Лекарственная форма для подавления бактериальных инфекций, способ её организации Российский патент 2024 года по МПК A61K9/70 A61K38/12 A61K47/10 A61K47/36 A61K47/40 

Заявляемое техническое решение относится к области фармацевтики, к лекарственным формам, расширяющим арсенал лекарственных средств на основе фармацевтической субстанции, содержащей грамицидин С, которые могут быть использованы для подавления бактериальных инфекций в очаге местного воспаления полости рта человека, для повышения эффективности терапии инфекционно-воспалительных заболеваний полости рта, а именно альвеолита; фарингита; пародонтоза; гингивита; стоматита и способам их организации.

Используемые термины:

Грамицидин С - Грамицидина С гидрохлорид или дигидрохлорид, оригинальный отечественный антибиотик, впервые полученный И.Ф. Гаузе и М.Г. Бражниковой в 1942 г. Грамицидин С гидрохлорид представляет собой бесцветные игольчатые кристаллы. Грамицидин С проявляет повышенную антимикробную активность, предназначен исключительно для местного применения, не имеет аналогов для системного использования. Препарат обладает выраженным бактерицидным действием в отношении патогенных грамположительных и грамотрицательных бактерий, которые в большинстве случаев либо непосредственно являются причиной заболеваний горла и полости рта, либо присоединяются вторично при изначальной вирусной инфекции - Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Streptococcus pneumoniae, нейссерий, анаэробов и др. (Хохлов А.С., Шемякин М.М. Химия антибиотических веществ. - 1949. - 455).

Организовать (фр. organiser, от лат.organum орган) - Соединять разные предметы или силы природы для достижения какой либо определенной цели; устраивать, оживлять (Словарь иностранных слов русского языка 4yflHHOBa//URL: URL: http://dic.academic ru//).

Организация (франц. Organisation, от позднелат.organize - сообщаю стройный вид, устраиваю) - это совокупность процессов или действий, ведущих к образованию и совершенствованию взаимосвязей между частями целого (Большой Энциклопедический словарь//URL: http.;//dic.academic.ru//).

Лекарственная форма - состояние лекарственного препарата, соответствующее способам его введения и применения и обеспечивающее достижение необходимого лечебного эффекта (Государственная Фармакопея Российской Федерации [Электронный ресурс] - 14-е изд. - Том I. - Москва, 2018. - URL: http://www.femb.ru/feml).

Полимер - вещество с большой молекулярной массой, связь между атомами которого представлена в виде линейной или разветвленной цепи, а также в виде трехмерной структуры. Внутри полимера зачастую можно выделить повторяющийся структурный элемент - мономер. В зависимости от происхождения полимеры бывают природные (белки, нуклеиновые кислоты, полисахариды, каучук и другие органические вещества) и синтетические (Краткий электронный справочник по основным нефтегазовым терминам с системой перекрестных ссылок - М.: Российский государственный университет нефти и газа им. И.М. Губкина. М.А. Мохов, Л.В. Игревский, Е.С.Новик. 2004. / URL: https://neft.academic.ru/)

Пленки - дозированная лекарственная форма, представляющая собой одно или многослойные тонкие пластинки, подходящего для применения размера, содержащие одно или несколько действующих веществ и вспомогательные, в том числе, пленкообразующие вещества (Государственная Фармакопея Российской Федерации [Электронный ресурс] - 14-е изд. - Том I. - Москва, 2018. - URL: http://www.femb.ru/feml).

Адгезия - (от лат. Adhaesio - прилипание), возникновение связи между поверхностными слоями двух разнородных (твердых или жидких) тел (фаз), приведенных в соприкосновение. Является результатом межмолекулярного взаимодействия, ионной или металлической связей. (Физический энциклопедический словарь - М.: Советская энциклопедия. Главный редактор А. М. Прохоров. 1983 / URL: https://dic.academic.ru/dic.nsf/enc_physics/).

