Препарат для профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и способ его применения Российский патент 2024 года по МПК A61K36/07 A61P1/00 A61P11/00 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к препаратам и способам профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят.

Известны препараты и способы профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней телят пробиотическими препаратами, обладающими способностью не только нормализовать микрофлору желудочно-кишечного тракта, но и обладающих иммуностимулирующей активностью. Пробиотики служат для профилактики стрессов, увеличения сохранности молодняка и профилактики нарушений пищеварения. Они являются хорошей альтернативой ветеринарным и кормовым антибиотикам (Сверчкова Н., Коломиец Э. Пробиотические препараты для ветеринарии и кормопроизводства//Наука и инновации. - 2016, №5, с. 1-59, Похиленко В.Д., Перелыгин В.В. Пробиотики на основе спорообразующих бактерий и их безопасность//Химическая и биологическая безопасность. - 2007,.№2, с. 20-41.).

Известно использование в медицине и ветеринарии препаратов, обладающих антимикробным и иммуностимулирующим действием и получаемых на основе грибов - ксилотрофов рода Trametes (Чхенкели В.А. Эколого-биологическое обоснование использования препарата траметин в ветеринарной практике: монография / В.А. Чхенкели, А.Е. Калинович, Н.А. Шкиль. - Москва: Перо, 2015.-126; Чхенкели В.А., Романова Е.Д., Власов Б.Я. Профилактика негативного воздействия экологических факторов на организм молодняка сельскохозяйственных животных и птицы с использованием ветеринарного препарата Траметин: монография. - LAP Lambert Academic Publshing RU, Mauritius 2020. - 121c; Чхенкели В.А. Препараты последнего поколения на основе грибов-ксилотрофов рода Trametes: обнаруженные эффекты, механизмы действия и применение: монография / Чхенкели В.А. // - Москва: Перо, 2014; Чхенкели В.А., Уланская А.В. Сальмонеллез как биологический фактор в экотехсистеме и его профилактика с использованием ветеринарного препарата " Траметин". Иркутск: Изд-во ИГУ. 2022. - 107 с).

Однако при культивирования грибов -ксилотрофов для стимулирования процессов биосинтеза биологически активных веществ необходимы ингредиенты, влияющие на их рост и биосинтетическую активность.

Имеются единичные работы по изучению влияния растительных масел на культурально-морфологические особенности базидиомицетов, на биосинтез ими биологически активных соединений (Бабицкая В.Г., Щерба В.В., Пучкова Т.А., Смирнов Д.А., Бисько Н.А., Поединок Н.Л. Влияние условий глубинного культивирования лекарственного гриба Ganoderma lucidum (Рейши) на образование полисахаридов // Биотехнология, 2007, №6 - С. 34-41), что оказывает стимулирующее действие на рост и развитие гриба - продуцента и способствует активизации его природной метаболической активности.

Наиболее близким решением, принятым за прототип, является способ лечения желудочно-кишечных болезней телят с использованием препарата Траметин, представляющего собой стерильную культуральную жидкость, полученную путем культивирования гриба Trametes pubescens (штамм 0663) на стандартных плотной и жидкой питательных средах, причем культуральную жидкость получают путем культивирования гриба Trametes pubescens (штамм 0663) на стандартных плотной среде и жидкой питательной среде с дополнительно включенными в нее цинка сернокислого и натрия селенисто-кислого, с последующей лиофилизацией. Препарат вносят в молоко в дозе 180-300 мг на 1 кг живой массы животного 1 раз в сутки в течение 4-5 дней (Патент на изобретение №2545986 // Бюл. ФИПС №10 от 10.04.2015).

Однако, данный препарат использовали в основном для лечения желудочно-кишечных болезней молодняка крупного рогатого скота и нет данных о его применении для профилактики и лечения при ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезнях телят.

Также данный препарат не содержит в своем составе свободных жирных кислот, которые улучшают его профилактические и лечебные свойства.

Задачей изобретения является расширение арсенала препаратов и способов профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и способов их применения.

