Способ заключения гистологических срезов в нелюминесцирующую прозрачную среду Российский патент 2025 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к области медицины и биологии и может быть использовано при изготовлении гистологических препаратов в лабораторных условиях. Известна наиболее часто применяемая для заключения гистологических препаратов прозрачная среда бальзам (канадский, пихтовый, сибирский кедровый), представляющая собой раствор смол хвойных деревьев в ксилоле (Микроскопическая техника руководство для врачей и лаборантов. Под ред. Д.С. Саркисова и Ю.Л. Перова. -Москва: «Медицина». - 1996. - С. 60.). Эта среда имеет ряд существенных технологических недостатков, а именно:

1) растворителем канадского бальзама является ксилол, поэтому для заключения препарата в канадский бальзам его следует провести через ряд спиртов восходящей крепости и ксилол для того, чтобы в срезах не оставалось следов спирта, который вызывает помутнение бальзама, даже если в препарате присутствует менее 1,6% остаточной воды - это сильно замедляет скорость гистологического исследования;

2) растворитель ксилол является токсичным и пожароопасным веществом является производственно вредным и токсичным для человека веществом (Паспорт безопасности ГОСТ 30333-2007 Ксилол (изомеры) ≥97%, для синтеза);

3) основным компонентом смол хвойных деревьев (бальзама) являются терпены, в силу своего химического строения способные к индуцированному ультрафиолетом свечению в видимой желто-зеленой области в широком диапазоне от 440 до 600 нм (Donaldson L., Williams N. Imaging and Spectroscopy of Natural Fluorophores in Pine Needles // Plants. 2018. 7, 10; 16 p.doi:10.3390/plants7010010; Desaulniers Brousseau V., Wu B-S., MacPherson S., Morello V., Lefsrud M. Cannabinoids and Terpenes: How Production of Photo-Protectants Can Be Manipulated to Enhance Cannabis sativa L. Phytochemistry // Front. Plant Sci. 2021. No 12. P. 620021. doi: 10.3389/fpls.2021.62002) - это исключает возможность люминесцентного исследования готовых гистологических препаратов, поскольку паразитная люминесценция бальзама скрывает естественную или вызванную люминесценцию гистологического препарата.

Известно применение в гистологии в качестве прозрачной среды для заключения гистологических срезов природной смеси арабиногалактанов (гуммиарабик). Арабиногалактаны, в том числе, имеющие происхождение из камедной акации, используются как флуоресцентные метки для выявления малых количеств искомых белков (Zhang М., Nilsson L., Lee S., Choi J. Modification of EDC method for increased labeling efficiency and characterization of low-content protein in gum acacia using asymmetrical flow field-flow fractionation coupled with multiple detectors // Anal. Bioanal. Chem. 2021. Vol. 413, no 25):6313-6320. doi: 10.1007/s00216-021-03587-y.). Поэтому при люминесцентной микроскопии гуммиарабик является источником вызванной флуоресценции в видимом диапазоне и скрадывает индуцированную люминесценцию или флуоресценцию исследуемых гистологических препаратов.

Известно использование в гистологии в качестве прозрачной среды желатина (Микроскопическая техника руководство для врачей и лаборантов. Под ред. Д.С.Саркисова и Ю.Л. Перова. - Москва: «Медицина». - 1996. - С. 38.). Желатин, как белок, содержащий циклические аминокислоты (фенилаланин, триптофан, гидроскипролин), также способен к широкополосной индуцированной люминесценции (Kasha М. On the Properties of Gelatin-Dye Phosphors and the Continuum Theory of Szent-Gyorgyi // Science. -1948. - Vol. 107, no 2787. - P. 566-567. doi: 10.1126/science.l07.2787.566-a.), по этой причине прозрачные среды на основе желатина не могут быть использованы в люминесцентной микроскопии.