Известны технические решения в виде таблеток для рассасывания, в которых активная фармацевтическая субстанция Грамицидин С находится в твердом агрегатном состоянии. (Патент RU 2213558 С1, МПК A61K 9/20, A61K 38/08, приоритет 30.09.2002, опубликовано 10.10.2003; Патент RU 2160088 С1, МПК A61K 7/16, A61K 9/06, приоритет 02.11.1999, опубликовано 10.12.2000; Патент RU 2590980 С2, МПК А61Р 31/00, A61K 31/155, A61K 31/7004, A61K 31/194, A61K 31/375, A61K 33/30, приоритет 24.14.2009, опубликовано 10.07.2016).

Недостатками известных технических решений является низкая биодоступность Грамицидина С в очаге местного воспаления. При попадании в полость рта твердые частицы Грамицидина С не способны прочно связаться с поверхностью очага инфекции и вымываются с этой поверхности, что снижает терапевтический эффект известных антибактериальных композиций. Кроме того, они содержат в качестве вспомогательных вещества, которые могут вызывать побочные эффекты, например, аллергические реакции (лактоза, сахароза).

Известны технические решения, в которых активная фармацевтическая субстанция Грамицидина С находится в жидком агрегатном состоянии, представляющая собой спиртовой раствор от светло-желтого до желтого цвета с характерным запахом, содержащий 2% Грамицидина С гидрохлорида, обладающего специфическим вкусом и запахом. (Грамицидин С - официальная инструкция по применению, URL: https://medi.ru/instrukciya/gramitsidin-s_12289/).

Недостатком известного технического решения является то, что вследствие разведения 2% спиртового раствора Грамицидина С при приготовлении лекарственного препарата наблюдается опалесценция раствора с последующим образованием осадка, что ведет к снижению терапевтических свойств, т.к. грамицидин С приобретает форму твердых частиц. В заводских условиях водный раствор Грамицидина С на основе спиртового 2% раствора производить невыгодно и невозможно ввиду малой длительности сохранения агрегативной устойчивости частиц Грамицидина С в водных растворах, не превышающей 3 дней. Приготовление лекарственного препарата на основе 2% спиртового раствора в домашних условиях также невозможно ввиду отсутствия возможности точного дозирования компонентов. Перечисленные факты исключают возможность розничной продажи 2% спиртового раствора Грамицидина С.Также известно, что способ применения полученного водного раствора Грамицидина С (полоскание) недостаточно эффективен, т.к. активное вещество не полностью распределяется в очаге инфекции, но частично выходит за его пределы, что не позволяет обеспечить точное дозирование активного вещества. В связи с этим считается более эффективным создание жидкой лекарственной формы, содержащей Грамицидин С в виде спрея, позволяющей достичь более высокой концентрации активного вещества в зоне очага инфекции и обеспечить его точное дозирование.

Известны технические решения, описывающие антибактериальную композицию на основе фармацевтической субстанции, включающей Грамицидин С и этанол, для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний местного применения, способ ее получения и применения (Патент RU 2604576 С1, МПК A61K 31/216, A61K 31/44, A61K 38/12, A61K 9/12, A61K 2121/00 приоритет 01.12.2015, опубликовано 10.12.2016, Патент RU 2604575 С1, МПК A61K 31/216, A61K 31/44, A61K 38/12, A61K 9/12, A61K 2121/00 приоритет 01.12.2015, опубликовано 10.12.2016, Патент RU 26267423 С1, МПК A61K 38/12, A61K 31/44 A61K 9/12, А61Р 31/00 приоритет 29.06.2016, опубликовано 08.08.2017, Патент RU 2749902 С2, МПК A61K 38/12, A61K 31 /137, А61Р 31 /00, А61Р 31 /04, А61Р 11 /00, А61Р 11 /04 приоритет 31.10.2018, опубликовано 16.06.2021).

Композиция содержит Грамицидин С, оксибупрокаина гидрохлорид и цетилпиридиния хлорид, этанол 96%, в качестве вспомогательных веществ - сукралозу, глицерол, лимонную кислоту моногидрат, натрия цитрат, полисорбат 80, метилпарабен, пропилпарабен, ароматизатор мятный, воду очищенную.

