Устройство для ручного отмывания эритроцитов и способ его применения Российский патент 2024 года по МПК A61J1/05 A61B5/15 A61M1/02 

Изобретение относится к медицинской технике, используемой в трансфузиологии, и предназначено для ручного отмывания от криопротектора размороженных криоконсервированных эритроцитов.

Основным требованием на всех этапах отмывания является сохранение стерильности эритроцитов. То есть уменьшение вероятности бактериальной контаминации эритроцитов, которая может возникнуть из-за контакта с внешней средой, обусловленной несовершенством конструкции устройств, в которых отмывают эритроциты, и методов их отмывания. Многоэтапная технология отмывания эритроцитов неизбежно связана с необходимостью последовательного присоединения/отсоединения контейнера с эритроцитами и контейнеров, содержащих гипертонический, отмывающие и консервирующий (взвешивающий) растворы. Для предотвращения риска нарушения стерильности при присоединении/отсоединении контейнеров, особенно в местах перфорации иглами мембран штуцеров контейнеров и местах сваривания трубок контейнеров, используют различные устройства и методы.

Известен аппарат Haemonetics АСР 215 [1] https://www.manualslib.com/products/Haemonetics-Acp-215-11414777.html, в котором отмывание эритроцитов проводят в автоматическом режиме, предохраняющим эритроциты от контакта с окружающей средой. Для этого расходная система аппарата содержит бактериальные фильтры и используется аппарат для стерильного соединения трубок TSCD-II. Эти аппараты и расходные материалы к ним произведены в США, дороги, не всегда доступны и отсутствуют на многих станциях переливания крови и больницах, имеющих отделения переливания крови. Ручной метод отмывания эритроцитов по-прежнему востребован и широко распространен.

Известно «Устройство для отмывания эритроцитов» [2] RU 118555 U1, 07.02.2012, у которого контейнер для отмывания имеет соединительные трубки с двумя двухканальными полимерными иглами. Прокалывание мембран штуцеров контейнеров с отмывающими растворами и конструктивные детали в виде двухканальных игл без защитных приспособлений от бактериальной контаминации представляют опасность для сохранения стерильности эритроцитов.

Известен «Контейнер для жидкостей, применяемых при криоконсервировании и отмывании эритроцитов» [3] RU 180533 U1, 21.03.2017. Контейнер содержит отводную полимерную трубку, к которой присоединяют трубки контейнеров с отмывочными растворами путем стерильного соединения трубок с использованием аппарата TSCD-II, который дорог и малодоступен.

Известен также наиболее близкий аналог (прототип) [4] «Контейнеры полимерные cтерильные для отмывания эритроцитов методом центрифугирования - «Синтез» по ТУ 9398-081-00480201-2006 (РУ ФСР 2011/12060)». Устройство состоит из двух контейнеров, соединенных трубками с зажимами, и разветвителей с несколькими полимерными иглами. Этими иглами после снятия защитных колпачков прокалывают мембраны штуцеров контейнеров с эритроцитами и отмывающими растворами. Соединение контейнеров проводят с несоблюдением трансфузиологического принципа «замкнутости» системы. Всякое прокалывание без дополнительной защиты от бактериальной контаминации несет риск нарушения стерильности.

Способ отмывания эритроцитов с использованием устройства-прототипа возможен только в асептических условиях при наличии «чистых» помещений, сохраняющих стерильность целевого продукта - отмытых и ресуспендированных эритроцитов.

Необходимо закрытое устройство, которое без асептических условий на всех этапах отмывания эритроцитов, может обеспечить стерильное выполнение следующих технологических операций. Перевод в устройство размороженных криоконсервированных эритроцитов и гипертонического раствора. Многократный перевод в устройство отмывающих растворов, центрифугирование и удаление супернатанта. Перевод в устройство консервирующего (ресуспендирующего) раствора. Пробоотбор для определения качества отмытых эритроцитов.

В связи с этим задачей изобретения является реализация многоэтапной технологии ручного отмывания эритроцитов в закрытом устройстве и способа его применения.

Технический результат состоит в обеспечении стерильности всех технологических операций отмывания и достижении нормируемых показателей качества отмытых эритроцитов в закрытом устройстве.