Известен ряд нелюминесцирующие прозрачных сред для заключения гистологических препаратов на основе полистирола (Микроскопическая техника руководство для врачей и лаборантов. Под ред. Д.С. Саркисова и Ю.Л. Перова. - Москва: «Медицина». - 1996. - С. 40; Барштейн Р.С., Кириллович В.И., Носовский Ю.Е. Пластификаторы для полимеров. - М., - 1982, С.200; http://biooptics.narod.ni/documents/polystyrene_for_histology.html; http://invert.bio.msu.ru/images/Presentations/Gebruk_meth_lab_inv.pdf). Их общими недостатками являются:

- использование ксилола (или толуола) как растворителя, вследствие высокой летучести которого и таких компонентов как диметилфталат или другие пластификаторы (бутилфталат) существует необходимость частого добавления растворителя, что нарушает равновесие между концентрациями ксилола и пластификаторов;

- большое количество исходных материалов;

- длительное время приготовления рабочего раствора;

- пленка полистирола легко отделяется от предметного стекла;

- довольно высокая стоимость от 2500 до 3628 руб. за 1000 мл;

- не предусматривается использование покровного стекла, что снижает устойчивость препарата к внешним воздействиям, то есть страдает объективность морфологических изменений в срезе;

- необходимость хранения без доступа прямых солнечных лучей;

- нефро- и нейротоксичность;

- со временем полистирол становится хрупким, в пленке появляются трещины, что затрудняет микроскопическое исследование и совершенно неприемлемо для микросъемки (https://findpatent.ru/patent/249/2499988.htmn.

Известен состав для заключения гистологических препаратов включающий синтетическую смолу, растворитель и вспомогательный компонент.В качестве смолы берут пенополиуретан (ППУ), в качестве растворителя - ксилол и вспомогательного компонента - дибутилфталат при следующем соотношении ингредиентов, мас. %: пенополиуретан 15-20; ксилол 79-84; дибутилфталат 1,0 (Патент РФ RU 2499988 МПК G01N 1/28 (2006.01) Состав для заключения гистологических препаратов. Авторы Сентюрова Л.Г., Глушко A.M., Шерышева Ю.В. Патентообладатель(и): Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО АГМА Минздравсоцразвития России). Дата подачи заявки: 17.07.2012. Опубликовано: 27.11.2013 Бюл. №33.). Основные недостатки этого состава также связаны с наличием в смеси ксилола, комплекс недостатков которого описан выше. Полиуретан также быстро высыхает и растрескивается. Кроме того, полиуретан флуоресцирует на длине 420 нм (Allen N.S., Homer J., McKellar J.F. Origin and role of the luminescent species in the photo-oxidation of commercial polypropylene // Applied Polymer. 1977, Vol. 21, no 8. C. 2261-2267. https://doi.org/10.1002/app.1977.070210823) разрешения Королевского химического общества, Лондон), и поэтому его используют для создания флуоресцирующих красок для дорожных покрытий или творческих целей, добавляя в полиуретан дополнительные флуоресцирующие пигменты.

Силикатный клей на основе метасиликата натрия (жидкое стекло) не горюч и не выделяет токсичных веществ, продается в готовом для использования виде, при высыхании может быть доведен до нужной консистенции водой. Его показатель преломления - 1,52 [https://chem.ru/metasiUkat-natrija.html], то есть, близок к показателю преломления стекла - 1,5, используемого для приготовления предметных и покровных стекол [ГОСТ 111-2014 Межгосударственный стандарт стекло листовое бесцветное]. Как показал эксперимент, после высыхания силикатный клей на основе метасиликата натрия обладает полной прозрачностью, высокой твердостью.

Техническими результатами являются: 1) отсутствие собственной люминесценции этой прозрачной среды для заливки гистологических срезов, что позволяет исследовать их любыми методами световой или люминесцентной микроскопии с возможностью получения высококачественных морфологически полностью сопоставимых фотографических фрагментов срезов, что позволяет осуществлять морфологическую оценку одних и тех же участков срезов, сфотографированных при разных источниках освещения гистологических срезов; 2) значительно, минимум на трое суток, сокращение сроков изготовления гистологических срезов в результате создания возможности микроскопии препарата сразу же, после заключения срезов в прозрачную среду силикатного клея на основе метасиликата натрия, 3) удешевление изготовления гистологических срезов, 4) расширение арсенала средств аналогичного назначения.

