Способ получения иммуностимулятора Советский патент 1985 года по МПК A61K35/30 

00

vj

00 bsD 4

Изобретение относится к медицинской промьшшенности и касается способов получения биологически активных веществ из животного сырья, в частности веществ, обладающих иммуностимулиру ощим действием.

Цель изобретения - повышение специфической активности целевого продукта.

Пример .Берутлимфатические узлы животных, удаляют жировой слой, обрабатывают ацетоном с температу5°С

20 ч, заморалсивагот при -20 С

рой 0,5 кг лимфатических узлов измельчают на волчке, загружают в реактор с мешалкой и заливают 5 л 3%-ного раствора уксусной кислоты. Туда же добавляют 0.005 кг хлористого цинка и экстрагируют 24 ч, перемешивая 1 ч через каждые 8ч.

По окончании экстракции субстрат сливают и центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную кидкость декантируют, к ней добавляют ацетон (I часть элюата и 10 часте ацетона)j перемешивают и формируют оса./ток в течение 20 ч, Выпавитй осадок Б леушивают, измельчают и растворют 0,01 кг осадка в 0,5 л воды при ,0 (экстрагент - 1%-ньш раствор уксусной кислоты), Экстракцию проводят 4 ч. Удаляют балластные вещества путем фильтрации, В прозрачньй раствор добавляют уксусной кислоты до ,0, Раствор стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы так, чтобы в калсдом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют.

Выход активного вещества из исходного сырья составит 0,005 кг,

II р и м е р 2, Берут лимфатически узлы лсивотных, промывают и обрабатывают ацетоном с температурой в течение 18 ч. Ацетон удаляют и сырье замораживают при t -20 С,

Берут 1 кг лимфатических узлов, измельчают. Измельченное сырье загружают в реактор с мешалкой и заливают 10 л 3%-ного раствора уксусной кислоты, туда же добавляют0,01 кг хлорис того цинка и экстрагируют 28 ч, перемешивая 1 ч через каждые 8 ч.

По окончании экстракции -субстрат сливают и центрифугируют в течение 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон при 18°С в соотношении 1:10 (1 часть элюата

и 10 частей ацетона), перемешивают и формируют осадок в течение 18 ч, Выпавший осадок высушивают фильтрованием, измельчают и растворяют 0,02 кг в 1 л воды при ,0 (экстргент - 1%-ный раствор уксусной кислоты) , Экстракцию проводят 3 ч при непрерьшном перемешивании, фильтруют После удаления балластных веществ в прозрачный раствор добавляют уксусной кислоты до ,0, Раствор .стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют. Выход активного вещества из исходного сырья составляет 0,01 кг,

П р и м е р 3, Подготавливают сырье - лимфатические узлы животных, и обрабатывают его ацетоном с температурой 24 ч, ацетон удаляют и замораживают при t -20°C, Берут 10кг лимфатических узлов, измельчают. Измельченное сырье помещают в реактор с мешалкой и заливают 100 л водного раствора.3%-ной уксусной кислоты, добавляют 0,1 кг хлористого цинка и экстрагируют 36 ч при беспрерывном перемешивании в течение часа через каждые 8 ч.

По окончании экстрагирования субстрат отделяют и центрифугируют его в течение 20 мин со скоростью 3000 об/мин, Надосадочную жидкость декантируют, к ней добавляют ацетон в соотношении 1:10 (на 1 часть элюата 10 частей ацетона), перемеигивают и формируют осадок 24 ч. Выпавший осадок в количестве 0,2 кг высушивают фршьтрованием, измельчают и растворяют в 2 литрах воды, подкисленной до ,0 уксусной кислотой.

Проводят экстракцию при непрерывном перемешивании 3 ч, удаляют балластные вещества путем фильтрации, В отфильтрованный раствор добавляют уксусной кислоты до ,0, Раствор стерильно фильтруют через пластины EKS,, разливают во флаконы по 10 мг в каждый и лиофилизируют. Выход активного вещества, полученного предлагаемым способом, относительно используемого сырья составит 0,1 кг,

Биологическую активность вещества, вьщеленного из лимфатических узлов, оценивают следующим образом.

Животных, морских свинок, самцов весом 200-250 г разделяют на 2 группы - опытную и контрольную по 25 шту в каждой. Опытным животным вводят по 1 мг биологически активного вещества, полученного из лимфатических узлов, растворенного в 0,5 мл физиологического раствора. Вещество вводят внутримышечно в течение А дней ежедневно. Контрольным животным вводят по 0,5 мл физиологического раствора по аналогичной схеме. На пятые сутки всех животных забивают, вьделяют тимус, селезенку и лимфатические узлы, определяют в них удельную концентрацию лимфацитов (удельная концентрация - это количество клеток в тысячах на 1 мг ткани).

Результаты исследований отражены в таблице.

Орган

Введение вещества, полученного из лимфатических узлов, приводит к значительному увеличению лимфоцитов во всех органах иммунной системы в среднем в 1,5-2 раза.

Вещество, полученное из лимфатических узлов, представляет собой комплекс низкомолекулярных белковых веществ. При изучении токсичности обнаружено, что вещество не обладает в терапевтических дозах no6o4HiiO4 эффектом. Вещество может быть использовано в качестве иммуностимулятора с высокой биологической активностью.

Удельная концентрация (тыс, /мг) клеток в органах иммунной системы

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛЯТОРА, включающий замораживание сырья, измельчение, экстрагирование 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрование, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и выделение целевого продукта, отличающ и и с я тем, что, с целью повышения специфической активности целевого продукта, в качестве сырья используют лимфатические узлы животных, а сьфье перед заморозкой обрабатывают ацетоном.

Тимус

239 546 ±36 0,01