Заявляемому препарату присвоили рабочее название Траметин Плюс.

Сущность изобретения заключается в том, что препарат для профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят, представляющий собой стерильную культуральную жидкость, полученную путем культивирования гриба Trametes pubescens (штамм 0663) на питательной среде следующего состава, г/л: калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,88; калий хлористокислый - 0,94; магний сернистокислый - 0,94; сахароза - 40,00; целлюлоза микрокристаллическая - 12,50; пептон ферментативный - 12,50; натрий селенистокислый - 0,003; цинк сернокислый - 1,0, глицерин - 5,0.

Сущность изобретения заключается также в том, что в способе профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят, включающий внесение в молоко для выпаивания препарата, представляющий собой стерильную культуральную жидкость, полученную путем культивирования гриба Trametes pubescens (штамм 0663) на питательной среде следующего состава, г/л: калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,88; калий хлористокислый - 0,94; магний сернистокислый - 0,94; сахароза - 40,00; целлюлоза микрокристаллическая - 12,50; пептон ферментативный - 12,50; натрий селенистокислый - 0,003; цинк сернокислый - 1,0; глицерин - 5,0, для профилактики в дозе 0,3 - 0,6 мл на 1 кг живой массы животного 8-10 дней, 1 раз в сутки.

Получение препарата для профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят

Начальным этапом получения препарата является поддержание продуцента, т.е. культуры гриба Trametes pubescens (штамма 0663), на твердой питательной среде - на сусло-агаре. Посевной материал выращивают на питательной среде, в которую предварительно добавляют микрокристаллическую целлюлозу, активирующую природную метаболическую активность продуцента. Далее выращивают посевной материал на жидкой питательной среде. Для посевного материала и ферментации используется среда следующего состава (г/л):

Калий фосфорнокислый однозамещенный 1,88 Калий хлористокислый 0,94 Магний сернистокислый 0,94 Сахароза 40,00 Целлюлоза микрокристаллическая 12,50 Пептон ферментативный 12,50 Натрий селенистокислый 0,003 Цинк сернокислый 1,0 Глицерин 5,0

рН 6,0±0,2

Глицерин вносили в питательную среду в количестве 5 г/л.

Посевной материал выращивается в колбах Эрленмейера в шейкере -инкубаторе при 220 об./мин. при температуре 28-30°С в течение 4 суток. Посевной материал вносится в ферментационную среду в количестве 5-10% по объему.

Ферментация осуществляется в течение 4-5 суток при 220 об./мин. и температуре 28-30°С.

Таким образом, изменение рецептуры при культивировании продуцента, а именно, внесение в питательную среду для ферментации продуцента дополнительного компонента глицерина оказывает стимулирующее действие на рост и развитие гриба - продуцента, способствует активизации природной метаболической активности продуцента. Внесение глицерина приводит к повышению антимикробной, антиоксидантной, иммуноностимулирующей и противовирусной активности посредством повышения содержания жирных кислот. Качественный и количественный состав жирных кислот препарата Траметин Плюс заявляемого препарата представлен в таблице 1.

Ранее при исследовании химического состава препарата Траметин с использованием тех же методов (метод газовой хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием экстрактов) такого разнообразия жирных кислот не было обнаружено (Чхенкели, В.А., Малова Т.Н., Калинович А.Е. Изучение состава замещенных ароматических соединений ветеринарных препаратов нового поколения // Актуальные вопросы аграрной науки. - 2013. - Вып. 7. - С 37-41 (http://agronauka.igsha.ru); Чхенкели В.А, Калинович А.Е., Шкиль Н.А. Эколого-биологическое обоснование использования препарата траметин в ветеринарной практике: монография. - М. Перо, 2014. - 126 с).

Затем культуральную жидкость отделяли от биомассы культурального мицелия центрифугированием в течение 10 мин при 6000 об./мин, автоклавировали при 0,8 атм в течение 30 мин.