Технический результат достигается тем, что способ заключения гистологических срезов в нелюминесцирующую прозрачную среду включает нанесение силикатного клея на основе метасиликата натрия поверх гистологических срезов в количестве, достаточном для полного заключения срезов в среду клея, окрашенных гистологическим красителем или нативных (неокрашенных) и смонтированных на предметном стекле гистологических срезов, после чего их накрывают покровным стеклом, или укладывают покровное стекло со смонтированным гистологическим срезом стороной, обращенной к предметному стеклу так, чтобы срез погрузился в силикатный клей на основе метасиликата натрия, после чего покровное стекло прижимают к предметному стеклу до полного растекания клея под покровным стеклом, и высушивают клей силикатный в течение 1-2 часов, либо, поскольку вязкость силикатного клея на основе метасиликата натрия достаточно высокая, в случае экстренной необходимости препарат микроскопируют методами световой и/или люминесцентной микроскопии сразу после заключения в прозрачную среду, не дожидаясь полного высыхания силикатного клея на основе метасиликата натрия.

Несмотря на высокие значения рН силикатного клея на основе метасиликата натрия, так называемым как жидкое стекло (рН=9-11), при заключении окрашенных препаратов в силикатный клей на основе метасиликата натрия не происходит изменения цвета или плотности окрашивания среза. При люминесцентной микроскопии высохший силикатный клей на основе метасиликата натрия по своим физическим свойствам становится подобен стеклу и поэтому при исследовании на люминесцентном микроскопе индуцированного свечения силикатного клея на основе метасиликата натрия не наблюдается.

На фиг. 1-7 приведены микрофотографии гистологических срезов различных органов.

Фиг. 1 - Препарат пораженной амилоидозом почки человека.

Фиг. 2 - Препарат интактной селезенки человека.

Фиг.3 - Препарат интактной почки человека

Фиг. 4 - Препарат пораженной амилоидозом почки человека.

Фиг. 5 - Препарат пораженной амилоидозом почки человека.

Фиг. 6 - Препарат пораженной амилоидозом почки человека.

Фиг. 7 - Нативный (неокрашенный) препарат нормальной почки человека.

Как показал эксперимент, после заключения препарата в среду силикатного клея на основе метасиликата натрия и накрытия предметным или покровным стеклом с последующим прижиманием до полного растекания клея под покровным стеклом, происходит быстрое образование прочной прозрачной бесцветной пленки, необратимо склеивающей стекла. Цвет и плотность окрашивания препарата при этом не меняются в течение минимум пяти месяцев со дня изготовления препарата при хранении без доступа света. В лабораторных условиях выполнено закрепление гистологических срезов из различных типов тканей и органов (селезенки, почки и др.).

Пример 1

После посмертного взятия в Республиканском бюро судебно-медицинской экспертизы Минздрава Чувашии биологического материала для гистологического и других дополнительных исследований в соответствии с приказом Министерства здравоохранения РФ от 6 июня 2013 г. №354н «О порядке проведения патолого-анатомических вскрытий» - кусочков массой 50 г почки человека, пораженной амилоидозом, биологический материал был зафиксирован в нейтральном формалине, после чего отмыт, обезвожен и залит в парафин по стандартному протоколу. Полученные парафиновые блоки были нарезаны на парафиновом микротоме и исследованы специалистами в области судебно-медицинской экспертизы на предмет установления патогистологического диагноза. После этого парафиновые блоки были переданы нам для изготовления парафиновых срезов на парафиновом микротоме и дальнейшего гистологического изучения. Для достижения заявленного нами технического результата парафиновые гистологические срезы монтируют на обезжиренные, смазанные смесью белка с глицерином и запеченные покровные стекла, после чего срезы депарафинируют и насыщают водопроводной водой по стандартному гистологическому протоколу и затем окрашивают квасцовым гематоксилином по Карацци и эозином, либо любым другим известным способом гистологического окрашивания, по стандартному гистологическому протоколу. На промытые и высушенные или влажные предметные стекла наносят необходимое количество 1-3 капли силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло), после чего закрывают сухим покровным стеклом стороной с расположенным на нем срезом, обращенной к предметному стеклу, так, чтобы силикатный клей на основе метасиликата натрия (жидкое стекло) полностью растекся тонким слоем под покровным стеклом, прижимают покровное стекло к предметному до полного растекания клея под покровным стеклом, высушивают 1-2 часа и микроскопируют с помощью светового микроскопа в проходящем свете. Результаты приведены на фиг. 1. Препарат пораженной амилоидозом почки человека. Световая микроскопия. Окраска гематоксилин и эозин, срез заключен в среду силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло). Увеличение 10. В центре среза расположен почечный клубочек с расширенным пространством капсулы Шумлянского Боумена. Ядра эндотелиоцитов капилляров клубочка окрашены базофильно. Между петлями капилляров обнаруживаются оксифильные отложения, похожие на гиалин. Справа и выше этого клубочка обнаруживается еще один в состоянии начинающего сморщивания. Ядра эндотелиоцитов капилляров этого клубочка также окрашены базофильно, а между петлями капилляров наблюдается большое количество гиалиноподобных отложений. Капилляры и более крупные сосуды полнокровны, их содержимое окрашено оксифильно. Просветы почечных канальцев (левый нижний угол) содержат оксифильные депозиты, похожие на гиалин. Округло-овальные образования числом пять, содержащие просвет посередине непрозрачной области представляют собой пузырьки воздуха, по-видимому, исходно содержащиеся в силикатном клее на основе метасиликата натрия (жидкое стекло).

