СПОСОБ СОЗДАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ КАРЦИНОМЫ ЛЬЮИСА В УСЛОВИЯХ ГИПЕРТИРЕОЗА Российский патент 2024 года по МПК A61B17/00 G09B23/28 A61K38/22 A61K33/14 A61K9/08 A61K35/13 A61P43/00 

Изобретение относится к онкологии, а именно к экспериментальной онкологии, и может быть использовано для изучения в эксперименте влияния гипертиреоза на развитие злокачественной опухоли у животных.

Гипертиреоз - это характерное клиническое состояние, вызванное чрезмерной концентрацией гормонов щитовидной железы (THs), в тканях (см. Zhang, M., Jiang, W., Lu, G., Wang, R., Lv, Z., & Li, D. (2022). Insight into Mouse Models of Hyperthyroidism. Frontiers in endocrinology, 13, 929750. https://doi.org/10.3389/fendo.2022.929750).

Общими клиническими проявлениями гипертиреоза являются сердцебиение, тремор, непереносимость жары, потливость, полидипсия и потеря веса, вызванная гиперметаболизмом (см. Leo S, Lee SY, Braverman LE. Hyperthyroidism. Lancet (2016) 388(10047): 906–18. doi: 10.1016/S0140-6736(16)00278-6).

У пациентов с длительно нелеченым гипертиреозом может даже развиться фибрилляция предсердий или сердечная недостаточность (см. Klein I, Danzi S. Thyroid Disease and the Heart. Circulation (2007) 116(15):1725–35. doi: 10.1161/CIRCULATIONAHA.106.678326).

Женщины болеют чаще, и в общей популяции 1,7–11,7 % женщин и 1,2–7,6 % мужчин страдают субклиническим или явным гипертиреозом (см. Cooper D. S. Hyperthyroidism. Lancet 362(9382), 459–468 (2003). doi: 10.1016/S0140-6736(03)14073-1; K. Meisinger, T. Ittermann, H. Wallaschofsky, M. Heyer, H. Below, A. Kramer, A. Doring, M. Nauck, H. Woltzke, Geographical variations in the incidence of thyroid disease and antibodies to thyroid peroxidase in people without former thyroid disease in Germany. Euro. J. Endocrinol. 167(3), 363–371 (2012). doi: 10.1530/EJE-12-0111).

Таким образом, изучение патогенеза гипертиреоза и поиск эффективного лечения имеют большое значение.

THS известны своей ролью в метаболизме, росте и развитии. Из-за критической роли гормонов щитовидной железы в пролиферации и дифференцировке клеток некоторые исследования рассматривают гипертиреоз как потенциальный и предотвратимый фактор риска развития рака (см. Yuan S, Kar S, Vithayathil M, Carter P, Mason AM, Burgess S, et al.. Causal associations of thyroid function and dysfunction with overall, breast and thyroid cancer: a two-sample mendelian randomization study. Int J Cancer (2020) 147(7):1895–903. doi: 10.1002/ijc.32988; см. Petranovic Ovcaricek P, Verburg FA, Hoffmann M, Iakovou I, Mihailovic J, Vrachimis A, et al. Higher thyroid hormone levels and cancer. Eur J Nucl Med Mol Imag. (2021) 48(3):808–21. doi: 10.1007/s00259-020-05018-z; Xu, F., & Chen, Z. (2023). Causal associations of hyperthyroidism with prostate cancer, colon cancer, and leukemia: a Mendelian randomization study. Frontiers in endocrinology, 14, 1162224. https://doi.org/10.3389/fendo.2023.1162224).

THS специфически воздействуют на мембранные и ядерные рецепторы, приводя к активации различных канцерогенных путей, тем самым активируя рост клеток, ингибируя апоптоз и стимулируя ангиогенез.

Например, T3 может активировать канцерогенный путь фосфатидилинозитол-3 киназы (PI3K) через рецептор гормона щитовидной железы (TRs), что приводит к транскрипции целевого гена и сверхэкспрессии α-субъединицы (см. Moeller LC, Dumitrescu AM, Walker RL, Meltzer PS, Refetoff S. Thyroid hormone responsive genes in cultured human fibroblasts. J Clin Endocrinol Metab (2005) 90(2):936–43. doi: 10.1210/jc.2004-1768) α фактора-1а (HIF-1 α), индуцируемого гипоксией. Эта среда, адаптированная к гипоксии и ангиогенезу, и имеет решающее значение для роста опухолевых клеток, инвазии и метастазирования (см. Semenza GL. Defining the role of hypoxia-inducible factor 1 in cancer biology and therapeutics. Oncogene (2009) 29(5):625–34. doi: 10.1038/onc.2009.441).