Поставленная задача решена и технический результат достигнут тем, что устройство для ручного отмывания размороженных криконсервированных эритроцитов содержит контейнер, с внутренней полостью которого сообщается трубка с зажимом, соединенная другим концом со входом первого разветвителя, имеющего три выхода. При этом с каждым выходом соединена трубка с зажимом. Первая трубка оканчивается одноканальной полимерной иглой со съемным колпачком. Колющая и верхняя части иглы закрыты несъемным герметизирующим колпачком с мембраной, прокалываемой при смещении колпачка совместно с мембраной штуцера контейнера с эритроцитами. Вторая трубка содержит обратный клапан, антибактериальный фильтр и второй разветвитель, имеющий два выхода, с одним из которых соединена трубка с зажимом, оканчивающаяся полимерной иглой со съемным колпачком, к другому выходу присоединена трубка с зажимом оканчивающаяся коннектором Луер-Лок. Третья трубка содержит обратный клапан и коннектор Луер-Лок. Кроме того, устройство имеет четыре отдельных пустых контейнера, каждый - с трубкой, снабженной зажимом, один конец которой сообщается с внутренней полостью контейнера, а другой оканчивается коннектором Луер-Лок.

Другие конкретизирующие и развивающие признаки и особенности конструкции устройства указаны в зависимых пунктах формулы изобретения.

В частности, технический результат получают за счет того, что контейнер для отмывания эритроцитов имеет вместимость не менее 1000 мл, форму прямоугольника, предпочтительно квадрата, а размер пор антибактериального фильтра не более 0,2 мкм.

Кроме того, одноканальная игла состоит из трех переходящих друг в друга коаксиальных цилиндров, колющая и верхняя части которой имеют диаметр меньше диаметра средней части, а нижняя часть - диаметр больше диаметра средней части. Наружный диаметр несъемного колпачка, герметизирующего колющую и верхнюю часть иглы, меньше диаметра средней части полимерной иглы. Причем несъемный колпачок выполнен из эластичного материала с возможностью смещения и упора в среднюю часть иглы, имеет форму полого цилиндра, мембрану дна которого прокалывает полимерная игла, на колющую часть которой надет колпачок.

Также все полимерные иглы и коннекторы Луер-Лок закрыты съемными колпачками.

Удобно, чтобы зажимы, сквозь которые проходит трубка, были выполнены в виде разноцветных зажимов-защелок, управляемых одной рукой.

Кроме того, вместимость каждого отдельного пустого контейнера для сбора и утилизации отработанного отмывочного раствора не менее 500 мл.

Контейнер для отмывания эритроцитов имеет объем не менее 1000 мл для того, чтобы в нем могли свободно разместиться одна донорская единица эритроцитов 300 мл, 100 мл гипертонического раствора и не менее 500 мл отмывочного раствора. Такой контейнер, заполненный суспензией эритроцитов в гипертоническом и отмывочном растворах, вместе с трубками, зажимами, коннекторами, обратными клапанами и другими элементами устройства, свободно размещается в сдвоенном стакане центрифуги. Контейнер квадратной формы, в отличие от прямоугольной, не выступает за габариты стакана центрифуги.

Объем контейнера для отмывания эритроцитов рассчитан на сопряжение с тремя стандартными контейнерами, содержащими одну дозу донорских эритроцитов (300 мл), гипертонический (100 мл) и отмывающий растворы (500 мл). Причем суммарный объем контейнера для отмывания эритроцитов превосходит суммарный объем упомянутых трех контейнеров. В связи с этим устройство остается закрытым, т.к. нет необходимости в удалении избытка растворов перед центрифугированием, связанное с размыканием устройства.

Установленный за разветвителем трубок на один вход и два выхода антибактериальный мембранный фильтр для жидкости с порами не более 0,2 мкм, позволяет стерильно вводить в устройство гипертонический, отмывочный и консервирующий растворы. Этот фильтр не пропускает бактерии и другие патогены, которые без фильтра могут проникать в устройство при соединении с контейнерами, содержащими названные растворы.

Полимерная одноканальная игла со съемным колпачком и дополнительно - с несъемным эластичным и тонкостенным колпачком, защищающим колющую часть илы от контаминации, позволяет стерильно присоединить ее к штуцеру контейнера с эритроцитами. Обычная полимерная игла имеет только один съемный колпачок. При удалении колпачка происходит неизбежная контаминация колющей части полимерной иглы, которая, прокалывая мембрану порта контейнера с эритроцитами, может нарушить стерильность. Полимерная игла, колющая часть которой герметично закрыта несъемный колпачком, обеспечивает стерильное присоединение. Колющая часть иглы не контактирует с воздухом и внутренней поверхностью порта контейнера. Мембрану дна цилиндрического несъемного колпачка и мембрану штуцера контейнера с эритроцитами прокалывают иглой в одной точке при соприкосновении мембран, не нарушая стерильности. Соотношение наружного диаметра несъемного колпачка, диаметров верхней, средней и нижней частей одноканальной иглы, приведенное в формуле изобретения, выбрано так, что при смещении несъемного колпачка игла без больших усилий проникает в порт и герметизирует его.