Пример 2

После посмертного взятия в Республиканском бюро судебно-медицинской экспертизы Минздрава Чувашии биологического материала для гистологического и других дополнительных исследований в соответствии с приказом Министерства здравоохранения РФ от 6 июня 2013 г. №354н «О порядке проведения патолого-анатомических вскрытий» - кусочков массой 50 г интактной селезенки человека, биологический материал был зафиксирован в нейтральном формалине, после чего отмыт, обезвожен и залит в парафин по стандартному протоколу. Полученные парафиновые блоки были нарезаны на парафиновом микротоме и исследованы специалистами в области судебно-медицинской экспертизы на предмет установления патогистологического диагноза. После этого парафиновые блоки были переданы нам для изготовления парафиновых срезов на парафиновом микротоме и дальнейшего гистологического изучения. Для достижения заявленного нами технического результата парафиновые гистологические срезы монтируют на обезжиренные, смазанные смесью белка с глицерином и запеченные покровные стекла, после чего срезы депарафинируют и насыщают водопроводной водой по стандартному гистологическому протоколу и затем окрашивают квасцовым гематоксилином по Карацци и эозином, либо любым другим известным способом гистологического окрашивания, по стандартному гистологическому протоколу. На промытые и высушенные или влажные предметные стекла наносят необходимое количество 1-3 капли силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло), после чего закрывают сухим покровным стеклом стороной с расположенным на нем срезом, обращенной к предметному стеклу, так, чтобы силикатный клей на основе метасиликата натрия (жидкое стекло) полностью растекся тонким слоем под покровным стеклом, сильно прижимают покровное стекло к предметному до полного растекания клея под покровным стеклом, высушивают 1-2 часа и микроскопируют с помощью светового микроскопа в проходящем свете. Результаты приведены на фиг. 2. Препарат интактной селезенки человека. Световая микроскопия. Окраска гематоксилином и эозином. Срез заключен в среду силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло). Увеличение 10. Отчетливо визуализируется белая и красная пульпа селезенки. Селезеночные синусы обычной формы и размеров. В селезеночной дольке хорошо просматривается центральная артерия. По всему полю зрения визуализируется большое количество базофильно окрашенных клеточных ядер.

