Способ дифференциальной диагностики перинатальных поражений центральной нервной системы у новорожденных детей Советский патент 1984 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится, к медицине, а именно к иммунологическим методам диагностики в неопатологии.

Известен способ дифференциальной диагностики перинатальных поражений центральной нервной системы (ЦНС) у новорожденных детей путем исследования крови по биохимическим показателям 1.

Однако известный способ не позволяет осуществлять раннюю дифференциальную диагностику гипоксических и травматических повреждений и требует дополнительных показателей: эхо - ЭГ электроэнцефалографических и реографических.

Цель изобретения - раннее выявление гипоксических и травматических повреждений ЦНС у новорожденных детей.

Цоставленная цель достигается тем, что согласно способу дифференциальной диагностики перинатальных поражений ЦНС у новорожденных детей путем исследования крови, в исследуемой крови определяют уровень компле.мента в первые сутки жизни и на 7-10 сут и при уровне комплемента 10-35 ед. диагностируют гипоксическую энцефалопатию, а при 45-89 ед. - травматическую энцефалопатию.

Способ осуществляется следующим образом.

Принцип метода. Растворение в присутствии комплемента сенсибилизированных гемолизинов эритроцитов (гемолитической системы). Для приготовления последней используются эритроциты барана.

Необходимы следующие реактивы: исследуемая сыворотка, гемолитическая система {гетеро.югичные эритроциты, сенсибилизированные соответствующей гемолитической сывороткой), физиологический (0,85°/оный NaCl) раствор.

Исследуемая сыворотка должна использоваться для определения комплемента ие позднее, чем через сутки после взятия крови.

Приготовление взвеси эритроцитов.

Дефибринированную кровь барабана центрифугируют, трижды отмывают 5-10 объемами физиологического раствора, который после третьего отмывания должен быть бесцветным. Из плотного осадка эритроцитов готовят 3%-ную взвесь в изотоническом растворе (3 мл эритроцитов на 100 мл физиологического раствора). Взвесь эритроцитов необходимо стандартизировать. Для этой цели используют фотоэлектроколориметр (ФЭК-М).

За 15-20 мин до начала исследования включают стабилизатор и устанавливают зеленый светофильтр. 1 мл из приготовленной 3°/о-ной взвеси отмытых бараньих эритроцитов добавляют в пробирку К 9 мл дистиллированной воды. Полученную лизированную кровь вливают в 10-миллиметровую кювету, в другие две кюветы (такого же объема) наливают растворитель, т.е. смесь

из 1 мл физиологичесого раствора и 9 мл дистиллированной воды.

В левый кюветодержатель ставят кювету с растворителем, в правый - кювету с ли5 зированной кровью. Включают гальванометр и вращением фотометрических клиньев устанавливают стрелку гальванометра на нуль, после чего гальванометр выключают. Затем вместо кюветы с лизированной кровью в правый кюветодержатель ставят кювету с растворителем. Включают гальванометр и вращением левого измерительного барабана (который предварительно устанавливают на 0,00) стрелку гальванометра устанавливают на нуль, после чего гальванометр вы5 ключают. Величина оптической плотности раствора отсчитывается по левой части барабана. Определенной концентрации эритроцитов соответствует определенный показатель щкалы оптической плотности. Если 3°/о ная взвесь бараньих эритроцитов приготовлена правильно, то шкала оптической плотности показывает 0,4.

Приготовление гемолитической системы.

Гемолитическая система это смесь равных объемов разведенной по троекратному 5 титру ге.молитической сыворотки и 3%-ной взвеси бараньих эритроцитов. Для приготовления гемолитической системы пользовались гемолитической сывороткой.

Перед приготовлением гемолитической системы рекомендуется проверить титр гемо0 литической сыворотки. Схема титрования представлена в табл. 1.

Экспозиция 1гпри 37° (+) после приготовления ряда разведений из пробирок 1 и 2 для выравнивания объемов удаляют по 0,4 мл смеси; (+ +) после приготовления ряда разведений из пробирки 7 для выравнивания объемов удаляют 0,5 мл смеси, стрелка (-)означает смещивание и перенесение определенного объема смеси в следующую пробирку.

