Способ получения молоди русского осетра Советский патент 1983 года по МПК A01K61/00 

Изобретение относится к рыбному хозяйству, в частности к способам получения молоди русского осетра, и может быть использовано на рыбоводных заводах, занимающихся искусстве ьым воспроизводством русского осетр Известен способ получения молоди осетровых рыб, предусматривающий стимулирование полового созревания производителей гипофизарными инъекциями, выдерживание их в бассейне с проточной водой до полного созревания откладывания половых продуктов, отвод плодотворен ной икры, её инку бирование и выраищвание личинок, При осуществлении этого способа производители, содержащиеся в бассейне, достигают половой зрелости после гипофизарных инъекций, в результате чего самки откладывают икру оплодотворяемую самцами, Нереет, таким образом, происходит в УСЛОВИЯХ, приближенных к естественным, без подбора производителей jl Наиболее близким к изобретению по технической сущности является сп соб получения молоди русского осетра, предусматривающий .стимулирование полочого созревания производителей гипофизарными инъекциями, получение половых продуктов, искусственное оплодотворение икры, ее ин кубирование и выращивание личинок Щ Однако в процессе осуществления известного способа производителей для скрещивания выбирают произвольно по мере их созревания, в результате чего молодь, выпускаемая из рыбоводных заводов, имеет недоста:точную жизнестойкость и, попадая в неблагоприятные условия, в стве своем погибает от дефицита кис лорода на местах нагула, что снижа- ет промысловый возврат. Целью изобретения является повышение устойчивости молоди к дефициту кислорода и обеспечение ее большей жизнестойкости. Поставленная цель достигается те что согласно способу получения моло ди русского осетра, предусматриваюweMS стимулирование полового созревания производителей гипофизарными инъекциями, получение половых продуктов, искусственное ойлодотворени икры, ее инкубирование и выращивание личинок, при оплодотворении осу ществляют подбор родительских пар для скрещивания по фенотипу гемо глобина крови, при этом подбор проводят так, чтобы получить 50-100% молоди с гетерозиготным гемоглобином. Спосяэб основан на том, что функцию переноса кислорода в организме осуществляет дыхательный пигмент крови гемоглобин, биохимический пол морфизм которого (множественность гемоглобиновых компонентов) имеет адаптивное значение. Способ осуществляется следующим образом. Всех производителей, используемых для воспроизводства, метят и после мечения у них прижизненно берут про-бы крови и готовят образцы гемоглобина. Приготовленные образцы 1емоглобина (Нв) анализируют методом электрофореза в блоках 5,5%-ного полиакриламидного геля и определяют их фраК ционный состав (фенотип), Обычно для фракционирования сывороточных белков крови применяют 7,5%-ный гель, Увеличение размера пор геля при снижении концентрации акриламида до 5,5% и соответствующее снижение концентрации сшивающего агента (метиленбисакриламида) позволяет удлинить трек разгонки белка. При этом разрешающая способность геля увеличивается и позволяет выявить дополнительные фракции, Гемоглобин русского осетра по фракционному составу разделяется на три типа Нв-АА, Нв-ВВ и Нв-АВ (фиг, 1) , Гомозигфтный фенотип Нв-ВВ отличается от гомозиготного фенотипа Нв-АА наличием фракции 1 с высокой анодной подвижностью, а в фенотипе Нв-АА самым быстрым является компонент 3, Гетерозиготный компонент Нв-АВ образуется в результате кодоминаит ного наследования при подборе для скрещивания родителей с Нв-АА и Нв-ВВ, поэтому гетерогенность его наиболее велика - из 7 фракций, при,чем гетерозиготы с Нв-АВ обладают (Повышенной резистентностью к дефициту кислорода, ; Для получения гетерозигот Нв-АВ родительские пары для скрещивания подбирают по следующей схеме: НВ-АА X Нв-ВВ 100% Нв-АВ Нв-АА X Нв-АВ 50% Нв-АА и 50% Нв-АВ; Нв-АВ X Нв-ВВ 50% Нв-ВВ и 50% НВ-АВ, В данном случае используется явление одногенного гетерозиса по лбкусу с известной функцией. Гетерозис создается за счет сочетания разных аллельных вариантов гемоглобина, существующих в природной популяции, Лосле смешивания икры со спермой, полученных от подобранных родательских пар, и оплодотворения таким образом икры последнюю закладывают на инкубацию, полученные личинки выращивают, а по окончании цикла выращивания выпускают в естественный водоем для дальнейшего нагула.

При осуществлении способа был. проведен анализ частот вариантов Нв в 17 генерациях русского осетра в выборке более чем 2000 рыб, в результате чего обнаружена тесная корреляция между частотой Нв-АВ, кислородным режимом в естественном водоеме (Таганрогском заливе, в котором осуществлено наблюдение нагула молоди) и вы киваемость о рыб этой генерации.

На фиг. 2 приведены данные, полученные при этих наблюдениях, где кривая 1 иллюстрирует частоту гетерозиготного гемоглобина Нв-АВ в генерациях русского осётра за 19641978 гг (%); кривая 2 - процентное содержание кислорода в воде Таганрогскрго залива в период нагула молояя. : , ; ./

При неблагоприятном кислородном режиме в период нагула молоди на первому году жизни увеличивается смертность молоди, а среди выживших jE«j6 повышается доля особей с фенотипом Нв-АВ г что свидетельствует 6 селективном преимуществе рыб с таким гемоглобином.