Зажим-защелку легко перемещать по трубке, проходящей сквозь нее, устанавливать в удобном месте, открывать и закрывать одной рукой. Причем зажим-защелка установлена между бактериальным фильтром и разветвителем для того, чтобы, закрыв ее, исключить подсасывание пузырьков воздуха из антибактериального фильтра. Пузырьки воздуха могут захватываться потоком эритроцитов при перетоке в контейнер для отмывания эритроцитов. Разный цвет зажимов-защелок, установленных на разных трубках, предотвращает возможное их перепутывания при совершении в определенной последовательности технологических операций: закрыть/открыть.

Обратный клапан, установленный между контейнером для отмывания эритроцитов и антибактериальным фильтром, предотвращает при центрифугировании обратный заброс растворов из контейнера для отмывания эритроцитов в пустой контейнер из-под отмывающего раствора, которые центрифугируют совместно. Другой обратный клапан, установленный между разветвителем трубок на один вход и три выхода и коннектором Луер-Лок, предотвращает обратный переток отмывочных растворов при их удалении из контейнера для эритроцитов и попадание в устройство воздуха из окружающей среды при размыкании коннекторов Луер-Лок. Такая конструкция сохраняет стерильность при удалении герметизирующего колпачка коннектора Луер-Лок, присоединении пустого контейнера для сбора отработанного отмывочного раствора и удалении его с отработанным отмывочным раствором.

Технический результат достигается также благодаря тому, что предложен способ применения устройства для ручного отмывания эритроцитов.

Способ применения устройства для ручного отмывания эритроцитов включает присоединение одноканальной полимерной иглы к контейнеру с размороженными криоконсервированными эритроцитами, перевод эритроцитов при помешивании в контейнер для отмывания эритроцитов, присоединение к коннектору Луер-Лок шприца и присоединение полимерной иглы к контейнеру с гипертоническим раствором.

Способ также включает отбор порций гипертонического раствора с помощью шприца и введение их в контейнер для отмывания эритроцитов; запаивание и отделение трубки с присоединенным шприцем; отсоединение контейнера из-под гипертонического раствора и установка на его место контейнера с отмывочным раствором.

Способ также предусматривает перевод отмывочного раствора в контейнер для отмывания эритроцитов; центрифугирование, соединение коннектора Луер-Лок трубки с обратным клапаном с коннектором Луер-Лок пустого контейнера и перевод в него супернатанта.

Кроме того, способ обеспечивает удаление заполненного супернатантом контейнера; повторение не менее трех раз описанного выше порядка отмывания эритроцитов с использованием каждый раз нового контейнера с отмывочным раствором и пустого контейнера.

Способ также включает отсоединение последнего контейнера из-под отмывочного раствора, установку на его место контейнера с консервирующим раствором, перевод консервирующего раствора в контейнер с отмытыми эритроцитами при помешивании;

Способ обеспечивает отделение контейнера с отмытыми и ресуспендированными в консервирующем растворе эритроцитами и передачу их для трансфузии реципиенту, а также пробоотбор для анализа качества отмытых эритроцитов.

Конкретизирующие и развивающие признаки способа применения устройства для ручного отмывания эритроцитов указаны в зависимых пунктах, относящихся к независимому пункту формулы изобретения, касающегося способа.

В частности, технический результат достигают за счет того, что отмывают одну донорскую дозу эритроцитов в объеме 300 +/- 20 мл, содержащуюся в контейнере вместимостью 500 мл. Также в способе в качестве гипертонического раствора используют 12% раствор натрия хлорида в объеме 60 мл +/- 10%, в качестве отмывающего раствора - изотонический 0,9% раствор натрия хлорида, в качестве консервирующего раствора - SAG-M объемом 300 мл. Причем для отмывания эритроцитов используют не менее четырех контейнеров с изотоническим 0,9% раствором натрия хлорида в объеме 500 мл.

Кроме того, согласно способу, гипертонический раствор в контейнер, содержащий размороженные криоконсервированные эритроциты, вводят равномерно в течение не менее двух минут тремя порциями по 20 мл.

Отмывающие растворы, из контейнеров их содержащих, перед центрифугированием переводят через антибактериальный фильтр в контейнер для отмывания эритроцитов путем перфорации полимерными иглами мембран штуцеров их контейнеров, закрытых отделяемым защитным элементом.

