Способ определения показателя сферичности эритроцитов Советский патент 1985 года по МПК G01N15/14 

N

о со Изобретение относится к спектрофстометрии крови и может быть исполь зовано для диагности в гематологии. Известен способ определения параметра сферичности водных суспензий, основанный на освещении суспензии коллимированным пучком света, измере mm яркости рассеянного частицами из лучения поя двумя углами У 140 и 90° D. Недостатком данного способа яв ляется его применимость только к суспензиям, у которьк действительная часть показателя преломпения лежит в интервале П 1,1-1,15, что делает его неприемлемым для эритроцитов, у которых П 1,07. Известен способ определения показателя сферичности частиц р , основа нцьй на измерении логарифг ческой производной яркости по углу, в интервале углов 135-140 2. Недостатком указанного способа является его сложность, заключающаяся в необходимости перемещения прием ника рассеянного излучения, в углах 135-140 с высоким угловым разрешением для определения логарифмической производной яркости По углу. При недостаточном угловом разрешении возрастает погрешность измерений. Необходимость измерения малых световых потоков по сравнению с падающим и {превышение над фоном не более 10 раз в,.углах 135-140такж.е увеличивает погрешность измерений. Недостатки, связанные со сложностью и погрешностями, делают способ неприемлемым для широкого использования в гематологии Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является способ определения показателя сферич ности эритроцитов, основанный на раз ведении цельной крови, помещении суспензии эритроцитов в две кюветы, создании ламинарного потока в одной из кювет, освещении их излучением длиной волны 415 нм,, где эритроциты имеют максимум поглощения, определении по показателям поглощения оптических плотностей двух кювет в одной из которых эритроциты находятс в состоянии покоя, а в другой направ ленно движутся в потоке, и определении среднего значения показателя сфе ричности эритроцитов р по Гз . Недостатком известного способа является его сложность, связанная с необходимостью обеспечения ориентации эритроцитов в одной из кювет, а также погрешность порядка 5% в определении оптической плотности, возникающая за счет фотохимических реакций при облучении светом с 415 нм ввиду образования дериватов гемоглобина. Кроме того, при создании ламинарного потока происходит деформация эритроцитов и их разрушение. Цель изобретения - упрощение способа и повышение точности измерений. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения показателя сферичности эритроцитов, основанному на разведении цельной крови, освещении суспензии коллимированным пучком света, регистрации световых потоков излучения прошедших через суспензию,регистрируют в телесном угле 2,4 минимальное значение светового потока, проведшего через суспензию в спектральном интервале 450-800 нм до и после введения в суспензию вещества, формирующего эритроциты в сферу без изменения их объема, а затем по отношению измеренных минимальныхзначений световых потоков судят об искомой величине. При регистрации минимального прошедшего светового потока через суспензию эритроцитов, определяемой физической величиной является показатель ослабления : где Б толщина слоя суспензии; падающий световой поток излучения ; прошедший минимальньш световой поток излучения; в одной из длин волн в спектральном интервале 450-800 нм. В данном случае ,, („ Ро. i Фог ,g-en- ;HS2 g6n-, где Ct - показатель ослабления светового потока Фд| при прохождении его через слой толщины В суспензии эритроцитов; показатель ослабления светоВОГО потока Ф при прохождении его через слой толщины суспензии эритроцитов с добавкой вещества, формирующего эритроциты в сферу; 1 - минимальное значение светового потока, прошедшего че рез суспензию эритроцитов; Tj- шнимaльнoe значение светового потока, прошедшего через суспензию эритроцитов с добавкой вещества, формирукмцего эритроциты в сферу. Отсюда следует, что . ег.о,/ф, . . 2 бп ог/ср,, Цспользуя г 1адуиройочный график зависимости -т.