Известно техническое решение, описывающие антибактериальную композицию для доставки Грамицидина С к очагу местного воспаления, выполненная в виде лечебного раствора, с возможностью сохранения в состоянии лечебного раствора до момента использования, способ ее получения и применения (Патент RU 2659418 С1, A61K 38/12, A61K 47/10, A61K 47/14, A61K 9/12, А61Р 31/04 приоритет 24.08.2017, опубликовано 02.07.2018).

Недостатком известных технических решений является высокая вероятность проявления аллергических реакций и побочных эффектов при использовании. Возникновение данных эффектов может быть обусловлено наличием в составе известных технических решений таких веществ как оксибупрокаина гидрохлорид, цетилпиридиния хлорид, лимонная кислота моногидрат, натрия цитрат, метилпарабен и пропилпарабен. Известно, что оксибупрокаина гидрохлорид при длительном применении способен вызывать временное жжение слизистых оболочек. Также при наличии повышенной чувствительности организма компонент может вызвать побочные реакции со стороны сердечно-сосудистой системы, анафилактический шок, временную или кратковременную потерю сознания. Цетилпиридиния хлорид при длительном использовании вызывает местное раздражение. В отдельных случаях способствует развитию желудочно-кишечных расстройств, отмечаемых, в основном, при превышении рекомендуемых доз. Лимонной кислоты моногидрат и натрия цитрат также вызывают местное раздражение слизистой оболочки. Метилпарабен и пропилпарабен, за счет своих поверхностно-активных свойств, способны проникать вглубь тканей организма, накапливаться (особенно при нарушении функций почек) и инициировать развитие рака молочной железы, мужской фертильности. Дополнительно парабены могут вызывать повреждения слизистой оболочки и вызывать аллергические реакции в виде кожной сыпи и зуда. Негативный эффект от применения перечисленных веществ обостряется при повреждении тканей полости рта и горла.

Известно техническое решение, описывающее приготовление лиофилизатов комплексов гидроксипропилциклодекстринов с использованием со-растворителей (Патент US 5120720, МПК A61K 9/18 приоритет 20.01.1990, опубликовано 09.06.1992). В известном техническом решении раскрывается способ повышения растворимости субстанций, в т.ч. грамицидина С, в воде посредством образования комплекса включения.

Недостатком известного технического решения является то, что получаемые комплексы обладают низкой адгезией к поверхности слизистой и, как следствие, невысокой терапевтической активностью.

Преодоление указанного недостатка раскрывается в известном техническом решении, выбранном в качестве прототипа - Фармацевтическая субстанция для формирования лекарственных препаратов на основе Грамицидина С и способ ее получения (варианты), фармацевтическая субстанция для формирования лекарственных препаратов пролонгированного действия на основе Грамицидина С и способ ее получения (варианты) (Патент RU 2733715 С2, МПК A61K 38/12, A61K 31/722, A61K 31/724, A61K 9/20, A61K 9/10, B01F 3/08 приоритет 18.01.2019, опубликовано 06.10.2020).

Реализация технического решения по прототипу позволяет обеспечить пролонгированное действие грамицидина С за счет образования комплекса с f3-циклодекстрином или его аналогами и хитозаном, обладающим повышенной адгезией к тканям человеческого организма и, как следствие, более длительным удерживанием грамицидина С в очаге инфекции.

Недостатком известного технического решения является тот факт, что количество фармацевтической субстанции по прототипу, необходимое для обеспечения терапевтического эффекта, чрезвычайно мало, что делает невозможным прямое использование фармацевтической субстанции для лечения и вызывает необходимость формирования лекарственной формы, которая позволит производить необходимые для лечения манипуляции.

Известно техническое решение - пролонгированные лекарственные формы местного действия, оказывающие активирующее влияние на иммунную систему (Патент RU 2185807 С1, МПК A61K 6/00, A61K 9/70, приоритет 27.07.2001, опубликовано 27.02.2002). Известное техническое решение представляет собой двухслойные пленки, которые предназначены для лечения заболеваний полости рта.

