Способ подготовки препарата коленного сустава крысы для гистологических исследований Российский патент 2024 года по МПК A61B10/00 G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, точнее к экспериментальной травматологии и ортопедии, и может быть использовано для гистологического исследования коленного сустава крысы.

Известен способ получения гистологических препаратов, включающий фиксацию костной ткани 10%-ным раствором формалина с промывкой водой, обезжиривание спиртом и декальцинацию в растворе кислоты с последующим приготовлением срезов на микротоме и их окрашиванием.

Недостатком известного способа является отсутствие возможности фиксации препарата коленного сустава крысы в гистологической кассете в положении максимального разгибания, что делает затруднительным выполнение фронтальных срезов препарата коленного сустава крысы на одном уровне относительно центральных наиболее нагружаемых участков сустава.

Техническим результатом изобретения является получение высококачественных гистологических препаратов коленного сустава крысы.

Технический результат достигается за счет фиксации коленного сустава в положении максимального разгибания, с возможностью коррекции положения парафинового блока и выполнения срезов препарата во фронтальной плоскости.

Надёжная и удобная фиксация препарата коленного сустава крысы в положении максимального разгибания возможна при достаточной длине костных фрагментов бедренной и большеберцовой костей: 20 мм с каждой стороны от суставной щели коленного сустава крысы; в целом максимальные размеры препарата коленного сустава крысы составляют 40х8х10 мм (длина, ширина, высота).

Стандартные гистологические кассеты для помещения в них образцов тканей и подготовки парафиновых блоков размерами 40х28х6 мм, а также мега-кассеты размерами 40х28х13 мм не позволяют зафиксировать препарат коленного сустава крысы в положении максимального разгибания. Необходима гистологическая кассета для фиксации препарата коленного сустав крысы в положении разгибания, отличная от имеющихся.

Перед забором препарата коленного сустава крысы с помощью 3-D принтера из полиэтилентерефталатгликоля изготавливают гистологические кассеты с 3-мя стенками - двумя боковыми и одной нижней, толщиной 2 мм каждая, с размерами в поперечном сечении 12х10 мм, длиной 50 мм, все стенки кассеты представляют собой сетку с шириной границы ячеек 1 мм с ячейкой 1х5 мм. В нижней стенке имеется отверстие 6х8 мм для надколенника и окружающих мягких тканей, что обеспечивает позиционирование препарата и уменьшает риск его разворота (фиг. 1).

После эвтаназии крысы проводят выделение и забор препарата коленного сустава путём иссечения мягких тканей, включая кожу, окружающие мышцы и фасции, кости перепиливаются с помощью бор-машинки костной фрезой.

На заднюю поверхность препарата коленного сустава наносится маркировочный краситель, препарат помещают в кассету, надколенник при этом центруется в отверстии средней стенки кассеты, через отверстия сетки боковой стенки кассеты пропускается нейлоновый хомут на 15 мм выше проекции суставной щели коленного сустава над препаратом и затягивается, затем аналогично пропускается второй хомут на 15 мм ниже проекции суставной щели, оба хомута затягиваются с таким расчётом, чтобы не повреждать препарат и надёжно фиксировать его, концы срезаются (фиг. 3). Таким образом сустав фиксирован в положении максимального разгибания.

Препарат помещается в 10% нейтральный забуференный раствор формалина  для фиксации тканей. После фиксации кассета удаляется, осуществляется декальцинация раствором на основе этилендиаминтетраацетата и проводка тканей препарата.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Гистологическая кассета, вид сверху.

Фиг. 2. Гистологическая кассета, вид сбоку.

Фиг. 3. Внешний вид фиксированного препарата коленного сустава крысы.