Кроме того, согласно способу, в процессе отмывания эритроцитов последовательно отделяют и удаляют супернатанты, содержащие гипертонический и изотонический растворы, используя центрифугирование при центробежном ускорении 1615 g в течение не менее 4 минут и плазмоэкстрактор.

С помощью плазмоэкстрактора каждый раз перемещают образующиеся супернатанты из контейнера для отмывания эритроцитов в присоединяемые пустые контейнеры.

Способ также обеспечивает перевод из контейнеров раствора криопротектора, отмывающих растворов и консервирующего раствора в контейнер для отмывания эритроцитов, используя силу тяжести гидростатического столба растворов в трубках и контейнерах, расположенных по высоте на расстоянии не более 100 см от контейнера для отмывания эритроцитов.

Экспериментально подтверждено (пример осуществления устройства и способа его применения представлен ниже), что приведенные в формуле изобретения объемы растворов, необходимы и достаточны для достижения заявленного технического результата.

Параметры введения гипертонического раствора в контейнер с отмываемыми эритроцитами при помешивании определены экспериментально с учетом удобства работы со стандартным шприцем 20 мл. В каждом из семи экспериментов гипертонический раствор вводили порциями по 20 мл со скоростью 10 мл/мин при общем объеме 60 мл. Параметры рассчитаны по максимально допустимой величине осмолярности для извлечения из эритроцитов криоконсерванта глицерола для объема отмываемых эритроцитов 300 мл. При бóльших скоростях введения гипертонического раствора было обнаружено превышение свободного гемоглобина в отмывающем растворе по сравнению с нормируемыми величинами.

Также в случае использования для отмывания эритроцитов менее четырех контейнеров по 500 мл с отмывающим раствором наблюдалось повышенное содержание свободного гемоглобина в суспензии отмытых эритроцитов.

Параметры центрифугирования эритроцитов, суспендированных в отмывающих растворах, определены из экспериментов. Задача состояла в образовании максимального объема супернатанта за время, сильно не удлиняющего этап центрифугирования, и нахождении максимально допустимой перегрузки, не нарушающей целостность присоединительных элементов и контейнера для отмывания эритроцитов. Исследовали три центробежных ускорения 2000, 1815 и 1615 g при центрифугировании семи экспериментальных устройств. Только при 1615 g все устройства сохраняли целостность. При бóльших центробежных ускорениях наблюдалась деформация элементов устройства и в некоторых случаях нарушение герметичности. Определенная величина центробежного ускорения коррелирует с таковой при отмывании эритроцитов в колоколе аппарата Haemonetics АСР 215 по методике Валери. Продолжительность центрифугирования свыше 4-х минут не приводила к увеличению объема супернатанта в контейнере для отмывания эритроцитов и лучшему их отмыванию.

Разность уровней расположения по высоте контейнера с эритроцитами и контейнера с отмывочным раствором на расстоянии 100 см друг от друга обусловлена двумя причинами и проверена в экспериментах. При разности уровней больше 100 см отмывочные растворы вливаются с большой скоростью в контейнер для отмывания эритроцитов и быстро суспендируют эритроциты, которые не успевают адаптироваться к резкому изменению осмолярности и рН окружающей среды; часть из них гемолизируется. Меньше 100 см - нежелательно удлиняется процесс отмывания эритроцитов в силу снижения скорости поступления растворов в контейнер для отмывания эритроцитов. При 100 см среднее время ресуспендирования эритроцитов составляло 15 +/- 5 минут.

Отрезок трубки длиной 40 см выбран для того, чтобы можно было сформировать 4-е пробы для анализа качества отмытых эритроцитов. В 10 см стандартной ПВХ-трубки с внутренним диаметром 3,0 мм содержится около 0,7 мл раствора, что достаточно для анализа.

Предпочтительные признаки изобретения описаны в зависимых пунктах формулы изобретения, а также следуют из приведенного ниже конкретного, но не ограничивающего примера выполнения устройства и осуществления способа его применения, со ссылками на фиг. 1-5.

Фиг.1. Схема устройства для ручного отмывания эритроцитов.