Для определения антимикробной активности препарата (Траметина - прототипа) заявляемого препарата Траметин Плюс использовали референтные штаммы микроорганизмов (S. aureus АТСС 26923; Ps. aeruginosa АТСС 27853; В. cereus АТСС 11778; E.coli АТСС 1176; E.coli АТСС 25922), полученные из ФБГУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича) Минсоцразвития России. Результаты представлены в таблице 2.

Установлено, что все препараты обладают антимикробной активностью в различной степени. Показано, что бактерицидная активность заявляемого препарата выше в отношении всех патогенных штаммов.

Таким образом, изменение рецептуры при культивировании продуцента способствует повышению содержание жирных кислот (антиоксидантов) -в препарате приводит к повышению его антимикробной активности.

Заявляемый препарат (Траметин Плюс) представляет собой стерильную культуральную жидкость, получаемую путем глубинного культивирования Trametes pubescens (штамма 0663). Траметин Плюс представляет собой жидкость желтоватого цвета с легким осадком. Препарат малотоксичен при введении в желудок и область брюшины лабораторным животным - белым мышам и крысам. ЛД₅₀ составляет 7900 мг/кг. Местно-раздражающее и аллергическое действие препарата выражено слабо. Содержание в нем солей тяжелых металлов находится на уровне следовых количеств. Остаточных количеств ядохимикатов, микотоксинов и нитрозоаминов не содержится.

Содержание отдельных микроэлементов в прототипе (Траметин) и в заявляемом препарате(Траметин Плюс) представлено в таблице 3.

Таким образом, молодняк крупного рогатого скота при выращивании и откорме при использовании препарата Траметин Плюс получает суточную норму микроэлементов - цинка и селена.

Примеры осуществления способа.

Пример 1.

Для определения профилактических доз препарата Траметин Плюс в хозяйстве, неблагополучном по желудочно-кишечным и респираторным заболеваниям телят (инфекционный ринотрахеит, вирусная диарея, парагриппа-3) было подобрано 64 клинически здоровых теленка в возрасте от 1 до 10 дней, черно-пестрой породы, которых распределили на 8 групп по 8 голов (табл.4).

За оптимальный способ введения испытуемого препарата Траметин Плюс был принят только пероральный, так как внутримышечный и подкожный способы являются неприемлемыми вследствие сильной реактогенности препарата, раздражительности, болезненной реакции на месте введения.

Первые 6 групп - опытные, 7 группа - контроль с применением препарата-прототипа, 8-я группа - контрольная (без препаратов). Телятам 6 опытных групп испытуемый препарат Траметин Плюс давали один раз в сутки в следующих дозах - 0,1, 0,2, 0,3, 045, 0,6, 0,8 мл на 1 кг живой массы животных. Препарат вносили в молоко перед выпойкой. Телята 7 группы получали препарат Траметин (прототип) в дозе 220 мг на 1 кг живой массы (согласно наставлению по его применению), который вносили в молоко перед выпойкой. За телятами вели клиническое наблюдение в течение 8-10 дней, определяли биохимические, морфологические показатели крови, учитывали состояние здоровья и сохранность, прирост живой массы определяли в течение 3 месяцев, фагоцитарную активность препарата и бактерицидную активность крови телят (табл. 5-8).

Полученные результаты исследований показали, что применение препарата позволяет снизить количество лейкоцитов, увеличить количество эритроцитов и гемоглобина в сыворотке крови телят, повысить фагоцитарную и бактерицидную активность. Применение препарата позволяет значительно увеличить привесы молодняка крупного рогатого скота.

Проведенные исследования показали, что для профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят препарат Траметин Плюс наиболее целесообразно использовать в дозах 0,3-0,6 мл на 1 кг живой массы.

Эффективность профилактического применения Траметин Плюс составила от 87,5 до 100,0%.

При использовании препарата Траметин Плюс в дозе от 0,3 до 0,6 мл/кг один раз в день в течение 8-10 дней живой массы сохранность составила 100%.