Кроме того, аналогичные результаты были получены в некоторых обсервационных исследованиях. Например, проспективное когортное исследование, включающее более 10000 участников показало, что более высокие уровни свободного Т4 (FT4) были связаны с общим более высоким риском развития солидного рака (скорректированный ОР 1,42) (см. Khan SR, Chaker L, Ruiter R, Aerts JG, Hofman A, Dehghan A, et al. Thyroid function and cancer risk: the Rotterdam study. J Clin Endocrinol Metab (2016) 101(12):5030–6. doi: 10.1210/jc.2016-2104).

Было проведено крупное проспективное исследование с целью изучения связи между гипертиреозом и раком. Обнаружено, что гипертиреоз был связан с повышенным риском развития рака (скорректированный ОР 1,20) (см. Hellevik AI, Asvold BO, Bjoro T, Romundstad PR, Nilsen TI, Vatten LJ. Thyroid function and cancer risk: a prospective population study. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev (2009) 18(2):570–4. doi: 10.1158/1055-9965.EPI-08-0911), а риск развития рака положительно коррелировал с продолжительностью гипертиреоза.

Однако существенным ограничением имеющихся данных является то, что результаты обсервационных исследований подвержены остаточным искажениям и обратной причинно-следственной связи; это затрудняет причинно-следственный вывод о взаимосвязи между гипертиреозом и риском развития рака.

Рандомизация по Менделю (MR) постепенно используется в эпидемиологии в последние годы для установления причинно-следственной связи между воздействием и исходами заболевания. В исследовании (Xu, F., & Chen, Z. (2023). Causal associations of hyperthyroidism with prostate cancer, colon cancer, and leukemia: a Mendelian randomization study. Frontiers in endocrinology, 14, 1162224. https://doi.org/10.3389/fendo.2023.1162224) был проведен двухвыборочный MR -анализ с использованием инструментальных переменных крупномасштабных GWAS для оценки причинно-следственной связи между гипертиреозом и девятью типами рака.

Авторы обнаружили отрицательную причинно-следственную связь между гипертиреозом и раком предстательной железы. Одновременно гипертиреоз был связан с увеличением заболеваемости раком толстой кишки и лейкемией. Результаты MR-анализа с двумя выборками показали, что гипертиреоз не связан с риском развития рака легких, молочной железы, головного мозга, кожи, мочевого пузыря и пищевода.

Предыдущие исследования связи между гипертиреозом и раком толстой кишки дали противоречивые результаты. В одном из рассмотренных исследований была проанализирована связь между дисфункцией щитовидной железы и рисками развития рака, что выявило повышенный риск развития рака щитовидной железы, молочной железы и предстательной железы у лиц с гипертиреозом.

Это открытие позволяет предположить, что избыточное количество гормонов щитовидной железы может стимулировать пролиферацию раковых клеток в определенных тканях (см. Tran TV, Kitahara CM, de Vathaire F, Boutron-Ruault MC, Journy N. Thyroid dysfunction and cancer incidence: a systematic review and meta-analysis. Endocrine-related Cancer (2020) 27(4):245–59. doi: 10.1530/ERC-19-0417).

Исследование «случай-контроль», проведенное (см. Boursi B, Haynes K, Mamtani R, Yang YX. Thyroid dysfunction, thyroid hormone replacement and colorectal cancer risk. J Natl Cancer Inst. (2015) 107(6):djv084. doi: 10.1093/jnci/djv084), установило, что гипертиреоз был связан со скромным повышением риска развития рака толстой кишки (скорректированный OR = 1,21).

Однако также был выявлен аналогичный риск при нелеченном гипотиреозе (скорректированный OR = 1,16) (18). В другом популяционном исследовании «случай-контроль» обнаружена отрицательная причинно-следственная связь между гипертиреозом и раком толстой кишки (скорректированный OR 0,74) (см. L'Heureux A, Wieland DR, Weng CH, Chen YH, Lin CH, Lin TH, et al. Association between thyroid disorders and colorectal cancer risk in adult patients in Taiwan. JAMA Netw Open (2019) 2(5):e193755. doi: 10.1001/jamanetworkopen.2019.3755). Основной причиной расхождения между приведенными выше результатами может быть неоднородность исследуемой популяции.