Недостатком известного технического решения является наличие в составе гидрофобного слоя, который практически не растворяется в среде полости рта и должен быть удален с поверхности очага инфекции посредством манипуляций.

В связи с этим перед авторами ставилась задача разработать новую лекарственную форму, позволяющую расширить арсенал средств на основе фармацевтической субстанции, содержащую грамицидин С, обладающую локальным воздействием на очаг инфекции, обладающей возможностью пролонгированного высвобождения грамицидина С, и которая по мере высвобождения действующего вещества могла бы полностью растворится в полости рта, а также обладающую сниженным уровнем гемолиза грамицидина С в отношении эритроцитов человека, и способ ее организации.

Задача решается тем, что лекарственная форма для подавления бактериальных инфекций, выполненная на основе фармацевтической субстанции, включающей грамицидин С, хитозан и гидроксипропил-β-циклодекстрин, дополнительно содержит пленкообразователь в виде коллагена и пластификатор, при этом выполнена в виде биоразлагаемой защечной пленки толщиной 33-37 мкм, с рН водного извлечения 6,8-7,2, показателем Т₅₀ грамицидина С в отношении эритроцитов человека 24-26 мкг/мл, и обладающей возможностью пролонгированного высвобождения грамицидина С.

При этом соотношение компонентов в биоразлагаемой защечной пленке в мас. % составляет:

Грамицидин С 2-4 Хитозан 30 - 24 Коллаген 10-15 Гидроксипропил-β-циклодекстрин 28 - 32 Пластификатор 30-25

Грамицидин С может представлять собой основание грамицидина С, грамицидина С дигидрохлорид. Пластификатор может представлять собой глицерин, пропиленгликоль, поливиниловый спирт. Биоразлагаемая защечная пленка представляет собой пластинки, которые могут находиться в твердом или желированном состоянии.

В способе организации лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций, включающем использование фармацевтической субстанции, содержащей грамицидин С, хитозан и гидроксипропил-β-циклодекстрин, дополнительно используют пленкообразователь в виде коллагена и пластификатор; осуществляют процесс формирования пленки, поддерживая скорость удаления влаги на уровне 0,5%/мин, с получением биоразлагаемой защечной пленки толщиной 33-37 мкм, с рН водного извлечения 6,8-7,2, показателем Т₅₀ грамицидина С в отношении эритроцитов человека 24-26 мкг/мл, обладающей возможностью замедленного высвобождения грамицидина С.

При этом выбирают соотношение компонентов в биоразлагаемой защечной пленке в мас. %:

Грамицидин С 2-4 Хитозан 30-24 Коллаген 10-15 Гидроксипропил-β-циклодекстрин 28-32 Пластификатор 30-25

Грамицидин С может представлять собой основание грамицидина С, грамицидина С дигидрохлорид. Пластификатор может представлять собой глицерин, пропиленгликоль, поливиниловый спирт.Биоразлагаемая защечная пленка представляет собой пластинки, которые могут находиться в твердом или желированном состоянии.

Технический эффект заявляемого технического решения заключается в расширении арсенала средств данного назначения, снижении уровня гемолиза грамицидина С в отношении эритроцитов человека.

Суть технических решений поясняется следующим.

Грамицидин С используется в клинической практике более 50 лет, в течение которых продемонстрировал эффективность в отношении различных бактерий. При этом основная форма выпуска грамицидина С - таблетки для рассасывания, эффективность которых в случае необходимости локальной терапии низка по причине равномерного распределения действующего вещества по всей поверхности слизистой оболочки полости рта, в т.ч. на неинфицированные участки, что может вызывать раздражающий эффект. В случае использования спреев распыленный раствор не содержит компонентов, которые будут способствовать его адгезии к поверхности слизистой, что приведет к скорому вымыванию действующего вещества с ее поверхности. В связи с этим актуальным становится разработка средства, содержащего грамицидин С в форме пленки, состоящей из мукоадгезивных и биодеградируемых полимеров, что позволит при локальном нанесении обеспечить более длительное удерживание средства на поверхности очага инфекции и снизит уровень побочных эффектов за счет разложения основы пленки с течением времени.

