Способ хранения спермы осетровых рыб Советский патент 1984 года по МПК A01K61/00 

Изобретение относится к рыбоводсву и может быть использовано для искусственного разведения осетровых рыб (белуги, севрюги, стерляди, осетра и др.).

Известен способ хранения спермы осетровых рыб, при котором сперму хранят на льду при температуре 1-3°С l, .

Однако данный способ позволяет сохранить сперму незначительное вре мя, при этом ее оплодотворяющая способность снижается с первых суток хранения.

Наиболее близким к изобретению является .способ хранения спермы осе ровых рыб, предусматривающий разлив спермы в сосуды и вьщерживание ее в термостате при 1-10°сИ.

Однако известный способ не обеспечивает сохранение оплодотворяющей способности спермы.

Цель изобретения - сохранение оплодотворяющей способности спермы.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу хранения сп.ермы осетровых рыб, предусматривающему разлив спермьт в сосуды и вьщерживание ее в термостате при температуре 1-10°С, сперму разбавляют защитным раствором в соотношении 1:1, полученную смесь разливают в сосуды слоем 2-10 мм, а в процессе выдерживания через термостат продувают воздух со скоростью 0,004-0,4 объема камеры в 1 ч.

Кроме того, целесообразно включить в защитный раствор воду, трис.цитратный буфер рН 7,9-8,2, моногидрофосфат натрия, глюкозу, бычий сывороточный альбумин, стрептомицина сульфат и гидрокарбонат натрия приследующем соотношении компонентов , мае.% :

Трис-цитратный

буфер рН 7,9-8,2 0,15-6,5

Моногидрофосфат

натрия. 0,5-3,0

Гидрокарбонат

натрия0,3-2,0

Глюкоза0,3-3,6

Бычий сывороточный

альбумин0,005-0,1

Стрептомицина

сульфат0,001-0,01

ВодаОстальное

Способ осуществляется следующим образом.

Сперму -охлаждают до 1-10 С со скростью 4-6 /мин и смешивают 1:1 с защитным раствором, имекяцим такую ж температуру. Раствор готовят на речной воде. Сперму, смешанную с раствором, разливают в плоские сосуды слоем 2-10 мм и устангшливцют в термостат с температурой 1-10 С. Термостат продувают воздухом со скоростью 0,004-0,4 объема камеры в 1

Для смешивания спермы берут защитный раствор при следующем соотношении компонентов, мае. % :

Трис-цитратный

буфер рН 7,9-8,2 0,15-6,5

Моногидрофосфат натрия0,5-3,0

Гидрокарбонат

натрия0,3-2,0

Глюкоза0,3-3,6

Бычий сывороточный альбумин 0,005-0,1

Стрептомицина

сульфат0,001-0,01

ВодаОстальное

Смешивание спермы с защитным раствором производят в соотношении 1:1, которое выбрано потому, что пр изменении соотношения в сторону увечения содержания спермы концентрация добавок, входящих в раствор,становится недостаточной дл сохранения оплодотворяющей способнос спермы, а увеличение концентрации добавок в caivioM защитном растворе изменяет его осмотичность и тем самым делает его непригодным для использования.

Увеличение разбавления спермы защитным раствором приводит к неоправданному увеличению расхода реактивов и габаритов сосудов для хранения спермы, причем сохранность спермы при этом не повышается.

В процессе хранения спермы через термостат продувают воздух, что необходимо для обеспечения нормального дыхания спермы в процессе ее хранения.

При недостаточной продувке в сперме из-за накопления углекислоты происходит закисление спермиев и даже их гибель.

При излишне интенсивной продувке наряду с подсыханием спермы возникае опасность развития губительных для клеток спермы процессов перекисного окисления. .

Широкий предел расхода воздуха при продувке объясняется универсальностью способа, предусматривающего как очень плотную загрузку сосудами со спермой (в этом случае необходим продувка до 0,4 объема камеры в 1 ч так и минимальную загрузку, например 1 сосуд (чашка Петри) на 200литровый термостат (при этом вполне достаточна продувка 0,004 объема камеры в 1 ч).