Исследование населения, проживающего по месту жительства, основанное на исследовании Busselton Health Survey, показало, что более высокий уровень FT4 был связан с повышенным риском развития рака предстательной железы (см. Chan YX, Knuiman MW, Divitini ML, Brown SJ, Walsh J, Yeap BB. Lower TSH and higher free thyroxine predict incidence of prostate but not breast, colorectal or lung cancer. Eur J Endocrinol. (2017)177(4):297–308. doi: 10.1530/EJE-17-0197).

Аналогичное проспективное исследование выявило снижение риска развития рака предстательной железы у мужчин с гипотиреоидным состоянием (см. Mondul AM, Weinstein SJ, Bosworth T, Remaley AT, Virtamo J, Albanes D. Circulating thyroxine, thyroid-stimulating hormone, and hypothyroid status and the risk of prostate cancer. PloS One (2012) 7(10):e47730. doi: 10.1371/journal.pone.0047730).

Напротив, также были предложены некоторые гипотезы, о защитном эффекте гормона щитовидной железы при раке (см. Aranda A, Martinez-Iglesias O, Ruiz-Llorente L, Garcia-Carpizo V, Zambrano A. Thyroid receptor: roles in cancer. Trends Endocrinol Metab (2009) 20(7):318–24. doi: 10.1016/j.tem.2009.03.011).

Сообщалось, что различные опухоли, такие как рак легких и молочной железы, ассоциируются с мутациями в области инактивации гормональных рецепторов, тем самым препятствуя проникновению рецепторов дикого типа в целевой ген и вызывая гипотиреоз.

Возможным объяснением различий в результатах ассоциации между гипертиреозом и раком предстательной железы может быть остаточная смешивающая или обратная причинно-следственная связь в наблюдательных ретроспективных исследованиях или недостаточная эффективность МР-исследования из-за относительно низкого числа случаев рака предстательной железы.

В будущем необходимо провести более тщательное проспективное рандомизированное контролируемое исследование, чтобы предоставить более качественные доказательства для подтверждения этих результатов.

В клинических исследованиях также было показано, что гипертиреоз коррелирует с распространенностью рака различных типов, включая рак печени, щитовидной железы, головного мозга, молочной железы, легких и колоректальный рак (см. Rostkowska O, Spychalski P, Dobrzycka M, Wilczynski M, Lachinski AJ, Obolonczyk L et al. Effects of thyroid hormone imbalance on colorectal cancer carcinogenesis and risk - a systematic review. Endokrynol Pol. 2019;70(2):190–7. doi: 10.5603/EP.a2019.0007.; см. Tran TV, Kitahara CM, de Vathaire F, Boutron-Ruault MC, Journy N. Thyroid dysfunction and cancer incidence: a systematic review and meta-analysis. Endocr Relat Cancer. 2020;27(4):245–59. doi: 10.1530/ERC-19-0417).

Однако в исследовании (см. Wang, X., Liu, X., Li, Y., Tang, M., Meng, X., Chai, Y., Zhang, L., & Zhang, H. (2023). The causal relationship between thyroid function, autoimune thyroid dysfunction and lung cancer: a mendelian randomization study. BMC pulmonary medicine, 23(1), 338. https://doi.org/10.1186/s12890-023-02588-0) по Менделю такой связи между гипертиреозом и раком легких обнаружено не было. Причина может заключаться в том, что клиническим исследованиям мешает множество мешающих факторов.

Вопрос о том, может ли гипертиреоз напрямую способствовать возникновению рака легких, нуждается в дальнейшем изучении. Кроме того, исследования с использованием непрерывного воздействия (ТТГ и FT4) считаются необходимыми.

ТТГ, который является чувствительным маркером, может отражать как субклинический гипотиреоз, так и субклинический гипертиреоз (см. Fan H, Liu Z, Zhang X, Wu S, Shi T, Zhang P et al. Thyroid stimulating hormone levels are Associated with genetically predicted nonalcoholic fatty liver disease. J Clin Endocrinol Metab. 2022;107(9):2522–9. doi: 10.1210/clinem/dgac393).

Появляется все больше доказательств того, что гормоны щитовидной железы играют важную роль в регуляции клеточных процессов в различных тканях и органах, включая те, которые имеют отношение к развитию и прогрессированию рака.