При организации лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций используют следующую последовательность технологических операций:

- Растворение уксусной кислоты в воде очищенной с получением 1% раствора уксусной кислоты

- Растворение хитозана и гидроксипропил-β-циклодекстрина в 1% растворе уксусной кислоты с получением раствора полимеров.

- Растворение грамицидина С в растворе полимеров с получением раствора действующего вещества.

- Смешивание раствора действующего вещества, 0,1% раствора коллагена в 0,1 М уксусной кислоте и пластификатора с получением раствора биоразлагаемой защечной пленки.

- Гомогенизация раствора биоразлагаемой защечной пленки при 10000 об./мин.

- Формование биоразлагаемых защечных пленок с удалением уксусной кислоты и воды очищенной

При формировании пленки поддерживают скорость удаления влаги на уровне 0,5%/мин. При этом добиваются толщины биоразлагаемой защечной пленки 33-37 мкм, с рН водного извлечения 6,8-7,2, показателем T₅₀ грамицидина С в отношении эритроцитов человека 24-26 мкг/мл, обладающей возможностью замедленного высвобождения грамицидина С.

Соотношение компонентов в биоразлагаемой защечной пленке в мас. % выбирают:

Грамицидин С 2-4 Хитозан 30-24 Коллаген 10-15 Гидроксипропил-β-циклодекстрин 28-32 Пластификатор 30-25

Пример 1

Для подтверждения возможности получения лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций авторы демонстрируют возможность реализации заявляемого способа в отношении следующих составов

Продолжение примера 1

Продолжение примера 1

Организацию образцов лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций ведут с применением последовательности технологических операций:

- Растворяют уксусную кислоту в воде очищенной с получением 1% раствора уксусной кислоты

- Растворяют хитозан и гидроксипропил-β-циклодекстрин в 1% растворе уксусной кислоты с получением раствора полимеров.

- Растворяют грамицидин С в растворе полимеров с получением раствора действующего вещества.

- Смешивают раствор действующего вещества и 0,1% раствор коллагена в 0,1 М уксусной кислоте с получением раствора биоразлагаемой защечной пленки.

- Смешивают раствор пленки и пластификатора с получением раствора биоразлагаемой защечной пленки.

- Гомогенизируют раствор биоразлагаемой защечной пленки при 10000 об./мин.

Формируют биоразлагаемые защечные пленки с удалением уксусной кислоты и воды очищенной, поддерживая скорость удаления влаги на уровне 0,5%/мин. с получением лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций. При этом добиваются толщины биоразлагаемой защечной пленки 33-37 мкм, с рН водного извлечения 6,8-7,2, показателем T₅₀ грамицидина С в отношении эритроцитов человека 24-26 мкг/мл, обладающей возможностью замедленного высвобождения грамицидина С.

При организации лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций необходимо соблюдать соотношение компонентов, что обеспечит стабильность лекарственной формы (варианты 2, 5, 8, 11, 14).

При отклонении содержания грамицидина С (варианты 1, 3) нарушается терапевтическая эффективность лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций, т.к. не обеспечивается необходимое количество действующего вещества или наличествует его избыток, что может вызвать побочный эффект.

При отклонении процентного содержания пленкообразующих компонентов - хитозана и коллагена (варианты 4, 6, 7, 9), лекарственная форма для подавления бактериальных инфекций будет отличаться по толщине от целевого значения 33-37 мкм.

Содержание гидроксипропил-β-циклодекстрина обуславливает растворение грамицидина С в 1% растворе уксусной кислоты при получении раствора полимеров. В случае недостатка гидроксипропил-β-циклодекстрина, грамицидин С не растворится в 1% растворе уксусной кислоты (вариант 10), что приведет к ухудшению однородности дозирования лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций. В случае избытка гидроксипропил-β-циклодекстрина (вариант 12) данное вещество будет оказывать осушающее действие на пленку, что приведет к ухудшению эластичности.