За титр гемолитической сыворотки принимают то ее наибольщее разведение, в котором она еще способна в присутствии комплемента вызывать полное растворение эритроцитов барана (гемолиз на 4 креста).

После этого сыворотку разводят в физиологическом растворе так, чтобы 1 .мл ее содержал три рабочие дозы (т.е. три дозы, каждая из которых в присутствии стандартного комплемента способна вызвать полный гемолиз эритроцитов барана).

0 Наиболее удобна для этой цели гемолитическая сыворотка с титром 1:3000 или с титром кратным этой величине,.

Для приготовления 50 мл разведенной сыворотки с исходным титром 1:3000 необходимо на 50 мл физиологического раствора

S прибавить 0,05 мл гемолитической сыворотки. Если же сыворотка имеет титр 1:1500, то на 50 мл, физиологического раствора следует взять О, мл этой сыворотки и т.д.

Разведенную таким образом сыворотку иногда называют сывороткой, разведенной по тройному титру.

Равные объемы 3°/о-ной по осадку взвеси эритроцитов и разведенной по тройному титру гемолитической сыворотки смешивают, вливая разведенную сыворотку во взвесь эритроцитов («белое в «красное) и инкубируют в течение 30 мин в термостате при 37°, после чего система готова к употреблению. Готовят систему непосредственно перед опытом.

Испытуемая активная сыворотка.

Для определения комплемента в испытуемой сыворотке брали кровь из пуповины у новорожденных детей и из черепных вен у детей в возрасте 7-10 сут (при строгом соблюдении правил асептики).

Титрование комплемента по 50% гемолизу (CHso).

За бО /о-ную гемолитическую единицу активности комплемента (CHso) принимают количество комплемента, способствующее бО /о-ному лизису определенного количества (0,5-1,0 мл) сенсибилизированных эритроцитов в течение 45-60 мин при 37°.

Методика титрования комплемента.

Активную исследуемую сыворотку, разведенную 1:10, разливают в 11 пробирок дозами 0,05-0,5 мл с разницей между отдельными объемами 0,05 мл. Сыворотку доводят физиологическим раствором до 1,5 мл (табл. 2), после чего в каждую пробирку прибавляют 1,5 мл гемолитической системы, т.е. сенсибилизированных бараньих эритроцитов. После 45 мин стояния пробирок в термостате их охлаждают 10 мин в холодильнике, затем Ш мин центрифугируют при 1500 об/мин.

За 100%-ный гемолиз принимается гемолиз 1,5 мл сенсибилизированных эритроцитов, к которым прибавляют 1,5 мл дистиллированной воды.

Степень гемолиза определяют преимущественно колориметрическим методом (колориметр, электрофотоколориметр). Колориметрируют в фотоэлектроколориметре (ФЭК) в кюветах (3 мм) с зеленым светофильтром против воды.

Пример . Ребенок Т-ов, родился 18.11. 1981 г, первые роды. Предыдущие четыре беременности закончились медицинскими абортами. Беременность протекала с угрозой прерывания в первой половине, по поводу чего женщина лечилась в стационаре (отделение патологии беременных), вторая половина протекала без особенностей. Роды срочные, затянувщиеся. Первый период 36 ч. второй - 2 ч. 30 мин. Дородовое излитие околоплодных вод. Безводный период 26 ч. 30 мин. Упорная первичная и вторичная слабость родовой деятельности, внутриутробная асфиксия плода, вследствие чего были

наложены щипцы по Иванову, вакуум-экстрактор и полостные акущерские щипцы. Ребенок родился с оценкой по шкале Апгар 5 баллов, после реанимационных мероприятий 3 баллов. Вес. 3800,0; длина 55 см. Параллельно была взята кровь из пупочной вены и определен уровень комплемента в сыворотке, который оказался равным 56,4 ед. что соответствует уровню комплемента при травматической энцефалопатии.

0

В детское отделение ребенок был переведен в тяжелом состоянии: болезненный крик, резко снижен мыщечный тонус, отсутствуют спонтанные движения, угнетены рефлексы периода новорожденности. Отмечался резко выраженный спонтанный кло5нус стоп с генерализацией. Голова выраженной долихоцефалической конфигурации. В теменной области справа кефалогематома, кровоточащие ранки, перелом правой ключицы, снижена двигательная активность в

0 правой ручке. В последующие дни состояние ребенка оставалось тяжелым.