Было показано, что механизмы, лежащие в основе воздействия гормонов щитовидной железы на раковые клетки, многогранны и сложны, включая как ядерные рецепторы гормонов, так и рецепторы клеточной поверхности (см. Gauthier BR, Sola-García A, Cáliz-Molina M, Lorenzo PI, Cobo-Vuilleumier N, Capilla-González V et al. Thyroid hormones in diabetes, cancer, and aging. Aging Cell (2020) 19(11):e13260. doi: 10.1111/acel.13260).

Исследования показали, что воздействие гормонов щитовидной железы на опухолевые клетки происходит через ядерные рецепторы гормонов и рецепторы клеточной поверхности на интегрин avβ3. При раке молочной железы, головного мозга, печени, щитовидной железы и толстой кишки гормоны щитовидной железы активируют внутриклеточные сигнальные пути, которые способствуют прогрессированию рака.

Более того, локальные уровни гормонов щитовидной железы регулировались посредством активации и деактивации йодтирониндейодиназ в различных органах, что влияет на прогрессирование и развитие рака (см. Lin HY, Chin YT, Yang YC, Lai HY, Wang-Peng J, Liu LF, et al. Thyroid hormone, cancer, and apoptosis. Compr Physiol (2016) 6(3):1221–37. doi: 10.1002/cphy.c150035).

Кроме того, недавние исследования также выявили купроптоз, медьзависимый механизм регулируемой клеточной гибели, как потенциально новую стратегию лечения рака. Было обнаружено, что сигнатура lncRNA, связанная с купроптозом, связана с прогностическими факторами аденокарциномы желудка (STAD), что указывает на ее потенциал в качестве биомаркера для стратификации риска, оценки возможной иммунотерапии и оценки чувствительности к лечению STAD (см. Tsvetkov P, Coy S, Petrova B, Dreishpoon M, Verma A, Abdusamad M et al. Copper induces cell death by targeting lipoylated TCA cycle proteins. Sci (New York NY) (2022) 375(6586):1254–61. doi: 10.1126/science.abf0529; см. Tu H, Zhang Q, Xue L, Bao J. Cuproptosis-related lncRNA gene signature establishes a prognostic model of gastric adenocarcinoma and evaluate the effect of antineoplastic drugs. Genes (2022) 13(12). doi: 10.3390/genes13122214). Хотя гормоны щитовидной железы играют важную роль в процессах, связанных с возникновением и прогрессированием рака, их механизмы сложны и многогранны. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы лучше понять эти механизмы и разработать целевые вмешательства, основанные на функциональных модуляторах гормонов щитовидной железы. Результаты этих исследований могут послужить руководством для разработки потенциальных терапевтических стратегий для лиц, подверженных риску дисфункции щитовидной железы и рака.

Важной составной частью изучения природы злокачественных опухолей и поиска методов воздействия на них является создание экспериментальных моделей злокачественного роста.

Особый интерес имеют модели доказывающие, что коморбидная патология играет важную роль в развитии злокачественных опухолей. Так, «Способ модификации хронической болью злокачественного роста меланомы В16 у мышей» (см. Патент на изобретение RU № 2650587 С1, опубл. 16.04.2018, Бюл. № 11), «Способ стимуляции хронической болью злокачественного роста в легких крыс» (см. см. Патент на изобретение RU № 2676641 С1, опубл. 09.01.2019, Бюл. № 1) и «Способ отмены генетически детерминированного ингибирования роста злокачественной опухоли в эксперименте» (см. Патент на изобретение № 2718671 С1, опубл. 13.04.2020, Бюл. № 11) показали, что нейрогенная хроническая боль является фактором, стимулирующим рост и развитие злокачественных опухолей различного гистогенеза и даже отменяет замедление роста меланомы у животных, нокаутированных по гену урокиназы, что предполагает замедление ее развития.

Еще одним важным коморбидным заболеванием для развития рака является первичный иммунодефицит. Созданные экспериментальные модели роста злокачественных опухолей на фоне первичного иммунодефицита показали особенности развития неоплазмы в зависимости от гистологического строение двух разных опухолей (см. Патент на изобретение RU № 2750127 C1, опубл. 22.06.2021, Бюл. № 18; см. Пат. RU № 2751930 C1, опубл. 20.07.2021, Бюл. № 20).