Пример 3

После посмертного взятия в Республиканском бюро судебно-медицинской экспертизы Минздрава Чувашии биологического материала для гистологического и других дополнительных исследований в соответствии с приказом Министерства здравоохранения РФ от 6 июня 2013 г. №354н «О порядке проведения патолого-анатомических вскрытий» - кусочков массой 50 г интактной почки человека, биологический материал был зафиксирован в нейтральном формалине, после чего отмыт, обезвожен и залит в парафин по стандартному протоколу. Полученные парафиновые блоки были нарезаны на парафиновом микротоме и исследованы специалистами в области судебно-медицинской экспертизы на предмет установления патогистологического диагноза. После этого парафиновые блоки были переданы нам для изготовления парафиновых срезов на парафиновом микротоме и дальнейшего гистологического изучения. Для достижения заявленного нами технического результата парафиновые гистологические срезы монтируют на обезжиренные, смазанные смесью белка с глицерином и запеченные покровные стекла, после чего срезы депарафинируют и насыщают водопроводной водой по стандартному гистологическому протоколу и затем окрашивают квасцовым гематоксилином по Карацци и эозином, либо любым другим известным способом гистологического окрашивания, по стандартному гистологическому протоколу. На промытые и высушенные или влажные предметные стекла наносят необходимое количество 1-3 капли силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло), после чего закрывают сухим покровным стеклом стороной с расположенным на нем срезом, обращенной к предметному стеклу, так, чтобы силикатный клей на основе метасиликата натрия (жидкое стекло) полностью растекся тонким слоем под покровным стеклом, сильно прижимают покровное стекло к предметному до полного растекания клея под покровным стеклом, высушивают 1-2 часа и микроскопируют с помощью светового микроскопа в проходящем свете. Результаты приведены на фиг. 3. Препарат интактной почки человека. Световая микроскопия. Окраска гематоксилин и эозин. Срез заключен в среду силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло). Увеличение 40. Практически все поле зрения занимает интактный почечный клубочек. Ядра эндотелиоцитов капилляров клубочка окрашены базофильно. Между петлями капилляров наблюдаются небольшие пустые пространства. Капсула Шумлянского-Боумена выражена хорошо, пространство между ее париетальным и висцеральным листками не расширено. Слева от клубочка прилежат почечные канальцы с хорошо выраженными базофильными ядрами канальцевого эпителия. Просвет канальцев пуст.

Пример 4

После посмертного взятия в Республиканском бюро судебно-медицинской экспертизы Минздрава Чувашии биологического материала для гистологического и других дополнительных исследований в соответствии с приказом Министерства здравоохранения РФ от 6 июня 2013 г. №354н «О порядке проведения патолого-анатомических вскрытий» - кусочков массой 50 г пораженной амилоидной болезнью почки человека, биологический материал был зафиксирован в нейтральном формалине, после чего отмыт, обезвожен и залит в парафин по стандартному протоколу. Полученные парафиновые блоки были нарезаны на парафиновом микротоме и исследованы специалистами в области судебно-медицинской экспертизы на предмет установления патогистологического диагноза. После этого парафиновые блоки были переданы нам для изготовления парафиновых срезов на парафиновом микротоме и дальнейшего гистологического изучения. Для достижения заявленного нами технического результата парафиновые гистологические срезы монтируют на обезжиренные, смазанные смесью белка с глицерином и запеченные покровные стекла, после чего срезы депарафинируют и насыщают водопроводной водой по стандартному гистологическому протоколу и затем окрашивают квасцовым гематоксилином по Карацци и эозином, либо любым другим известным способом гистологического окрашивания, по стандартному гистологическому протоколу. На промытые и высушенные или влажные предметные стекла наносят необходимое количество 1-3 капли силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло), после чего закрывают сухим покровным стеклом стороной с расположенным на нем срезом, обращенной к предметному стеклу, так, чтобы силикатный клей на основе метасиликата натрия (жидкое стекло) полностью растекся тонким слоем под покровным стеклом, сильно прижимают покровное стекло к предметному до полного растекания клея под покровным стеклом, высушивают 1-2 часа и микроскопируют с помощью светового микроскопа в проходящем свете. Результаты приведены на фиг. 4. Препарат почки человека, амилоидоз почки. Световая микроскопия. Окраска конго красный и гематоксилин. Срез заключен в среду силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло). Увеличение 10. Практически все поле зрения занимает сморщенный почечный клубочек, содержащий между петлями капилляров бесструктурную массу амилоида, окрашенную оксифильно (конго красный). Ядра эндотелиоцитов не визуализируются. Пространство капсулы почечного клубочка слева расширено, формой напоминает полулуние. В ближайшем окружении клубочка почечная паренхима замещена соединительной тканью, прослеживаются кистозно измененные просветы почечных канальцев.