Устройство состоит из: разветвителей трубок 1 и 2, полимерных игл со съемными колпачками 3 и 4, коннекторов Луер-Лок FM со съемными герметизирующими колпачками 5 и 6, зажимов-защелок 7-12 и 21-24, антибактериального стерилизующего фильтра (0,2 мкм) 13, обратных клапанов 14 и 15, контейнера К (1000 мл) для отмывания эритроцитов 16, пустых контейнеров Ко (500 мл) 17-20, коннекторов Луер-Лок М со съемными герметизирующими колпачками 25-28. Все элементы устройства соединены ПВХ-трубками с применение сварных и клеевых технологий. a1-a5 - места запаивания и отделения трубок вместе с прилежащими частями устройства. A, B, С, D - соответственно линии размороженных криоконсервированных эритроцитов, гипертонического раствора и отмывочных растворов, шприца, для удаления отработанных отмывочных растворов. a - место термосоединения технологической трубки контейнера с эритроцитами с трубкой устройства для отмывания эритроцитов при наличии аппарата для стерильного соединения трубок. Малые стрелки на фиг. 1-5 указывают направление потоков растворов, большие - присоединяемые и отсоединяемые элементы устройства.

Фиг. 2. Схема присоединения к устройству контейнера Кэ с размороженными эритроцитами, контейнера Кг с гипертоническим раствором и шприца. Контейнер К расположен на весах-помешивателе.

Шприц (20 мл) 29, весы-помешиватели 30, лабораторный столик 31, стойка для трансфузий 32. Разность уровней контейнеров Кг и К - 100 см.

Фиг. 3. Схема последовательного присоединения к устройству четырех контейнеров Ки1-Ки4 с отмывочным изотоническим раствором и контейнера с консервирующим (ресуспендирующим) раствором.

Фиг. 4. Схема присоединения к устройству пустых контейнеров Ко и отсоединения этих контейнеров, заполненных отработанным отмывочным раствором. Плазмоэкстрактор - 33.

В отделенном от устройства контейнере К содержатся отмытые и ресуспендированные эритроциты, готовые к трансфузии; в контейнере Ко и в запаянном для анализа отрезке трубки а4-а5 - отработанный отмывочный раствор.

Фиг. 5. Схема одноканальной полимерной иглы 3 устройства и ее присоединения к контейнеру с эритроцитами.

Мембрана дна несъемного герметизирующего колпачка 34, колющая часть иглы 35, несъемный колпачок 36, верхняя часть иглы 37, средняя часть иглы 38, нижняя часть иглы 39, съемный колпачок 40, штуцер контейнера 41, мембрана герметизирующая штуцер 42.

Отделяемый элемент штуцера 41, защищающий от контаминации мембрану 42, удален.

Не упомянутые в описании фиг. 1-5 обозначения элементов устройства приведены в описании фиг.1.

Параметры и характеристики изготовленных в соответствии с предложенным техническим решением устройства для ручного отмывания размороженных криоконсервированных эритроцитов и способа его применения, а также показатели качества отмытых эритроцитов приведены ниже на представленных примерах.

Свежезамороженные эритроциты получены с СПК в количестве 10 доз объемом 280-300 мл в контейнерах вместимостью 500 мл.

Изготовили 10 устройств для отмывания эритроцитов с параметрами, приведенными в формуле изобретения.

Все элементы устройств выполнены из нетоксичных гемосовместимых, гипоаллергенных, апирогенных полимерных материалов. Устройства стерилизовали радиационным методом дозой 15-20 кГр.

Экспериментальное оборудование: весы-помешиватели «Б.Микс», рефрижераторная центрифуга Sorvall RC 3C plus, плазмоэкстрактор Jouan, аппарат для запаивания трубок Гекон-С, стойка трансфузионная ММ-101, размораживатель Barkey Plasmatherm.

Разморозили эритроциты по стандартной программе в размораживателе Barkey Plasmatherm.

Закрыли на устройстве все зажимы 7-12 (фиг. 2). Сняли колпачки с полимерных игл 3 и 4, присоединили иглы к штуцерам контейнеров соответственно Кэ с размороженными эритроцитами и Кг с гипертоническим раствором. Контейнеры подвесили на трансфузионной стойке 32. Сняли колпачок с коннектора Луер-Лок 5 и присоединили к нему шприц (20 мл) 29. Контейнер К для отмывания эритроцитов поместили на весы-помешиватель 30, расположенные на лабораторном столике 31 на расстоянии 100 см от точки подвески контейнеров Кэ и Кг. Включили весы-помешиватель. Открыли зажимы-защелки 7 и 12. Перевели самотеком размороженные эритроциты из контейнера Кэ в контейнер К. Запаяли и отделили от устройства в точке а1 трубку вместе с пустым контейнером Кэ.