Различные мышиные модели используются для исследования гипертиреоза (см. Eckstein A, Philipp S, Goertz G, Banga JP, Berchner-Pfannschmidt U. Lessons From Mouse Models of Graves' Disease. Endocrine (2020) 68(2):265–70. doi: 10.1007/s12020-020-02311-7; см. Zhang, M., Jiang, W., Lu, G., Wang, R., Lv, Z., & Li, D. (2022). Insight into Mouse Models of Hyperthyroidism. Frontiers in endocrinology, 13, 929750. https://doi.org/10.3389/fendo.2022.929750).

Исследователи применили подходы к иммунизации, такие как инъекции аденовируса или плазмиды, сопровождаемые рецептором тиреотропного гормона (TSHR), или химические методы, такие как добавки левотироксина. Неаутоиммунные формы гипертиреоза в основном вызываются добавками искусственного тироксина. Экзогенные добавки тироксина включали растворение левотироксина в питьевой воде и внутрибрюшинные инъекции (см. Sheng CX, Zhang CJ, Li YZ, Sun YM. Effect of β-Casomorphin-7 on Myocardial Hypertrophy in Hyperthyroidism-Induced Cardiomyopathy. Eur Rev Med Pharmacol Sci (2020) 24(11):6380–9. doi: 10.26355/eurrev_202006_21536). Показано, что у мышей C57BL/6NTac, получавших внутрибрюшинную инъекцию 1 мкг/г массы тела левотироксина в течение 6 недель, наблюдался гипертиреоз (см. Engels K, Rakov H, Zwanziger D, Hönes GS, Rehders M, Brix K, et al. Efficacy of Protocols for Induction of Chronic Hyperthyroidism in Male and Female Mice. Endocrine (2016) 54(1):47–54. doi: 10.1007/s12020-016-1020-8). Примечательно, что внутрибрюшинные инъекции левотироксина не следует делать с интервалом более 48 часов. В противном случае может возникнуть транзиторный гипотиреоз, который может быть связан с ингибированием гипофизарно-тиреоидной оси, вызванным инъекцией левотироксина мышам (см. Engels K, Rakov H, Zwanziger D, Hönes GS, Rehders M, Brix K et al. Efficacy of Protocols for Induction of Chronic Hyperthyroidism in Male and Female Mice. Endocrine (2016) 54(1):47–54. doi: 10.1007/s12020-016-1020-8). Тем не менее, гипертиреоз, вызванный приемом экзогенных добавок тироксина, является временным, а не постоянным, и его нельзя отделить от непрерывного приема гормонов щитовидной железы.

Протоколы индукции гипертиреоза у мышей сильно различаются и в основном включают краткосрочное лечение гормонами щитовидной железы.

Кроме того, данных о самках мышей до сих пор не хватает, и мало известно о зависимом от пола молекулярном действии тиреоидных гормонов у мышей. В этом контексте Эндокринное общество недавно подчеркнуло, что пол является важной переменной, которую необходимо учитывать, как в фундаментальной науке, так и в клинических исследованиях (см. Hammes S.R. Editorial: Sex matters in preclinical research. Mol. Endocrinol. 28(8), 1209–1210 (2014). doi: 10.1210/me.2014-1209).

Техническим результатом настоящего изобретения является создание экспериментальной модели роста карциномы легких Льюис на фоне гипертиреоза у мышей для изучения влияния этой патологии на развитие злокачественной опухоли у животных обоего пола.

Технический результат достигается тем, что самкам и самцам мышей C57BL/6 в течение пяти дней вводят внутрибрюшинно препарат «Тиромель» 20 мкг/100 гр в 0,5 мл физиологического раствора с понедельника по пятницу 1 раз в день, затем по стандартной методике подкожно перевивают карциному Льюиса в дозе 2 млн клеток в 0,5 мл физиологического раствора.

Изобретение «Способ создания экспериментальной модели опухолевого роста в условиях гипертиреоза» является новым, так как оно неизвестно в области экспериментальных исследований в онкологии о росте карциномы Льюиса у мышей на фоне гипертиреоза.

Новизна изобретения заключается в создании экспериментальной модели развития злокачественного процесса на фоне гипертиреоза.

Изобретение «Способ создания экспериментальной модели опухолевого роста в условиях гипертиреоза» является промышленно применимым, так как может быть использовано в научно-исследовательских учреждениях онкологического профиля для воспроизведения экспериментальной модели роста злокачественных опухолей у животных с гипертиреозом, изучение особенностей ее роста и развития, поиска способов воздействия.