Для оптимального позиционирования при выполнении исследования коленного сустава крысы следует соблюдать условия:

- сустав должен быть максимально разогнут, чтобы при фронтальных срезах в плоскость среза попадала как большеберцовая, так и бедренная кости одновременно. Отметим, что посмертное свободное положение коленного сустава крысы обычно является среднефизиологическим в положении небольшого сгибания за счёт равномерного натяжения мягких тканей с передней и задней сторон сустава;

- начинать работу с готовым препаратом, то есть выполнение срезов парафинового блока, следует начинать с задних отделов сустава, так как при этом наилучшим ориентиром параллельности выполняемых срезов фронтальной плоскости служат равные по площади и форме участки медиального и латерального надмыщелков бедренной кости;

- в начале работы с парафиновым блоком возможна коррекция положения парафинового блока за счёт разворота столика объектодержателя по часовой или против часовой стрелки на 15 градусов от фронтальной плоскости. Это становится возможным за счет максимального разгибания коленного сустава.

При заливке в парафин препарат коленного сустава фиксируется в кассете размерами 40х28х6 мм с таким расчётом, чтобы задняя поверхность препарата коленного сустава была на поверхности среза. Начальные срезы сопровождаются появлением маркировочного красителя, что подтверждает правильность позиционирования препарата. После серии срезов макро- и микроскопически оценивают параллельность среза фронтальной плоскости путём оценки формы среза медиального и латерального надмыщелков бедренной кости, которые должны быть соразмерны. Продолжают выполнять срезы на глубину не менее 2 мм до появления как бедренной, так и большеберцовой костей в наиболее нагружаемой зоне, то есть до области середины надмыщелков бедренной кости. Далее следуют фиксация и окрашивание среза красителями.

Группа изобретений относится к экспериментальной медицине. Способ подготовки препарата коленного сустава крысы для гистологических исследований включает выделение и забор препарата коленного сустава, помещение препарата в гистологическую кассету, размещение в 10% нейтральном забуференном растворе формалина, удаление гистологической кассеты, декальцинацию препарата коленного сустава раствором на основе этилендиаминтетраацетата и проводку тканей препарата коленного сустава. Надколенник центруют в отверстии средней части нижней стенки гистологической кассеты. Коленный сустав фиксируют в состоянии максимального разгибания с применением двух хомутов, которые пропускают через отверстия боковой стенки кассеты. Один из них затягивают на 15 мм выше проекции суставной щели коленного сустава, а второй на 15 мм ниже. Срезы препарата коленного сустава выполняют во фронтальной плоскости сустава. Раскрыта гистологическая кассета для подготовки препарата коленного сустава крысы. Техническим результатом изобретения является получение качественных гистологических препаратов. 2 н.п. ф-лы, 3 ил.

1. Способ подготовки препарата коленного сустава крысы для гистологических исследований, включающий выделение и забор препарата коленного сустава, помещение препарата в гистологическую кассету, размещение в 10% нейтральном забуференном растворе формалина, удаление гистологической кассеты, декальцинацию препарата коленного сустава раствором на основе этилендиаминтетраацетата и проводку тканей препарата коленного сустава, надколенник центруют в отверстии средней части нижней стенки гистологической кассеты, коленный сустав фиксируют в состоянии максимального разгибания с применением двух хомутов, которые пропускают через отверстия боковой стенки кассеты, при этом один из них затягивают на 15 мм выше проекции суставной щели коленного сустава, а второй на 15 мм ниже, а срезы препарата коленного сустава выполняют во фронтальной плоскости сустава.

2. Гистологическая кассета для подготовки препарата коленного сустава крысы, имеющая длину 50 мм и размеры поперечного сечения 12×10 мм, содержащая две боковые и одну нижнюю стенки, имеющие толщину 2 мм каждая и представляющие собой сетку с ячейками размером 1×5 мм и шириной границы между ячейками 1 мм, при этом в средней части нижней стенки выполнено отверстие размером 6×8 мм для фиксации надколенника и окружающих мягких тканей препарата коленного сустава, а в боковых стенках выполнены отверстия для крепления хомутов.