Трижды повторили следующую операцию. Открыли зажимы 8 и 9. Набрали в шприц 20 мл гипертонический раствор. Закрыли зажим 8, открыли зажим 10, плавно и равномерно перевели 20 мл гипертонического раствора в контейнер К. Закрыли зажим 10, открыли зажим 8 и повторили, описанные выше манипуляции с зажимами и шприцем. По завершении запаяли и отделили трубку в точке а2 вместе со шприцем.

Заменили пустой или с остатками гипертонического раствора контейнер Кг на контейнер Ки1 с 500 мл отмывочного - 0,9% раствора натрия хлорида (фиг. 3). Перевели самотеком раствор в контейнер К. закрыли зажимы 8, 10 и 12. Сняли с трансфузионной стойки 32 устройство и равномерно разместили его в сдвоенном стакане центрифуги. Центрифугировали 4 мин при центробежном ускорении 1615 g.

Осторожно разместили контейнер К в плазмоэкстракторе 33 (фиг. 4). Пустой контейнер Ки1 подвесили на трансфузионной стойке 32. К коннектору Луер-Лок М устройства присоединили коннектор Луер-Лок FM одного из пустых контейнеров Ко. Открыли зажимы-защелки 12, 11 и 21. Перевели, используя плазмоэкстрактор 33, супернатант в контейнер Ко. Закрыли зажим-защелку 21. Разъединили соединение Луер-Лок М/FM. Закрыли колпачками коннекторы Луер-Лок М и Луер-Лок FM. Первый контейнер (17) Ко, заполненный отработанным отмывочным раствором, передали на утилизацию.

Заменили пустой контейнер Ки1 на полный контейнер Ки2. Повторили, описанные выше операции отмывания эритроцитов с контейнерами Ки2-Ки4 и пустыми контейнерами Ко (18-20). На завершающем этапе перевели консервирующий раствор из контейнера Кк в контейнер К и ресуспендировали в нем отмытые эритроциты. Запаяли и отделили в точке а3 трубку с контейнером Ки, передали контейнер для инфузии отмытых эритроцитов реципиенту. В точках а4, а5 запаяли и отделили трубку, заполненную отмывочным раствором для анализа. Разделив запаиванием на четыре части трубку, сформировали четыре пробы для анализа качества отмытых эритроцитов.

Анализы на стерильность провели согласно нормативному документу ОФС.1.2.4.0003.15, п.2.1, утвержденного Приказом МЗ России от 31.10.2018 № 749, методом мембранной фильтрации в асептических условиях в ламинарной установке. Из 4-х проб для анализа, отобранных в каждом из 10-и экспериментов, исследовали две. Итого 20 исследований. Каждую пробу фильтровали через дисковые фильтры Миллипор диаметром 13 мм с порами 0,45 мкм. После фильтрации фильтры перенесли в тиогликолевую среду и инкубировали в термостате при температуре 32,5 +/- 2,5°С в течение 14 суток.

По истечении указанного контрольного времени рост микроорганизмов во всех пробах не обнаружен, что свидетельствовало о достижении заявленного технического результата - обеспечении стерильности всех технологических операций отмывания эритроцитов в закрытом устройстве, изготовленным в соответствии с формулой изобретения, равно как и стерильности отмытых эритроцитов.

Показатели качества отмытых и ресуспендированных эритроцитов с использованием предложенного устройства и способа его применения определяли с помощью оборудования и аналитических методов, представленных ниже, в сравнении с нормативными требованиями документа, утвержденного ПП РФ от 22.06.2019 № 797, приложение 1, пункт 10 «Эритроцитная взвесь размороженная, отмытая».

Нормируемые показатели качества отмытых эритроцитов: объем (мл), гематокрит (%), гемоглобин в надосадочной жидкости (г), гемоглобин (г), осмолярность (мОсм/л).

Оборудование: весы-помешиватель «Б.Микс», гематокритная центрифуга CM-70 Skyline, гемоглобинометр «МиниГем 540», осмометр «Osmomat 030».

Методы исследования: взвешивание, центрифугирование в капиллярах, гемоглобинцианидный, мембранный.

Исследовали 20 проб, отобранных по 2 пробы из контейнеров с отмытыми и ресуспендированными эритроцитами 10-и изготовленных устройств.

Получены следующие экспериментальные средние значения показателей качества отмытых эритроцитов в сравнении с нормируемыми (приведены в скобках). Объем - 235 (≥ 185) мл. Гематокрит - 0,5 (0,37-0,7)%. Гемоглобин в надосадочной жидкости - 0,1 (≤ 0,2) г. Гемоглобин - 46 (≥ 36) г. Осмолярность - 14 (≤ 20) мОсм/л. Отклонение от средних значений показателей: +/- 15%.