Для лучшего понимания сущности способа предлагаем фигуры.

Фиг. 1. Слева самец с карциномой Льюис на фоне гипертиреоза, справа самец с карциномой Льюис на фоне эутироза.

Фиг. 2. Слева самка с карциномой Льюис на фоне эутироза, справа самка с карциномой Льюис на фоне гипертиреоза.

Способ создания экспериментальной модели опухолевого роста в условиях гипертиреоза выполняется следующим образом.

Самкам (n=15) и самцам (n=15) мышей C57BL/6 препарат «Тиромель» (20 мкг/100 гр в 0,5 мл физ. раствора) вводили ежедневно в/брюшинно, предварительно растворив в физиологическом растворе, 1 раз в день. Ежедневно определяли сывороточные уровни тиреоидных гормонов: Т3 и Т4, а также ТТГ. При получении стойкого гипертиреоза в течение 3-х дней, что соответствовало 5 дню введения, животным обоего пола по стандартной методике перевивали карциному Льюиса в дозе 2 млн клеток в 0,5 мл физиологического раствора.

Животные не отказывались от еды, при этом теряли в весе, зарегистрировано ухудшение внешнего вида кожи и волосяного покрова (см. фиг. 1, фиг. 2).

Гипертиреоз у животных подтверждают определением содержания в сыворотке крови тиреоидных гормонов радиоиммунным методом с помощью стандартных наборов (Immunotech, Чехия).

Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1

Уровень гормонов щитовидной железы в сыворотке крови у мышей обоего пола с карциномой лёгкого Льюис (LLC)

Животные ТТГ,
мМЕ/л Т4,
нмоль/л Т3,
нмоль/л САМКИ LLC 0,063±0,003 47,1±3,2 1,70±0,09 Тиромель + LLC 0,003±0,000* 58,9±4,1* 2,67±0,03* САМЦЫ LLC 0,090±0,001 42,5±2,5 1,4±0,07 Тиромель + LLC 0,053±0,005* 59,3±1,7* 2,83±0,03*

Примечание: * – значимые отличия по сравнению с эутиреоидными животными соответствующего пола р<0,05.

У самок мышей, получавших в течение препарат «Тиромель» установлено повышение в крови уровня общих форм Т4 в 1,3 раза (p<0,05) и Т3 в 1,6 раза (p<0,05), а также снижение ТТГ в 2,1 раза. У самцов мышей, получавших препарат «Тиромель», установлено повышение уровня общих форм Т4 в 1,4 раза (p<0,05) и Т3 в 2,0 раза, а также снижение ТТГ в 1,7 раза (p<0,05) (см. Таблица 1).

Для исследования влияния гипертиреоза на рост злокачественных опухолей группе животных обоего пола с подтвержденным гипертиреозом подкожно перевивали карциному легких Льюис в дозировке 2 млн клеток в 0,5 мл физиологического раствора. Для этого, соблюдая все условия асептики, ассистент фиксирует мышь спиной кверху, предварительно сбрив шерсть и обработав кожу 5% спиртовым раствором йода кожу спины ниже угла правой лопатки. Экспериментатор рукой в стерильной перчатке захватывает обработанную кожную складку, иглой шприца прокалывает кожу и вводит опухолевую взвесь. Затем извлекает иглу, и место введения плотно прижимает ватным тампоном, смоченным в 70% спирте с небольшим добавлением йода, на 1 минуту, чтобы исключить вытекание вводимой взвеси. Все манипуляции с животными производятся в боксе. Инструменты, посуду, руки дезинфицируют общепринятым способом.

Контролями служили мыши обоего пола с подкожной перевивкой карциномы Льюис в той же дозе и объёме, что и у животных из основных групп, но без предварительного воспроизведения модели гипертиреоза.

Особенности роста опухолей при стандартной перевивке карциномы Льюис и перевивке на фоне гипертиреоза у мышей обоего пола представлены в таблицу 2.