Эластичность, в свою очередь, может регулироваться содержанием пластификатора. При недостатке данного компонента (варианты 13, 16, 19) образуется неэластичная пленка с низким показателем прочности на растяжение. В случае избытка пластификатора (варианты 15, 18, 21) возникают проблемы с формованием пленки, т.к. удаление влаги недостаточно, и раствор биоразлагаемой защечной пленки не переходит в лекарственную форму для подавления бактериальных инфекций.

Пример 2

Определение адгезивных свойств лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций проводили с использованием реологического метода (Киржанова, Е.А. Методы анализа мукоадгезии: от фундаментальных исследований к практическому применению в разработке лекарственных форм / Е.А. Киржанова, В.В. Хуторянский, Н.Г. Балабушевич, А.В. Харенко, Н.Б. Демина // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2014. - №. 8 (3). - С. 66) на ротационном вискозиметре Smart L. В 10 мл фосфатного забуференного физиологического раствора растворяли муцин с получением 5% раствора. Отдельно готовили 5% раствор муцина, содержащий хитозан массой 10,0 мг. Отдельно готовили 5% раствор муцина, содержащий глицерин массой 10,5 мг. Отдельно готовили 5% раствор муцина, содержащий коллаген массой 10,0 мг. Отдельно готовили 5% раствор муцина, содержащий гидроксипропил-β-циклодекстрин массой 2,0 мг. Отдельно готовили 5% раствор муцина, содержащий комплекс грамицидина С и гидроксипропил-β-циклодекстрина. Отдельно готовили 5% раствор муцина, содержащий все компоненты лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций. Измеряли вязкость полученных растворов при 37°С и скорости вращения шпинделя L4 30 об/мин, а затем определяли вязкость мукоадгезии для лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций, используя уравнение 1:

для пленки - используя уравнение 2:

где η_{комплекса} - комплекса грамицидина С и гидроксипропил-β-циклодекстрина;

η_муцина - вязкость 5% раствора муцина;

- вязкость раствора гидроксипропил-β-циклодекстрина;

- вязкость раствора грамицидина С;

η_{хитозана} - вязкость раствора хитозана;

η_{коллагена} - вязкость рэствора коллагена;

η_{глицерина} - вязкость раствора глицерина;

η_пленки - вязкость раствора пленки;

η_{мукоадгезии} - вязкость мукоадгезии, которая обусловлена мукоадгезивным взаимодействием муцина и испытуемого образца, или сила мукоадгезии.

В результате были получены следующие данные:

Из полученных результатов можно наблюдать общее увеличение адгезии пленки к компоненте слизистой, что позволит использовать препараты грамицидина С более адресно, создавая депо действующего вещества.

Пример 3

Высвобождение грамицидина С исследовали в среде, моделирующей среду полости рта, приготовленной в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи Российской федерации XIV издания:

• Фосфатный забуференный физиологический раствор рН 7,4

В коническую колбу помещали образцы лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций массой 700 мг, добавляли 80 мл сред для высвобождения. Плотно закрытую колбу помещали в суховоздушный лабораторный термостат и проводили процесс высвобождения при температуре в 37°С и перемешивании 100 об/мин в течение 12 ч. Через заданные промежутки времени отбирали пробы среды высвобождения в объеме 1,5 мл. Отобранный объем компенсировали свежим раствором с заданным значением рН и продолжали процесс. Отобранный образец высушивали под вакуумом при температуре 40°С и экстрагировали спиртом этиловым с применением ультразвука, определяя количество высвободившегося грамицидина С с применением метода ВЭЖХ.

Процент высвобожденного грамицидина С (R) определяли по формуле 3:

D_t - концентрация грамицидина С в растворе в момент времени (мг/мл);

D_max - максимально возможное количество грамицидина С в растворе (мг/мл).