Приведенные данные свидетельствуют об осуществлении заявленного технического результата при использовании предложенного устройства и способа его применения - достижении нормируемых показателей качества отмытых эритроцитов в закрытом устройстве.

Таким образом, вся многостадийная технология ручного отмывания размороженных криоконсервированных эритроцитов осуществлена в закрытом устройстве, не требовала по сравнению с устройствами-аналогами нескольких различных устройств для каждой стадии технологии, наличия асептических условий и «чистых» производственных помещений, сложных автоматических клеточных процессоров, аппаратов для многократного стерильного спаивания трубок и расходных материалов к ним. Обеспечена стерильность и достигнуты нормируемые показатели качества отмытых эритроцитов в закрытом устройстве.

Группа изобретений относится к медицинской технике. Устройство для ручного отмывания эритроцитов содержит контейнер для отмывания эритроцитов, выполненный из пленочного материала со штуцерами и трубками с присоединительными элементами, и по меньшей мере четыре пустых контейнера для отработанного отмывочного раствора. Внутренняя полость контейнера для отмывания эритроцитов соединена трубкой с зажимом с первым разветвителем, имеющим три выхода, с одним из которых соединена трубка с зажимом, оканчивающаяся одноканальной полимерной иглой, выполненной с возможностью подключения к контейнеру с размороженными криоконсервированными эритроцитами, колющая и верхняя части которой закрыты несъемным герметизирующим колпачком с прокалываемой при смещении колпачка мембраной. Со вторым выходом разветвителя соединена трубка с установленными на ней обратным клапаном, зажимом, антибактериальным фильтром и вторым разветвителем, имеющим два выхода, с одним выходом второго разветвителя соединена трубка с зажимом, оканчивающаяся полимерной иглой, выполненной с возможностью подключения к емкости с гипертоническим раствором и емкости с отмывочным раствором, а к другому выходу присоединена трубка с зажимом, оканчивающаяся коннектором Луер-Лок. Третий выход первого разветвителя соединен с трубкой с установленными на ней зажимом, обратным клапаном и коннектором Луер-Лок, а контейнеры для отработанного отмывочного раствора каждый снабжены трубкой с зажимом. Один конец трубки сообщен с внутренней полостью контейнера для отработанного отмывочного раствора, а другой оканчивается коннектором Луер-Лок для присоединения к коннектору Луер-Лок третьего выхода первого разветвителя. Раскрыт способ ручного отмывания эритроцитов с использованием устройства. Технический результат состоит в обеспечении стерильности всех технологических операций отмывания и достижении нормируемых показателей качества отмытых эритроцитов в закрытом устройстве. 2 н. и 20 з.п. ф-лы, 5 ил.

1. Устройство для ручного отмывания эритроцитов, содержащее контейнер для отмывания эритроцитов, выполненный из пленочного материала со штуцерами и трубками с присоединительными элементами, отличающееся тем, что дополнительно содержит по меньшей мере четыре пустых контейнера для отработанного отмывочного раствора, внутренняя полость контейнера для отмывания эритроцитов соединена трубкой с зажимом с первым разветвителем, имеющим три выхода, с одним из которых соединена трубка с зажимом, оканчивающаяся одноканальной полимерной иглой, выполненной с возможностью подключения к контейнеру с размороженными криоконсервированными эритроцитами, колющая и верхняя части которой закрыты несъемным герметизирующим колпачком с прокалываемой при смещении колпачка мембраной, со вторым выходом разветвителя соединена трубка с установленными на ней обратным клапаном, зажимом, антибактериальным фильтром и вторым разветвителем, имеющим два выхода, с одним выходом второго разветвителя соединена трубка с зажимом, оканчивающаяся полимерной иглой, выполненной с возможностью подключения к емкости с гипертоническим раствором и емкости с отмывочным раствором, а к другому выходу присоединена трубка с зажимом, оканчивающаяся коннектором Луер-Лок, при этом третий выход первого разветвителя соединен с трубкой с установленными на ней зажимом, обратным клапаном и коннектором Луер-Лок, а контейнеры для отработанного отмывочного раствора каждый снабжены трубкой с зажимом, при этом один конец трубки сообщен с внутренней полостью контейнера для отработанного отмывочного раствора, а другой оканчивается коннектором Луер-Лок для присоединения к коннектору Луер-Лок третьего выхода первого разветвителя.

2. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что вместимость контейнера для отмывания эритроцитов составляет не менее 1000 мл.

3. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что контейнер для отмывания эритроцитов имеет форму прямоугольника, предпочтительно квадрата.

4. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что размер пор антибактериального фильтра составляет не более 0,2 мкм.

5. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что зажимы выполнены в виде разноцветных зажимов-защелок, управляемых одной рукой.

6. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что одноканальная полимерная игла выполнена в виде трех переходящих друг в друга коаксиальных цилиндров, причем колющая и верхняя части иглы имеют диаметр меньше диаметра средней части, а диаметр нижней части больше диаметра средней части.

7. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что наружный диаметр несъемного герметизирующего колпачка меньше диаметра средней части одноканальной полимерной иглы.

8. Устройство по п. 7, отличающееся тем, что несъемный герметизирующий колпачок выполнен из эластичного материала.

9. Устройство по п. 7, отличающееся тем, что несъемный герметизирующий колпачок имеет форму полого цилиндра, а полимерная одноканальная игла выполнена с возможностью совместного прокалывания мембраны дна несъёмного герметизирующего колпачка и мембраны штуцера контейнера с эритроцитами при ее введении в контейнер.

10. Устройство по п. 7, отличающееся тем, что несъемный герметизирующий колпачок выполнен с возможностью смещения и упора в среднюю часть одноканальной полимерной иглы.

11. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что вместимость каждого отдельного пустого контейнера для отработанного отмывающего раствора составляет не менее 500 мл.

12. Устройство п. 1, отличающееся тем, что полимерные иглы и коннекторы Луер-лок закрыты съемными колпачками.

13. Способ ручного отмывания эритроцитов с использованием устройства для ручного отмывания эритроцитов по п. 1, включающий:

а) присоединение одноканальной полимерной иглы к контейнеру с размороженными криоконсервированными эритроцитами, перевод эритроцитов при помешивании в контейнер для отмывания эритроцитов, присоединение к коннектору Луер-Лок шприца, присоединение полимерной иглы к контейнеру для гипертонического раствора, отбор порций гипертонического раствора с помощью шприца и введение их в контейнер для отмывания эритроцитов, запаивание и отделение трубки с присоединенным шприцем,

б) отсоединение контейнера для гипертонического раствора и установка на его место контейнера с отмывочным раствором, перевод отмывочного раствора в контейнер для отмывания эритроцитов, центрифугирование, соединение коннектора Луер-Лок трубки с обратным клапаном с коннектором Луер-Лок контейнера для отработанного отмывочного раствора и перевод в него супернатанта, удаление заполненного супернатантом контейнера,

в) повторение по меньшей мере три раза действий по пункту б) с использованием каждый раз нового контейнера с отмывочным раствором,

г) установку на место контейнера с отмывочным раствором контейнера с консервирующим раствором, перевод консервирующего раствора в контейнер с отмытыми эритроцитами при помешивании, отделение контейнера с отмытыми и ресуспендированными в консервирующем растворе эритроцитами,

д) пробоотбор для анализа качества отмытых эритроцитов.

14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что контейнер с эритроцитами содержит одну донорскую единицу эритроцитов, равную 300 +/- 20 мл.

15. Способ по п. 13, отличающийся тем, что в качестве гипертонического раствора используют 12% раствор натрия хлорида.

16. Способ по п. 13, отличающийся тем, что три порции гипертонического раствора объемом приблизительно 20 мл поочередно набирают в шприц и каждую порцию равномерно, в течение не менее двух минут, переводят в контейнер для отмывания эритроцитов.

17. Способ по п. 13, отличающийся тем, что в качестве отмывочного раствора используют изотонический 0,9% раствор натрия хлорида в контейнере объемом не менее 500 мл.

18. Способ по п. 13, отличающийся тем, что в качестве консервирующего раствора используют раствор SAG-M в объеме 300 мл.

19. Способ по п. 13, отличающийся тем, что перевод отмывочных растворов из контейнеров их содержащих в контейнер для отмывания эритроцитов осуществляют под действием силы тяжести, причем контейнеры расположены по высоте на расстоянии не более 100 см друг от друга.

20. Способ по п. 13, отличающийся тем, что центрифугирование проводят при центробежном ускорении 1615 g в течение не менее 4 минут.

21. Способ по п. 13, отличающийся тем, что после центрифугирования супернатант отделяют от концентрированных эритроцитов и переводят в пустой контейнер с помощью плазмоэкстрактора.

22. Способ по п. 13, отличающийся тем, что пробоотбор осуществляют путем запаивания и отделения заполненного отработанным отмывочным раствором 40 см отрезка трубки для присоединения пустых контейнеров, делением заполненного отрезка запаиванием по меньшей мере на четыре части и отделением этих частей для анализа.