Таблица 2

Особенности роста карциномы лёгкого Льюис (LLC) у мышей обоего пола на фоне эутироза и гипертиреоза

самцы самки LLC Тиромель + LLC LLC Тиромель + LLC Выход опухолей на 4 сутки на 3 сутки У 6 из 8 У 12 из 12 У 7 из 8 У 11 из 12 Внешние некрозы на 13 сутки на 18 сутки - в виде кровавой корки сверху, площадь большая -в виде проплешин на опухолях (сбоку, где узкая часть) у 4 из 8 у 10 из 12 Форма опухолей округлая подковообразная округлая уплощённая Продолжитель-ность жизни мышей 34,875±0,48 27,727±0,195* 32,857±0,143 27,250±0,45* Метастазы в лёгких: единичные множественные умеренное количество множественные

Примечание. * – значимые отличия по сравнению с эутиреоидными животными соответствующего пола р<0,05.

Как следует из результатов, представленных в таблице 1, у самок и самцов мышей с карциномой Льюис, растущей на фоне гипертиреоза, продолжительность жизни достоверно отличалась от показателей у мышей контрольной группы (рост карциномы Льюис на фоне эутироза) в 1,2 раза (p<0,05) и в 1,3 раза (p<0,05) соответственно.

Изучение динамики роста перевивной карциномы Льюис на фоне гипертиреоза у самцов и самок мышей представлено в таблице 3.

Таблица 3

Динамика объёма (см³) подкожных опухолевых узлов карциномы лёгкого Льюис (LLC) у мышей обоего пола на фоне эутироза и гипертиреоза

Сутки Самцы Самки LLC Тиромель + LLC LLC Тиромель + LLC 4 сутки Вышли у 6 из 8 Вышли у всех 0,211±0,076 0,150±0,054 5 сутки 0,0235±0,0075 0,095±0,051* 7 сутки 0,296±0,075 0,419±0,109* 0,163±0,0589 0,186±0,0253* 11 сутки 3,346±0,596 5,097±0,296* 0,309±0,0825 1,131±0.250* 14 сутки 4,597±0,656 6,26±0,30* 0,826±0,192 1,702±0,391* 18 сутки 4,97±0,51 6,51±0,5* 1,0498±0,253 2,255±0,359* 21 сутки 9,375±1,085 12,415±0,567* 2,58±1,096 5,689±0,603* 25 сутки 6,744±0,618 13,8793±0,417* 2,572±0,415 6,243±0,612* 28 сутки 9,504±1,676 15,873±0,335* 6,440±1,087 10,906±0,949* 32 сутки 11.476±0,538 9,228±0,714 33 сутки 9,332±1,704 35 сутки 9,914±0,573

Примечание * – значимые отличия по сравнению с эутиреоидными животными соответствующего пола р<0,05.

Очевидно, что на всех этапах роста карциномы Льюис на фоне гипертиреоза у животных обоего пола объем подкожных опухолевых узлов значимо превышал таковой при стандартной перевивке.

Технико-экономическая эффективность «Способа создания экспериментальной модели опухолевого роста в условиях гипертиреоза» заключается в том, что воспроизведение экспериментальной модели влияния гипертиреоза на развитие злокачественной опухоли – карциномы лёгкого Льюис у мышей обоего пола позволило установить увеличение злокачественного потенциала опухоли за счёт стимуляции ее роста и уменьшения продолжительности жизни животных. Это дает возможность изучать патогенез злокачественного роста на фоне коморбидной патологии, какой является гипертиреоз, что важно для онкологической клиники, а также проводить поиск адекватных воздействий на опухоль.

Способ экономичен, доступен.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии, эндокринологии. Самкам и самцам мышей С57Bl/6 вводят внутрибрюшинно препарат «Тиромель» 20 мкг/100 гр в 0,5 мл физиологического раствора 1 раз в день в течение 5 дней. Затем перевивают карциному Льюиса подкожно в дозе 2 млн клеток в 0,5 мл физиологического раствора. Способ позволяет изучать патогенез злокачественного роста на фоне коморбидной патологии, какой является гипертиреоз, что в свою очередь дает возможность проводить поиск адекватных воздействий на опухоль и изучать влияние гипертиреоза на развитие злокачественной опухоли. 3 табл., 2 ил., 1 пр.

Способ создания экспериментальной модели карциномы Льюиса в условиях гипертиреоза, характеризующийся тем, что самкам и самцам мышей C57BL/6 в течение пяти дней вводят внутрибрюшинно препарат «Тиромель» 20 мкг/100 гр в 0,5 мл физиологического раствора с понедельника по пятницу 1 раз в день, затем подкожно перевивают карциному Льюиса в дозе 2 млн клеток в 0,5 мл физиологического раствора.