Пример 5

После посмертного взятия в Республиканском бюро судебно-медицинской экспертизы Минздрава Чувашии биологического материала для гистологического и других дополнительных исследований в соответствии с приказом Министерства здравоохранения РФ от 6 июня 2013 г. №354н «О порядке проведения патолого-анатомических вскрытий» - кусочков массой 50 г пораженной амилоидной болезнью почки человека, биологический материал был зафиксирован в нейтральном формалине, после чего отмыт, обезвожен и залит в парафин по стандартному протоколу. Полученные парафиновые блоки были нарезаны на парафиновом микротоме и исследованы специалистами в области судебно-медицинской экспертизы на предмет установления патогистологического диагноза. После этого парафиновые блоки были переданы нам для изготовления парафиновых срезов на парафиновом микротоме и дальнейшего гистологического изучения. Для достижения заявленного нами технического результата парафиновые гистологические срезы монтируют на обезжиренные, смазанные смесью белка с глицерином и запеченные покровные стекла, после чего срезы депарафинируют и насыщают водопроводной водой по стандартному гистологическому протоколу и затем окрашивают квасцовым гематоксилином по Карацци и эозином, либо любым другим известным способом гистологического окрашивания, по стандартному гистологическому протоколу. На промытые и высушенные или влажные предметные стекла наносят необходимое количество 1-3 капли силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло), после чего закрывают сухим покровным стеклом стороной с расположенным на нем срезом, обращенной к предметному стеклу, так, чтобы силикатный клей на основе метасиликата натрия (жидкое стекло) полностью растекся тонким слоем под покровным стеклом, сильно прижимают покровное стекло к предметному до полного растекания клея под покровным стеклом, высушивают 1-2 часа и микроскопируют с помощью флуоресцентного микроскопа в отраженном свете. Результаты приведены на фиг. 5. Препарат почки человека (амилоидоз). Люминесцентная микроскопия. Окраска конго красный и гематоксилин. Срез заключен в среду силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло). Увеличение 10. По центру в почечном клубочке визуализируется люминесценция окрашенных конго красным амилоидных масс, расположенных между петлями капилляров. Вокруг клубочка визуализируются расширенные почечные канальцы, а также склерозированные почечные канальцы, последние содержат амилоидные депозиты.

Пример 6

После посмертного взятия в Республиканском бюро судебно-медицинской экспертизы Минздрава Чувашии биологического материала для гистологического и других дополнительных исследований в соответствии с приказом Министерства здравоохранения РФ от 6 июня 2013 г. №354н «О порядке проведения патолого-анатомических вскрытий» - кусочков массой 50 г пораженной амилоидной болезнью почки человека, биологический материал был зафиксирован в нейтральном формалине, после чего отмыт, обезвожен и залит в парафин по стандартному протоколу. Полученные парафиновые блоки были нарезаны на парафиновом микротоме и исследованы специалистами в области судебно-медицинской экспертизы на предмет установления патогистологического диагноза. После этого парафиновые блоки были переданы нам для изготовления парафиновых срезов на парафиновом микротоме и дальнейшего гистологического изучения. Для достижения заявленного нами технического результата парафиновые гистологические срезы монтируют на обезжиренные, смазанные смесью белка с глицерином и запеченные покровные стекла, после чего срезы депарафинируют и насыщают водопроводной водой по стандартному гистологическому протоколу и затем окрашивают квасцовым гематоксилином по Карацци и эозином, либо любым другим известным способом гистологического окрашивания, по стандартному гистологическому протоколу. На промытые и высушенные или влажные предметные стекла наносят необходимое количество 1-3 капли силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло), после чего закрывают сухим покровным стеклом стороной с расположенным на нем срезом, обращенной к предметному стеклу, так, чтобы силикатный клей на основе метасиликата натрия (жидкое стекло) полностью растекся тонким слоем под покровным стеклом, сильно прижимают покровное стекло к предметному до полного растекания клея под покровным стеклом, высушивают 1-2 часа и микроскопируют с помощью флуоресцентного микроскопа в отраженном свете. Результаты приведены на фиг. 6. Препарат почки человека (амилоидоз). Люминесцентная микроскопия. Окраска тиофлавином, срез заключен в среду силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло). Увеличение 20. Сверху на 11 и 12 часов визуализируется люминесценция тиофлавина в двух сморщенных почечных клубочках - амилоид, расположенный между петлями капилляров. В правом нижнем углу визуализируются окрашенные тиофлавином амилоидные депозиты в резко расширенных почечных канальцах. Вокруг депозитов люминесцируют менее интенсивно светящиеся склерозированные стенки почечных канальцев.