Коэффициент корреляции между содержанием кислорода в воде и в лживаемостью молоди составляет t), 83, а между содержанием кислорода и частотой Нв-АВ в генерациях - 0,81.

Приме Pi,Родительские пары русского осетра подбирали по фене- . типам генюглобина, для этого производителей метили порционовыми красителями и прижизненно отбирали цробы крови из хвостовой вены. В пробах крови определяли эритроциты, проводили их гемолиз и немедленно анализировали фракционный состав гемоглобина методом диск-электрофореза ; в вертикальных блоках 5,5%-нрго полиакриламидного геля с рН-8,9. Разделяющий и концентрирующий гели готовили на трис-глициновом электродном буфере с рН-8,3 и 6,9, .соответственно. Окраску белков проводили бензидином или амидомерным ЮВ.

После определения фенотипа гемоглобина осуществляли подбор родительских пар с фенотипами Нв-АА и Нв-ВВ И их скрещивание, в результате чего после инкубации икры было получено 100% молоди с гетерозигот0ным Нв-АВ.

П р и м е р.2. Способ осуществляли также, как в примере 1. После, определения фенотипа гемоглобина для скр.ещивания были отобраны родитель5ские пары с фенотипами гемоглобина Нв-АА и Нв-ВВ, в результате чего было получено 50% молоди с гемоглобином Нв-АА и 50% молоди с гемоглобином Нв-АВ.

Примерз. Способ осуществля0ли также, как в примере Г. После определения фенотипа гемоглобина для скрещивания были отобраны родительские пары с фенотипами гемоглобина Нв-ВВ и Нв-АВ.

5

После инкубации икры было получено 50% молоди с гемоглобином Нв-ВВ и 50% молоди с гемоглобином Нв-АВ.

Молодь, полученная э результате скрещивания, затем выравнивали вЧндён0тичных условиях (при равной цроточности, плотности посадки и одинаковом рационе кормления) в течение 55 сух..

Молодь, полученн5по при скрещивании)

5 С гемоглобином Нв-АА и Нв-АВ подвергли раздельно действию ocTpo o дефицита кислорода (снижали концентрацию кислорода с.помощью вакуумного насоса) , выдерживая ее 1 ч при содержа0нии кислорода 2,9 мл/л (контрольные рыбы находились в воде, содержащей 6 мл/л кислорода.

Полученные данные приведены в табл. 1..:.

, Таблица 1

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОЛОДИ РУССКО.ГО ОСЖТРА, предусматривающий . стимулирование полового созревания произЬод итёлей гипофизарными инъекциями искусственное оплодотворение икры, ее инкубирование и выращивание личинок, отличающийся тем, что, с целью повышения устойчивости молоди к дефициту кислорода и обеспечения ее большей жизнестойкости, при оплодотворении осуществляют подбор родительских пар для скрещивания по фенотипу гемоглобина крови, при этом подбор проводят так, чтобы получить 50-100% молоди с гетерозиготным гемоглобином. Ofpaaei/ ш со 6уфе{К1

йЭ табл. 1 следует, что молодь,, с гемоглобином Нв-АВ имела больший процент выживаемости при дефиците кислорода.

Смешанную группу молоди с гемо глобином Нв-АА и Нв-АВ подвергали воздействию дефицита кислорода. Данные приведены в табл. 2.

До гипоксии

После гипоксии

Как видно из табл. 2, среди выживших после стресса рыб наблюдался сдвиг частот фенотипов гемоглобина на 13,6% в пользу гетерозитот с Нв-АВ.

Молодь с гетерозиготным гемоГЛобийом Нв-АВ- имела навеску на / ; 11,5-23,5% больше по сравнению с молодью, имеющей гемоглобин Нв-АА.

В природе при скрещивании двух гетерозигот АВ в соответствии с законами Менделя происходагт расщепление, при котором образуется 25% особей с Нв-АА, 50% особей с Нв-АВ и 25% особей с Нв-ВВ. В следующей генерации скрещивание разных гояози гот АА и ВВ даст 100% гетерозигот АВ и их суммарная доля повысится до 75%, в третьем поколении - находит ся в состоянии динё мического равновесИ19. .

Предлагаемый способ, направленный на подбор родительских пар по /фенотипу гемоглобина, позволит сдвинуть это равновесие в сторону преоб падания Нв-АВ, характеризующихся

Таблица 2

58 52

46,8 53,6

При исследовании анализа температура темпа роста молоди с разнЕлми 15 фенотипами гемоглобина Нв выявилось достоверное преимущество рыб с гетерозиготным гемоглобином Нв-АВ, Данные анализа приведены в табл. 3.

Таблица 3

большей выживаемостью и пластичностью.

Это позволяет даже при получении

только 50% молоди с Нв-АВ в годы с неблагоприятным кислородным режимом повысить ее выживаемость на 20%, что при промысловом возврате только в бассейне Азовского моря даст дополнительно до 2000 т товарной рыбы или

до 1 млн рУб. прибыли в ГОД.

Кроме того предлагаемый способ поз воляет получить молодь с повышенным темпом роста, которая, следовательно,

быстрее дост1 гнет промысловых размеров, и улучшить адаптационную пластичность полуляции в целом, так как при нересте рыб, гетерозиготным по гемогобину, будут чаще выцепляться ред

кие гомозиготы Нв-ВВ, которые при скрещивании с распространенными гомо зиготами Нв-АА вновь дадут рыб с фенотипом Нв-АВ.

fto

w

ад

w

W