На 7 сут ребенок был переведен в специализированное отделение патологии новорожденных в состоянии средней тяжести.

Были проведены функциональные методы исследования. На реограмме отмечалось снижение пульсового наполнения, особенно в левом полущарии мозга. На эхоэнцефалограмме никаких особенностей не отмечено, внутренние структуры не смещены.

В результате анализа акушерского анамнеза, клинической картины, данных функциональных методов обследования был поставлен клинический диагноз: перинатальная гипоксически-травматическая энцефалопатия, острый период, тяжелое течение. Одновременно проводилась оченка уровня комплемента, на 10 сут он составил 77,8 ед.

На основании высокого показателя уровня комплемента в сыворотке крови был поставлен окончательный клинический диагноз: перинатальная травматическая энцефалопатия, острый период, тяжелое течение.

Проведено направленное лечение с акцентом на рассасывающую терапию. В конце лечения, на 30 сут уровень комплемента сыворотки крови был 35,3 ед. Ребенок выписан домой на 34-е сут в удовлетворительном состоянии, регулярно наблюдался в поликлинике педиатром и невропатологом. Развивался соответственно возрасту, хорошо прибавлял в весе. В психомоторном развитии отставаний не отмечалось. В возрасте двух лет ребенок практически здоров.

Пример 2. Ребенок М-нев родился от первой переношенной беременности, первых запоздалых родов, на сроке 42-43 недели у возрастной первородящей.

Беременность протекала с токсикозом в первой половине, нефропатией, пиелонефритом и анемией во второй половине.

Роды крупным плодом. Задний вид. Вторичная слабость родовой деятельности. Проводилась родостимуляция, наложен полостной вакуум-экстрактор и выходные акушерские щипцы. Оценка по шкале Апгар 2 балла ()), через 5 мин - 5 баллов (2+14

+ 14-1+0).

После родов был проведен весь комплекс реанимационных мероприятий. Параллельно взята кровь из пупочной вены и определен уровень комплемента, который оказался довольно низким - 12,4 ед.

В отделение новорожденных ребенок посгупил в крайне тяжелом состоянии. На осмотр реагировал болезненным монотонным криком, взгляд был «плавающим, рефлексы периода новорожденности не вызывались, мышечный тонус был резко усилен. В легких дыхание резко ослаблено, выслушивались проводные хрипы, тоны сердца были глухими. Был выражен синдром общего угнетения, самостоятельно ребенок не сосал, кормился через зонд. На шестые сутки состояние немного улучшилось, появилась двигательная активность, появились рефлексы Бабкина, Бабинского. Гипертонус сменился гипотонией. Появилась паретичность кистей. Со стороны сердца и легких патологии не отмечалось. В роддоме ребенок находился 10 сут, затем с диагнозом перинатальная гипоксически-травматическая энцефалопатия, острый период, тяжелое течение - переведен в отделение патологии новорожденных для дальнейшего лечения и выхаживания.

В отделении ребенок был обследован методами функциональной диагностики. На реограмме отмечалось снижение кровотока в бассейне a.vertaBralis с обеих сторон, особенно выраженное справа. Затруднен венозный отток. На эхоэнцефалограмме внутренние структуры не смещены, признаки ликворной гипертензии.

На электроэнцефалограмме доминирующие ритмы отсутствовали, особых изменений не отмечалось.

На основании анамнеза, клинической картины и обследования с помощью методов функциональной диагностики не было возможности выделить этиологический фактор и уточнить диагноз. Был поставлен диагноз: перинатальная гипоксически-травматическая энцефалопатия, острый период, тяжелое течение. Уровень комплемента в сыворотке крови на 10 сут был 10,1 ед., что соответствует уровню комплемента у детей гипоксической энцефалопатией. После оценки уровня комплемента был поставлен диагноз: перинатальная гипоксическая энцефалопатия, острый период, тяжелое течение.