Пример 7

После посмертного взятия в Республиканском бюро судебно-медицинской экспертизы Минздрава Чувашии биологического материала для гистологического и других дополнительных исследований в соответствии с приказом Министерства здравоохранения РФ от 6 июня 2013 г. №354н «О порядке проведения патолого-анатомических вскрытий» - кусочков массой 50 г пораженной амилоидной болезнью почки человека, биологический материал был зафиксирован в нейтральном формалине, после чего отмыт, обезвожен и залит в парафин по стандартному протоколу. Полученные парафиновые блоки были нарезаны на парафиновом микротоме и исследованы специалистами в области судебно-медицинской экспертизы на предмет установления патогистологического диагноза. После этого парафиновые блоки были переданы нам для изготовления парафиновых срезов на парафиновом микротоме и дальнейшего гистологического изучения. Для достижения заявленного нами технического результата парафиновые гистологические срезы монтируют на обезжиренные, смазанные смесью белка с глицерином и запеченные покровные стекла, после чего срезы депарафинируют и насыщают водопроводной водой по стандартному гистологическому протоколу и не окрашивают.На промытые и высушенные или влажные предметные стекла наносят необходимое количество 1-3 капли силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло), после чего закрывают сухим покровным стеклом стороной с расположенным на нем срезом, обращенной к предметному стеклу, так, чтобы силикатный клей на основе метасиликата натрия (жидкое стекло) полностью растекся тонким слоем под покровным стеклом, сильно прижимают покровное стекло к предметному до полного растекания клея под покровным стеклом, высушивают 1-2 часа и микроскопируют с помощью флуоресцентного микроскопа в отраженном свете. Результаты приведены на фиг. 7. Препарат почки человека (амилоидоз). Люминесцентная микроскопия. Нативный препарат, срез заключен в среду силикатного клея на основе метасиликата натрия (жидкое стекло). Увеличение 10. На 12 часов визуализируются два сморщенных почечных клубочках - амилоид, расположенный между петлями капилляров. По всему полю зрения наблюдаются расширенные почечнные канальцы, некоторые из которых содержат люминесцирующие депозиты амилоида. Вокруг депозитов люминесцируют менее интенсивно светящиеся склерозированные стенки почечных канальцев.

Изобретение относится к медицине и биологии. Раскрыт способ заключения гистологических срезов в нелюминесцирующую прозрачную среду, который включает нанесение силикатного клея на основе метасиликата натрия поверх гистологических срезов в количестве, достаточном для полного заключения срезов в среду клея, и смонтированных на предметном стекле гистологических срезов, после чего их накрывают покровным стеклом или укладывают покровное стекло со смонтированным гистологическим срезом стороной, обращенной к предметному стеклу так, чтобы срез погрузился в клей, после чего покровное стекло прижимают к предметному стеклу до полного растекания клея под покровным стеклом и микроскопируют методами световой и/или люминесцентной микроскопии. Изобретение обеспечивает отсутствие собственной люминесценции прозрачной среды для заключения гистологических срезов, сокращение сроков изготовления гистологических срезов и расширение арсенала средств аналогичного назначения. 7 ил., 7 пр.

Способ заключения гистологических срезов в нелюминесцирующую прозрачную среду, включающий нанесение силикатного клея на основе метасиликата натрия поверх гистологических срезов в количестве, достаточном для полного заключения срезов в среду клея, и смонтированных на предметном стекле гистологических срезов, после чего их накрывают покровным стеклом или укладывают покровное стекло со смонтированным гистологическим срезом стороной, обращенной к предметному стеклу так, чтобы срез погрузился в клей, после чего покровное стекло прижимают к предметному стеклу до полного растекания клея под покровным стеклом и микроскопируют методами световой и/или люминесцентной микроскопии.