Результат имеет пролонгированный характер.

Пример 4

Для определения рН водного раствора лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций 0,5 г перетертых пленок помещали в коническую колбу вместимостью 50 мл, добавляли 25 мл воды, нагревали на водяной бане до растворения, охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через бумажный фильтр "синяя лента" с последующим измерением рН фильтрата.

В результате было установлено, что рН раствора лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций имеет значение 6,8-7,2, что максимально близко к значению рН слюны. Таким образом, пленка будет оказывать минимальное раздражающее действие на слизистую ввиду создания оптимальной среды в месте высвобождения грамицидина С.

Пример 5

Дополнительное подтверждение снижения уровня побочных эффектов заключается в снижении уровня гемолиза грамицидина С в отношении эритроцитов человека.

Исследование проводили в соответствии с общепринятыми процедурами (Di Martino, A. Folic acid-chitosan-alginate nanocomplexes for multiple delivery of chemotherapeutic agents / A. Di Martino, M. E. Trusova, P. S. Postnikov, V. Sedlarik // Journal of Drug Delivery Science and Technology. - 2018. - №47. - C. 67-76) с использованием образца свежеотобранной крови в количестве 3 мл. На первом этапе проводили промывку крови путем добавления отобранного образца к 14 мл фосфатного буфера с рН 5,7 и перемешивания методом встряхивания на орбитальном шейкере, после чего центрифугировали полученную суспензию в течение 10 минут при 500 g и температуре 4°С, используя многофункциональную центрифугу. Удаляли супернатант и повторяли указанную последовательность операций 4 раза, после чего готовили концентрированный раствор крови с концентрацией 2% посредством отбора 0,2 мл крови со дна виалы и добавления ее к 9,8 мл фосфатного буфера с рН 5,7. Отдельно готовили испытуемые водные растворы грамицидина С и лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций методом серийных разведений, получая значения концентрации действующего вещества в растворе 500 мкг/мл, 250 мкг/мл, 125 мкг/мл, 62,5 мкг/мл, 31,25 мкг/мл, 15,625 мкг/мл. Для получения водного раствора грамицидина С применяли обработку ультразвуком исходной суспензии с концентрацией 500 мкг/мл. Концентрацию грамицидина С дигидрохлорида в испытуемых растворах подтверждали результатами количественного анализа методом ВЭЖХ. Для определения уровня гемолиза добавляли 50 мкл 2% раствора крови к 100 мкл испытуемых растворов в разных концентрациях и инкубировали в течение 30 минут при 37°С в термостате, после чего образцы центрифугировали при 2500 g в течение 6 минут, отбирали 0,1 мл супернатанта и разбавляли раствором фосфатного буфера с рН 5,7 для проведения анализа. Анализировали полученные пробы на УФ-спектрофотометре, оценивая поглощение образцов при длине волны 541 нм и сравнивая сигнал с уровнем лизиса. В качестве положительного контроля (уровня лизиса) использовали раствор, полученный по следующей методике: 2% раствора крови объемом 50 мкл добавляли к 100 мкл дистиллированной воды, подвергая полученный образец трем циклам замораживания-оттаивания при -20°С.

Где а - значения для лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций, б - значения для грамицидина С.

Из данных примера 6 видно, что T₅₀ для эритроцитов человека в присутствии грамицидина С в составе лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций повышается до уровня 24-26 мкг/мл с 11 мкг/мл, что значительно снижает риск гемолиза при применении лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций.

Преимущества заявляемого технического решения заключаются в следующем:

- Сниженный уровень грамицидин-индуцированного гемолиза эритроцитов человека;

- Возможность локального применения грамицидина С на очаг местной инфекции полости рта, повышенная биодоступность;

- Отсутствие необходимости извлечения лекарственной формы, так как происходит полное ее разложения в полости рта в процессе лечения.

