Способ определения степени агрегации тромбоцитов Советский патент 1986 года по МПК G01N33/80 

11

Изобретение относится к методам определения агрегационной активности тромбоцитов при ее индуцирований аг- регирую11 ими агентами, применяемыми в лабораторной практике в области физиологии и биохимии свертывания крови с исследовательскими vi клиническими целями.

Целью изобретения является повьш ние точности и специфичности способа за счет измерения степени агрегации тромбоцитов, обусловленной действием эндогенных стимуляторов.

Кровь из вены jugu faris здоровых крыс (п-21) с массой 200 г берут в объеме 4 мл шприцем с 3,8%-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9:1 соответственно в силиконированны пробирки. Путем центрифугирования при небольшом числе оборотов (800 об/мин в течение 8 мин) получают плазму, обогащенную тромбоцитами, с числом тромбоцитов 250000/мм , Плазму, обогащенную тромбоцитами,, помещают в пластиковую пробирку с несмачиваемой поверхностью.

Стандратный тромбопластин из мозга крыс готовят по методу П.Д. Улити ной и Б.А. Кудряшова (1948). Для этого 1 г мозговой ткани при медленном добавлении 10 мл 0,85%-ного раствора NaC; растирают в ступке. Полученную тонкую суспензию тромбопластйна затем прб ревают 14 мин при 57-58 С и перед использованием центрифугируют (2000 об/мин в течение 20 мин) для удн-пения твердых частиц. Полученный тромбопластин хранят в холодильнике при 4°С. Используют надосадочную.жидкость. Свертывающая активность тром- бопласти на, определяемая при 37°С в реакции: 0,1 мл тромбопластйна + + 0,1 мл 0,025 М раствора + +0,1 мл крысиной плазмы, составляет 14,.

К 0,9 мл термостатированной при 37 с плазме крыс, обогащенной тромбоРедактор Л. Гратилло

Составитель Я. Артюшина

Техред О.Сопко Корректор М. Максимишинед

Заказ 3390/44Тираж 778 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

.Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

9602I

цитами и имеющей оптическую плотность 0,80 (измерение производят на ФЭК-2К или на нефелометре при зеленом светофильтре в кювете с поперечным сече-

нием 1,003 мм), добавляют. 0,08 мл стандартного тканевого крысиного тромбопластйна и 0,08 мл 0,220%-ного раствора СаС.. Образец тотчас после добавления смеси перемешивают на маг0 нитной мешалке, стержнем с несмачивае- кой поверхностью со скоростью 800 об/мин. С 10-ной по 15-ю мин после добавления смеси и пер мешива- ния определяют оптическую плотность

5 образца. Максимальное ее снижение составляет 0,38 на 15 мин после до- бавленрш смеси. Индекс (И) агрегации рассчитьтают при соотношении исходной оптической плотности к

0 величине при максимальном ее снижении, И 2,09,,Формула изобретения

5 Способ определения степени агрегации тромбоцитов в термостатированной плазме крови, обогащенной тромбоцитами, путем добавления стимуляторов с последующим перемешиванием и опредеQ лением степени агрегации тромбоцитов по максимальному снижению оптической плотности образца, отличаю- .щ и и с я тем, что, с целью повьше- ния точности и специфичности способа за счет измерения степени агрегации тромбоцитов, обусловленной действием эндогенных стимуляторов, в качестве стимулятора используют гомологичный тканевой тромбопластин, при этом к 0,9-1j1 мл цитратной плазмы добавляют смесь., состоящую из 0,08-0,11 мл тромбопластйна и 0,220-0,300% раствора хлористого кальция взятых в соотношении 1:1, а регистрацию оптичес- кой плотности образца проводят с 10-ой по 15-ю мин после добавления смеси.

5

40

Изобретение относится к способам определения степени агрегации тромбоцитов при ее индуцировании агрегирующими агентами. Цель изобретения повышение точности и специфичности способа за счет измерения степени агрегации тромбоцитов при использовании в качестве стимулятора тканевого тром- бопластина. К 0,9-1,1 мл цитратной плазмы добавляют смесь, составляющую из 0,08-0,11 мл тромбопластина и О,220%-0,300% раствора хлористого кальция, взятых в соотношении 1:1. Образец после добавления смеси перемешивают. С 10-ой по 15-ю мин после перемешивания смеси определяют оптическую плотность образца. Индекс агрегации рассчитывают по соотношению исходной оптической плотности к величине ее максимального снижения. с € ю со со