-(р), полученной контрольным способом, определяют показатель сферичности эритроцитов р. Выбор спектрального интервала 450-800 нм обусловлен тем, что возможные шнимальные значения светового потока , и Рз прошедшего через суспензию зритро1.щтов с разли ными значениями показателя сферичности р до и после введения в нее вещества, формирующего эритроциты, в угле 0 б $ 2,4 , находятся в спектральной области 450-800 нм, а следовательно, ввиду слабости полос поглощения функциональные взаим ные превращения гемоглобина эритроцитов несущественны и не вносят погрешности при определении р. Угол приема ,4 10 ср обеспечивает измерение показателя ослаб ления & прошедшего излучения в указанном спектральном интервале с минимальной погрешностью (1-2%), возн кающей, в основном, за счет вклада рассеянного вперед излучения, чем и определяется точность измерения показателя сферичности р эритроцитов 1-2%. . Б качестве вещества, формирующег эритроциты в сферу без изменения их объема, используют лецитин, в качестве разбавителей mTa3Nry или фи зиологический раствор, что гарантирует неизменность формы эритроцитов при 18-22°С. На фиг.1 изображен градуировочны график; на фиг.2 - график спектраль ной зависимости отношений световых потоков для эритроцитов с раз пличными показателями сферичности. На градуировочном графике (фиг.1 определяют показатель сферичности эритроцитов р по величине отношения 1 1.4 показателей ослабления 1 для соответствующих минимальных значений световых потоков Рдим прошедших через суспензию эритроцитов () и суспензию с добавлением лецитина (Pj), При построении градуировочного графика значения показателя сферичности р , равного отношению максимального размера эритроцита к минимальному, определяют микроскопическим способом. Определяют средний диаметр дискообразных эритроцитовdrf затем сферических Jc(p и на основе равенства их объемов определяют среднее значение показателя сферичности эритроцитов На фиг.2 показано совпадение значений Pf /9д и г Лпя эритроцитов (точки) с соответствукнцими значением р и сплюснутых эллипсоидов вращения (сплошные линии). Пример. Определяют показатель сферичности эритроцитов, исполь-зуя три различных пробы крови человека. Измерения проводят при 18-22 С. Цельную кровь разводят в 2000 раз физиологическим раствором, помещают в плоскую кювету толщиной о 1 см. Суспензию освещают коллимфованным пучком света (угол расходимости источника 2,410 ср, дисперсия монохроматора 50 А/мм ).Измеряют световой поток прошедшего излучения в телесном угле 2,4«10 ср в спектральном интервале 450-800 нм, регистрируют минимальное значение прошедшего светового потока 1 . Затем в кювету добавляют лицитин в количестве 30 мг/л и повторяют измерения, регистрируя минимальное значение прошедшего светового потока -Р По отношению измеренных минимальных значений световых потоков Ф, (3( P /Pflz определяют отношение показателей ослабленияё, по градуиовочному графику находят показаель сферичности эритроцитов р . В таблице приведены эксперименальные результаты определения длярех проб крови человека. Использование предлагаемого способа позволяет упростить определение показателя сферичности .о эритроитов, а также повысить точность змерения в 2-5 раз важного диагнос ического параметра крови.

0,66 0,8А6 0,96

1,2 1,65 1,38

е,/Ег

Продолжение таблищл Образец

Показатели

J.IZII

5

р2,6 53,7

р(контроль) 2,5 4,6 3,5

10

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЯ СФЕРИЧНОСТИ ЭРИТРОЩГГОВ, основанный на разведении цельной крови, освещении суспензии коллимированным пучком света, регистрации световых потоков излучения, прошедших через суспензию, о тли чающий ся тем, что, с целью упрощения способа и повьппения точности, регистрируют в телесном угле О ; Q : 2,4 10 ср минимальное значение светового потока, прошедшего через суспензию в спектральном интервале 450-800 нм до и после введения в суспензию вещества, формирующего эритроциты в сферу без изменения их объема, а затем по отношению измеренных минимальных (Л значений световых потоков судят об искомой величине.

Вг

Г

Ю

Фиг.1

NI to