В таблицах 5-8 приведены результаты биохимических, гематологических исследований крови телят всех групп, а также динамики роста массы телят, фагоцитарную активность препарата и бактерицидную активность крови телят, что подтверждает профилактическую эффективность предлагаемого препарата.

Таким образом, оптимальными профилактическими дозами препарата Траметин Плюс были приняты дозы 0,3-0,6 мл на 1 кг живой массы животного.

Более высокие дозы (>0,6 на 1 кг живой массы) использовать нецелесообразно, а менее низкие (<0,2 мл на 1 кг живой массы) могут быть недостаточно эффективными.

Пример 1.

Научно-производственные опыты по применению препарата с профилактической целью были проведены в трех хозяйствах Иркутской области по согласованию со Службой ветеринарии Иркутской области - на МТК «Вельское» СХ ПАО Белореченское (Усольский район), ФГУП Опытная станция «Элита» РАН (Эхирит-Булагатский район), ООО "Луговое» (Иркутский район) на 240 телятах. Данные исследований по клиническому состоянию животных приведены в таблицах 9-12.

Препарат вводили по описанной выше методике перорально с молоком в дозах 0,1-0,8 мл на 1 кг живой массы телят. Препарат вводили один раз в сутки в течение 8-10 дней.

Профилактическая эффективность метода подтверждена проведенными исследованиями и составила 95,6%. Наилучшие показатели профилактической эффективности были также получены при использовании препарата Траметин Плюс в дозах от 0,3 до 0,6 мл на 1 кг массы животного.

Таким образом, на основании проведенных опытов были получены положительные результаты, свидетельствующие о высокой профилактической эффективности препарата при данном способе его применения.

Использование предлагаемого препарата Траметин Плюс и способа профилактики и лечения ассоциированных инфекционных болезней молодняка крупного рогатого скота позволяет повысить сохранность животных в крупных животноводческих хозяйствах и расширить арсенал препаратов, применяемых для профилактики ассоциированных вирусных и бактериальных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят.

Группа изобретений относится к ветеринарии, а именно к препарату и способу профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят. Препарат для профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят представляет собой стерильную культуральную жидкость, полученную путем культивирования гриба Trametes pubescens (штамм 0663) на питательной среде следующего состава, г/л: калий фосфорнокислый однозамещенный - 1,88; калий хлористокислый - 0,94; магний сернистокислый - 0,94; сахароза - 40,00; целлюлоза микрокристаллическая - 12,50; пептон ферментативный - 12,50; натрий селенистокислый - 0,003; цинк сернокислый - 1,0; глицерин - 5,0. Предложен также способ профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят, включающий внесение указанного препарата в молоко для выпаивания в дозе 0.3-0,6 мл на 1 кг живой массы животного,1 раз в сутки в течение 8-10 дней.

Внесение в питательную среду для ферментации продуцента дополнительного компонента глицерина оказывает стимулирующее действие на рост и развитие гриба-продуцента, способствует активизации природной метаболической активности продуцента, приводит к повышению антимикробной, антиоксидантной, иммуноностимулирующей и противовирусной активности посредством повышения содержания жирных кислот. Способ профилактики позволяет повысить сохранность животных в крупных животноводческих хозяйствах и увеличить привесы молодняка крупного рогатого скота. 2 н.п. ф-лы, 12 табл., 2 пр.

1. Препарат для профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят, представляющий собой стерильную культуральную жидкость, полученную путем культивирования гриба Trametes pubescens (штамм 0663) на питательной среде следующего состава, г/л: калий фосфорнокислый однозамещенный 1,88; калий хлористокислый 0,94; магний сернистокислый 0,94; сахароза 40,00; целлюлоза микрокристаллическая 12,50; пептон ферментативный 12,50; натрий селенистокислый 0,003; цинк сернокислый 1,0; глицерин 5,0.

2. Способ профилактики ассоциированных желудочно-кишечных и респираторных болезней телят, включающий внесение в молоко для выпаивания препарата по п. 1 в дозе 0.3-0,6 мл на 1 кг живой массы животного 8-10 дней, 1 раз в сутки.