Воздух,используемый для продувки через термостат, должен содержать кислород не ниже нормального атмосферного уровня, температура его должна быть снижена до температуры хранения, а его относительная влажность охлаждения должна быть не ниже 70%. Высота слоя спермы в сосуде 210 мм обусловлена необходимостью нормального газообмена и может колебаться для разных видов осетровых рыб. Так, например, для спермы белуги и севрюги наилучшие результаты получаются при высоте слоя 5 мм, а для осетровых русского и персидского видов высота слоя 10 мм еще не сказывается значительно на результатах хранения. Высота слоя 10 мм является граничной для всех видов осетровых .рыб и увеличение ее приводи.т к развитию значительной гипоксии при хранении ( независимо от интенривности продувки термостата). , При снижении высЬты слоя спермы ниже 2 мм к сперматозоидам поступает повышенное количество кислорода и развивается гипероксия, при этом происходит защелачивание спермы (двиг, 0,5-0,6 рН) за счет активизации внутриклеточного окисления, что приводит к гибели сперматозоидов, и создаются условия для развития перекисного окисления липидрв tB сперме, что также небезопасно для нее. Кроме того,сперма при хранении разделяется на два слоя: слой осев ших на дно клеток и плазму. Если влажностный режим во время хранения несколько смещается, плазма либо испаряется, либо обводняется, проис ходит изменение ее осмотического да ления, которое при значительном сме щении может вызвать гибель клеток. Однако при высоте слоя 2 мм изменение осмотического давления не является губительным, так как слой клеток остается згицищенным-слоем плазм Пример. 50 смспермы белу ги ( Huso boso L ) с активностью 80% смешивают с 50 см раствора, содержащего , %: трис-цитратного буфера рН 7,9 0,15; моногидрофосфата натрия 0,50; гидрокарбоната натрия 0,3; глюкозы 0,3; бычьего сывороточного альбумина 0,0050; стрептомицина сульфата 0,001 и остальное речная вода. После перемешивания смесь разливают в сосуды слоем .2 мм и помещают в термостат с температурой , через который продувают воздух со скоростью 0,004 объема камеры термостата в 1 ч. Через 5 су хранения активность спермы 60%, опл дотворякяцая способность 70%. П р и м е р 2. 30 см спермы осетра (Acipehser gvlldenstedtiBran с активностью 75% смешивают с 30 см раствора, содержащего, %: трис-цитратного буфера рН 8,2 6,5; моногидрофосфата натрия 3; гидрокарбоната натрия 2; глюкозы 3,6; бычьего сывороточного альбумина 0,1; стрептомицина сульфата 0,001 и- остальное речная вода. Смесь разливают в сосуды слоем 10 мм и помещают в термостат с температурой . В процессе хра- нения производят продувку камеры термостата воздухом со скоростью 0,4 объема камеры в 1 ч. Через 5 сут активность спермы 65%, оплодотворяющая способность 72%. Примерз. Сперму севрюги (Acipenser stellatus. Pallas) с активностью 90% в количестве 100 см смешивают, с, 100 см раствора, содержа- щего, %: трис-цитратного буфера рН 8,0 0,75; моногидрофосфата натрия 1; гидрокарбоната натрия 1,5; глюкозы 1,8; бычьего сывороточного альбумина 0,01; ст рептомициНа сульфата 0,005 и остальное-речная вода. .Смесь разливают в сосуды слоем 5 мм и помещают в термостат с температурой 4°С, через который продувают воздух со скоростью 0,1 объема камеры тер- мостата в 1 ч. Через 5 сут хранения активность спермы 75-80%, оплодотворяющая способность 92%. П р и м ё р 4. Сперму белуги (Huso huso 1) с активностью 80% в ко.пичестве 30 см смешивают с 30 см IpacTBOpa, содержащего, %: трис-цитратного буфера рН 8,0 0,3; моногидрофосфата натрия 1; гидрокарбоната натрия 1; глюкозы 2; бычьего сывороточного альбумина 0,01; стрептомицина сульфЪта 0,01 и остальное речная вода. Смесь разливают в сосуды слоем 1 мм, помещают в термостат с температурой 5°С и продувают воздухом со скоростью 0,05 объема камеры в 1 .4. Через 72 ч хранения наступает гибель спермы в результате частичного высыхания смеси. ,, П р и ме р 5.70 см спермы осетра (Acipenser duldenstSdti Brandt) с активностью 90% смешивают с 70 см раствора, содержащего, %: трис-цитратного буфера с рН 8,0 2; моногидрофосфата 0,8; гйдрокарбоната натрия 1,5; глюкозы 0,5; бычьего сывороточного альбумина 0,05; стрептомицина сульфата 0,01 и остальное - речная вода. Смесь разливают в сосуды слоем 3 мм и помещаю в теЕ 1рстат при температуре с интенсивностью продувки воздухом 0,1 объема камеры в1 ч. Через 40 ч отмечается гибель клеток спермы. Примерб. Сперму севрюги (Acipenser, stellatus Pallas)-с aftтивностью 80% в количестве 50 см I смешивают с 50 см раствора, содер жащего, %; трис-цитратного буфера рН 8,0 5; моногидрофосфата натрия 1,2 глюкозы 3; бычьего сывороточного альбумина 0,01; стрептомицина сульфата 0,01 и остальное - речная вода. Смесь раз лив ajO,T. слоем 13 мм и помещают в термостат при,температуре ,7. Термостат продувается воздухом со скоростью О,01 камеры в 1 ч. Через 100 ч сперма погибает от недостатка кислорода на дне сосуда под слоем плазмы. Пример. 