Группа изобретений относится к области фармацевтики, а именно к лекарственным формам, расширяющим арсенал лекарственных средств на основе фармацевтической субстанции, содержащей грамицидин С, которые могут быть использованы для подавления бактериальных инфекций в очаге местного воспаления полости рта человека. Предложена лекарственная форма для подавления бактериальных инфекций, выполненная на основе фармацевтической субстанции, включающей грамицидин С, хитозан и гидроксипропил-β-циклодекстрин, которая дополнительно содержит пленкообразователь в виде коллагена и пластификатор. При этом лекарственная форма выполнена в виде биоразлагаемой защечной пленки толщиной 33-37 мкм, с рН водного извлечения 6,8-7,2, показателем T₅₀ грамицидина С в отношении эритроцитов человека 24-26 мкг/мл, обладающей возможностью пролонгированного высвобождения грамицидина С. Предложен также способ получения указанной лекарственной формы, предусматривающий поддерживание скорости удаления влаги на уровне 0,5%/мин в процессе формирования пленки. Изобретение обеспечивает повышение эффективности терапии инфекционно-воспалительных заболеваний полости рта за счет локального воздействия на очаг инфекции, полученное лекарственное средство полностью растворяется в полости рта и обладает сниженным уровнем гемолиза грамицидина С в отношении эритроцитов человека. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 5 пр.

1. Лекарственная форма для подавления бактериальных инфекций, выполненная на основе фармацевтической субстанции, включающей грамицидин С, хитозан и гидроксипропил-β-циклодекстрин, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит пленкообразователь в виде коллагена и пластификатор, при этом выполнена в виде биоразлагаемой защечной пленки толщиной 33-37 мкм, с рН водного извлечения 6,8-7,2, показателем T₅₀ грамицидина С в отношении эритроцитов человека 24-26 мкг/мл и обладающей возможностью пролонгированного высвобождения грамицидина С.

2. Лекарственная форма по п. 1, отличающаяся тем, что соотношение компонентов в биоразлагаемой защечной пленке составляет в мас.%:

Грамицидин С 2-4 Хитозан 30-24 Коллаген 10-15 Гидроксипропил-β-циклодекстрин 28-32 Пластификатор 30-25

3. Лекарственная форма по п. 2, отличающаяся тем, что грамицидин С представляет собой основание грамицидина С, грамицидина С дигидрохлорид.

4. Лекарственная форма по п. 2, отличающаяся тем, что пластификатор представляет собой глицерин, пропиленгликоль, поливиниловый спирт.

5. Лекарственная форма по п. 1, отличающаяся тем, что биоразлагаемая защечная пленка представляет собой тонкие пластинки, которые находятся в твердом или желированном состоянии.

6. Способ организации лекарственной формы для подавления бактериальных инфекций, включающий использование фармацевтической субстанции, содержащей грамицидин С, хитозан и гидроксипропил-β-циклодекстрин, отличающийся тем, что дополнительно используют пленкообразователь в виде коллагена и пластификатор; осуществляют процесс формирования пленки, поддерживая скорость удаления влаги на уровне 0,5%/мин, с получением биоразлагаемой защечной пленки толщиной 33-37 мкм, с рН водного извлечения 6,8-7,2, показателем Т₅₀ грамицидина С в отношении эритроцитов человека 24-26 мкг/мл и обладающей возможностью пролонгированного высвобождения грамицидина С.

7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что выбирают соотношение компонентов в биоразлагаемой защечной пленке в мас.%:

Грамицидин С 2-4 Хитозан 30-24 Коллаген 10-15 Гидроксипропил-β-циклодекстрин 28-32 Пластификатор 30-25

8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что в качестве грамицидина С выбирают основание грамицидина С, грамицидина С дигидрохлорид.

9. Способ по п. 7, отличающийся тем, что в качестве пластификатора выбирают глицерин, пропиленгликоль, поливиниловый спирт.

10. Способ по п. 6, отличающийся тем, что биоразлагаемую защечную пленку выполняют представляющей собой тонкие пластинки, которые находятся в твердом или желированном состоянии.