Вистар. Для этого самкам крыс Вистар массой тела 50 г вводят подкожно в область холки препарат антимяу из ампулы, содержащей 5 мкг/мл активного пептида pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-DAla-Leu-Arg-Pro-этиламид в физиологическом растворе в дозах 2, 0,4; 0,08 и 0,02 мкг активного вещества на 1 кг массы тела. Контрольным крысам вводят растворитель - стерильный физиологический раствор. Результаты представлены в табл. 1. Как видно из данных таблицы, антимяу при парентеральном введении самкам крыс вызывает выраженное, зависимое от дозы увеличение концентрации ЛГ в сыворотке крови.

В другом опыте на неполовозрелых самках крыс, обработанных предварительно гонадотропином из сыворотки жеребых кобыл (3 ме/крыса) и получавших через 54 часа после этого подкожно различные дозы антимяу: 0,5; 2 и 8 мкг активного вещества на 1 кг массы тела, а другие группы крыс - нативный люлиберин ("Beckman", США) и препарат ЛГ (стандарт ЛГ Национального института здоровья, США, активность 2 ме/мг) в дозе 6 мкг/кг, было показано, что введение всех доз антимяу индуцировало овуляцию у 100% животных (см. табл. 2) и процент животных с индуцированной овуляцией был выше, чем при введении ЛГ или коммерческого препарата нативного ЛГ-РГ.

П р и м е р 2. Исследовали возможность перорального применения антимяу на лабораторных крысах. При этом учитывали, что пищеварительными ферментами желудочно-кишечного тракта, несмотря на защитную модификацию молекулы ЛГ-РГ, аналоги-агонисты могут более быстро разрушаться в желудочно-кишечном тракте по сравнению с расщеплением в крови и в тканях-мишенях агониста. К началу наших опытов было известно, что некоторые пептиды сохраняют свое биологическое влияние и терапевтическое действие, если их вводить внутрь не с водой, а с молоком. Возможность перорального приема пептидного препарата с молоком была ранее показана на примере пептидного препарата глудолана (см. "Гексапептид, обладающий противоязвенным действием". Авт. свид. N 1460965). Поэтому в опыте по пероральному применению антимяу препарат в дозе 2 мкг/кг вводили внутрь с водой и с молоком (объем 0,5 мл, молоко 3,5% -ной жирности). В качестве сравнения препарат в дозе 2 мкг/кг вводили внутрибрюшинно. В крови определяли содержание ЛГ (радиоиммунологическим методом) через 30-270 мин после введения антимяу. По повышению концентрации ЛГ в крови после введения антимяу внутрь и внутрибрюшинно судили о возможности перорального использования антимяу. Результаты повышения концентрации ЛГ в крови под влиянием пептида выражали в процентах от контрольных значений содержания ЛГ в крови крыс, не получавших препарата, а получавших молоко внутрь (0,5 мл). Возраст самок крыс 23 дня, масса тела 50 г.

Результаты опыта представлены на графике.

На графике показано влияние парентерального и перорального (с молоком) введения антимяу (2 мкг/кг) на увеличение концентрации ЛГ в сыворотке крови самок крыс в процентах от контроля (интактные крысы). 1 - парентерально, 2 - внутрь с молоком, 3 - внутрь с водой.

Из данных графика видно, что как при внутрибрюшинном введении антимяу, так и приеме его с молоком внутрь происходило значительное повышение концентрации ЛГ в сыворотке крови с максимумом через 120 мин после введения препарата. Площадь пиков, лежащих под кривой "время-процент увеличения концентрации ЛГ в крови" при внутрибрюшинном введении антимяу на 21% больше, чем при приеме антимяу внутрь, а амплитуды повышения концентрации ЛГ практически одинаковы при обоих способах введения препарата.

Таким образом, антимяу оказался активным препаратом, увеличивающим концентрацию ЛГ в крови как при парентеральном введении, так и при пероральном введении, и его можно использовать для решения основной задачи исследования: прекращения течки у самок кошек препаратом антимяу.

П р и м е р 3. Исследовали возможность прерывания течки у кошек парентеральным введением антимяу. Исследования проводили в течение 2 лет на трех взрослых кошках на протяжении 18 овариальных циклов. В половине циклов введение антимяу проводили только парентерально или только перорально. Парентерально антимяу вводили внутримышечно в мышцы задних лап или подкожно в область холки, ближе к ушам, так как такие введения для кошек менее болезненны. Введение проводили в дозе 5 мкг активного пептида на введение, то есть 2 мкг/кг, учитывая, что средняя масса испытуемых взрослых кошек составляла 2,5 кг. Введение начинали вечером в 22.00 на 2-е сутки после проявления поведенческих признаков течки. Дозу 5 мкг вводят из ампулы, содержащей 5 мкг в 1 мл стерильного физиологического раствора. После введения через 10 мин поведение кошек становилось более спокойным. В 30% случаев было достаточно одного введения препарата. Если кошки вновь проявляют беспокойство на следующий день, то вновь на ночь повторяют введение препарата. Обычно для прерывания течки было достаточно 2-3 последовательных введений препарата.

П р и м е р 4. Аналогично парентеральному введению проводят пероральное введение антимяу. В 20-30 мл пастеризованного, но не кипяченого молока вносят содержимое двух ампул (2 мл) антимяу, что составляет дозу 10 мкг на один прием на ночь. Если кошки не приучены к молоку, то в молоко добавляют 2-3 капли настойки валерианы. Достаточно 1, 2 или 3 пероральных приемов антимяу.

Отрицательных побочных явлений не выявлено. Препарат хорошо переносится кошками при обоих способах введения. В последующем кошки, получавшие антимяу, были способны к нормальному воспроизводству потомства.

Использование: в ветеринарии, в частности в средствах для прерывания половой охоты у самок кошек. Сущность изобретения: парентеральное или пероральное средство (синтетический пептид) вводят с молоком в результате чего прерывается состояние течки у самок кошек без каких-либо побочных эффектов. Средство под названием "антимяу" представляет собой пептид ф-лы: P-giu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Leu-Arg-Pro - этиламид. 2 табл. 1 ил.

Применение синтетического пептида структуры Pglu - His - Trp - Ser - Tvr - D - Ala - Zeu - Arg - Pro - этиламид в качестве средства для прерывания половой охоты у самок кошек.