100 см спермы белуги (Huso huso ) с активность 90% смешивают с 100 см раствора, имеющего в своем составе, %: трисцитратного буфера рН 8,0 0,3; моно гидрофосфата натрия 1; гидрокарбоната натрия 1; глюкозы 2; бычьего сывороточного альбумина 0,1; стреп томйцина сульфата 0,01 и остальное речная вода. Смесь разливают в сосуды слоем 5 мм и помещают в термо тат с температурой 5°С, который продувается воздухом со скоростью 0,002 объема камеры в 1 ч. Через 5 сут активность спермы 20-25%, оплодотворяющая способность 22%. Снижение рыбоводных качеств вызван теми же причинами, что и в примере 6. Примере. Сперму севрюги (Acipenser stellatus Pallas) с активностью.75% в количестве 50 см смешивают с 50 см раствора, содер жащего, %: трис-цитратного буфера рН 8,05; моногидрофосфата натрия 2,5; гидрокарбоната натрия 0,7; .глюкозы 0,2; бычьего сывороточного аль.бумина 0,01; стрептомицина суль фата 0,01 и остальное - речная вод Смесь, разлитую в сосуды слоем 4 м помещают в термостат. Температура хранения 3-С, скорость продувки во духом 0,07 объема камеры в 1 ч. Че 5 сут активность спермы составляет 40-45% оплодотворяющая способность 47%. Ухудшение рыбоводных качеств вызвано недостатком глюкозы. Пример 9. 50 см спермы осетра (Acipenser guldenstadti Brandt) с активностью 80% смешиваю с 50 см раствора, имеющего в сост ве, %: трис-цитратного буфера рН 8,0 0,05; моногидрофосфата натрия гидрокарбоната натрия 2; глюкозы 3,6; бычьего сывороточного альбуми 0,1; стрептомицина сульфата 0,01 и остальное - речная вода. Смесь разливают в сосуды слоем 4 мм и помещают в термостат с температурой 10i°c, продувая воздух со скоростью 0,4 объема камеры в 1 ч. Через 5 сут активность спермы 25%, оплодотворяю-. щая способность 17%. Низкие рыбоводные качества объясняются защелачиванием спермы при хранении вследствие недостаточной буферной емкости защитного раствора.. Пр и м е р 10. Сперму севрюги (Acipenser stellafcus Pallas) с активностью 90% в количестве 100 см смешивают с 100 см раствора, вк.шочающего, %: трис-цитратного буфера рН 7,5 0,15; моногидрофосфата натрия 0,5; гидрокарбоната натрия 0,3; глюкозы 0,3; бычьего сывороточного альбумина О,005;стрептомицина сульфата 0,001 и остальное - речная вода. Смесь разливают в сосуды слоем 3-мм и помещают в термостат с температурой 2 С, который продувается воздухом со скоростью 0,1 объема камеры в 1 ч.Через 5 сут отмечена единичная активность спермиев, оплодотворяющая способность отсутствует. Ввиду низкого рН (7,5) защитного раствора сперма частично активирована и теряет свои рыбоводные качества. . Пример 11. 100 см спермы белуги (AUSO huso 1), имеющей активность 80%, смешивают с 100 см раст-: вора, содержащего, %: трис-цитратного буфера 0,3; моногидрофосфата натрия 1; гидрокарбоната натрия 1; глюкозы 2;-бычьего сывороточного альбумина 0,1; стрептомицина сульфата 0,0001 и остальное - речная вода. Смесь разливают в сосуды слоем 5 мм . и помещают в термостат, где поддерживается температура 9с и производится продувка воздухом со скоростью 0,006 объема камеры в ч. Через 100 ч сперма погибает в результате раз- . вития микрофлоры. Предлагаемый способ позволяет удлинить пережи.ваемость спермы до 5 дн с сохранением ее оплодотворяющей способности почти до 100%.Это дает возможность транспортировать сперму с одного рыборавводного предприятия на другое, обеспечить ритмичность работы этих предприятий, сократить количество производителей путем более полного использования сперМы.

1. СПОСОБ ХРАНЕНИЯ СПЕРМЫ ОСЕТРОВЩ РУБ, предусматривающий разлив спермы в сосуды и. выдерживание ее в термостате при температуре 1-10°С, о т л и ч а ю щ и и.с я .тем, что, с целью сохранения оплодотворяющей способности спермы, посI леднюю разбавляют защитным раствором в соотношении 1:1, полученйую смесь разливают в сосуды слоем 2-10 мм, а в процессе выдерживания через термостат продувают воздух со скоростью 0,004-0,4 объема камера в 1ч. . 2. Способ по п.1, отличающийся тем., что защитный раствор содержит воду, трис-цитратный буфер рН 7,9-8,2, моногидрофосфат натрия, глюкозу, бычий сывороточный альбумин, стрептомицина сульфат и гидрокарбонат натрия при следующем соотношении компонентов, мае.4: Трис-цитратный буфер рН 7,9-8,2 0,15-6,5 Моногидрофосфат 0,5 -3,0 натрия Гидрокарбонат 0,3 -2,0 натрия 0,3 -3,6 Глюкоза Бычий сывороточный альбумин 0,005-0,1 Стрептомицина 0,001 -0,01 сульфат Вода Остальное