Была проведена патогенетическая терапия. Ребенок был выписан из стационара

через 38 сут с остаточными явлениями энцефалопатии. Уровень комплемента в возрасте 32 сут был 18,5 ед., т.е. не достиг уровня нормального здорового ребенка. Через 10 мес. ребенок значительно отставал в развитии от своих сверстников {не сидел, не фиксировал взгля.а, не улыбался).

Пример 3. Ребенок П-ов родился от первой беременности, которая протекала без осложнений. Матери 21 год, отцу 25 лет.

Родители здоровы. Роды в срок, вес при рождении 3880,0, длина 51 см. Закричал сразу, оценка по шкале Апгар 8 баллов, через 5 мин - 10 баллов. Период адаптации протекал без особенностей. К груди приложен

5 на вторые сутки, сосал активно. Выписан

из роддома на 10 сут в хорошем состоянии.

Уровень компле.мента сыворотки крови в

первые сутки 44,2 ед, на 10 сутки - 37,8 ед.,

на 30 сутки - 41,6 ед.,

Рос и развивался нормально соответ0 ственно возрасту. В возрасте одного года ребенок практически здоров.

Проведены исследования на 101 новорожденном, из которых 50 родились с перинатальными поражениями ЦНС,и на 76 боль5 ных в специализированном отделении патологии новорожденных.

Комплемент сыворотки определялся в сыворотке крови, взятой из пупочной вены новорожденного в момент рождения, до перевязки пуповины и на 7-10 сут (кровь брали

0 из черепных вен). Одновре.менно дети обследовались общеклиническими методами и методами функциональной диагностики.

Полученные данные приведены в табл. 3. Из приведенных данных видно, что по известной диагностике в первые 10 сут жизни выявляются только нарушения ЦНС, характерные для обоих видов энцефалопатии, без их дифференциации. При определении количественных показателей уровня комплемента по предлагаемому способу очевидно,

что уровень комплемента у детей с травматической энцефалопатией в 3-5 раз превышает уровень комплемента у детей с гипоксической энцефалопатией, что впоследствии энцефалопатии гипоксического или травматического характера влекут за собой инвалидизацию ребенка в будущем или вызывают развитие различных состояний, пограничных интеллектуальной недостаточности. Сложность заключается в то.м, что нарушения интеллекта обнаруживаются слиш0 ком поздно.

Таки.м образом, предлагаемый способ позволяет в ранние сроки осуществлять дифференциальную диагностику перинатальных поражений ЦНС у новорожденных детей, что важно для своевременного применения па5 тогенетической терапи.и.

Таблица 1

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПЕРИНАТАЛЬНЫХ ПОРАЖЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ У НОВОРОЖДЕННЫХ ДЕТЕЙ путем исследования крови, отличающийся тем, что, с целью раннего выявления гипоксических и травматических повреждений центральной нервной системы, в исследуемой крови определяют уровень комплемента в первые сутки жизни и на 7-10 сут и при уровне комплемента 10-35 ед. диагностируют гнпоксическую энцефалопатию, а при 45-89 ед. - травматическую энцефалопатию.

Физиологиче0,9 0,9 0,5 ский0,9 0,1 0,1 0,5 Сыворотка 0,1 Физиологиче1 ,0 - 1,0 - 1 ,0 ский1,0 Комплемент 0,5 0,5 0,5 1:10 . 0,5 2,5% по осадку взвесь эритро0,5 0,5 0,5 цитов барана 0,5 Полученное раз1:100 1:1000 1:2000 ведение 1:10 Титрование комплемента активной сыворотки

ванные эритроциты + гемолизу 0,5 0,5 0,51,5 0,5 0,5 0,5 1 ,0 - 1 ,0 - 1,00,5 0,5 0,50,5 0,5 0,5 0,50,5 :4000 1:8000 1:16000 Таблица 2 по 50% Гипоксически-травматическая 12,5 энцефалопатия

5-7

То же 30

1

5-7 30

1

5-7 30

1

5-7 30

Таблица 3

10,2 То же

10,

10, 1 10,4 30,2

62,5 Травматическая энцефалопатия

37,9 То же

48,9

60,6 - 49,4 То же 55,6 - 70,2 Гипоксическая энцефалопатия