Способ диагностики гломерулонефрита у детей Советский патент 1986 года по МПК G01N33/68 

Язобретеиие относится к медицине точнее к нефрологии.

Цель изобретения - повышение точности при ди11к})еренциальной диагностике нефрот{гческой и смешанной форм гломерулонефрита (ГН) с помощью оценки степени нарушения проницаемости гломерулярных мембран за счет определения активности в моче холин эс-еразы.

Способ осутцествляют следующим образом,

Для исследования используют разовую порцию мочи, которую подвергают предварительному центрифугированию (5 мин, 3000 об/мин) и двухчасовому диализу с помощью диализных лешочков (1 мл мочи на 2Л мл физиологического pacTriopa). Определение активности холинэстеразы (ХЭ) мочи проводят известньом оптимизированным кинетическим методом. Для проведения одного исследования берут 1, J мл 50 мМ фосфатного буфера, содержащего 0,2А мл 5,5-дитио-бис- -(2-нитробензойная к-та), рН 7,2 и добавляют 0,05 мл предваритель- ; но подготовленной мочи, размешивают подогревает до 37 С. После этого добавляют О,1 мл субстрата бутирил- тиохолиниодид (готовят из расчета 24,4 мг на 1 мл дистиллированной воды), размешивают и производят измерение или оптимизированным кинетическим методом на аппарате ЛКБ, или на приборе Спектроник при А05 нм. Расчет активности ХЭ мочи Проводят на 1 ммоль креатинина данной порции мочи и выражают в Е/ммол креатинина. Определение креатинина в моче проводят на приборе ФЭК при 500-510 нм. Определение проводят следующим образом: в 3 кюветы добавляют по 0,5 мл цветного реактива (9ч. пикриновой кислоты и 1 ч гидр оксида натрия), затем в первую кювету добавляют 1,0 мл дистиллированной воды (контрольная проба), во вторую - 1,О мл стандартного раствора (10 ммоль/л, стандартная проба), в третью - 1,О мл исследуемой мочи, предварительно разведенной в 500 раз дистиллированной водой; пробы перемеишвают, инкубируют 20 мин при комнат11ой температуре. Измеряют абсорбцию креатинина мочи по отношению к контрольной и стандартной кюветам.

5

0

5

0

5

0

5

0

5

При нефротической форме ГН повреждение гломерулярной мембраны минимально и активность ХЭ мочи 0,6- 9,0 Е/ммоль креатинина, при смешанной форме ГН отмечается выраженное нарушение проницаемости клубочко- вой мембраны, активность ХЭ мочи колеблется от 15,0 до 49,0 Е/ммоль креатинина.

Пример 1 . Больной К., 1974 года рождения. Клинический диагноз: ГН, смешанная форма, непрерывно рецидивирующее течение, А III, ,

Болен 4 года. Заболевание началось остро, через 7 дней после перенесенной ангины в виде общих оте- ков, гипертенэии (АЛ до 180/140), смешанного мочевого синдрома в виде протеинурии, микрогематурии и лейко- цитурии. Заболевание носило прогрессирующий характер. При поступлении состояние тяжелое, выражен общий отечный синдром, гипертензия. В крови выявлена гипопротеинемия, диспротеинемия в виде гипер-а,-гло- булинемии и гиперлинидемии, отмечалось повышение азота мочевины до 28 ммоль/л и снижение клиренса эндогенного креатинина до 0,63 мл/с. Суточная потеря белка в моче колебалась от 3,3 до 33 г. Селективность протеинурии проводилось электрофоре- тическим методом на бумаге. У ребенка протеинурия этим методом определена как селективная. Параллельно проводят исследование активности ХЭ мочи оптимизированным кинетичес- KRM методом. Для исследования используют разовую порцию мочи, собранную с 8 до 9 ч утра. В течение 5 мин мочу подвергают центрифугированию при 3000 об/мин. В течение 2 ч 2 мл мочи подвергают диализу с помощью диализных мешочков против физиологического раствора. Затем к 1,0 мл 50 мМ фосфатного буфера, содержащего 0,24 мл 5,5-дитио-бис-(2-нитробензойная к-та), рН 7,2 добавляют 0,05 мл диализированной мочи, размешивают, подогревают до 37 с. После этого добавляют 0,1 мл субстрата бу- тирилтиохолиниодид (готовят из расчета 24,4 мг на 1 мл дистиллированной воды), размешивают и проводят измерение при 405 нм на приборе ЖБ. Параллельно проводят определение креатинина в данной порции мочи. Для

этого в 3 кюветы добавляют по 0,5 м цветного реактива (9 частей пикриновой кислоты и 1 часть гидроксида натрия), затем в первую кювету добаляют 1,О мл дистиллированной воды во вторую - 1,0 мл стандартного раствора и в третью - 1,0 мл исследемой недиализированной мочи, предварительно разведенной в 500 раз дистиллированной водой. Пробы перемеши вают, инкубируют 20 мин при комнатной температуре. После этого измеряют абсорбцию креатинина мочи по отношению к контрольной и стандартной кюветам на приборе ФЭК при 500- 510 нм . Расчет активности ХЭ мочи проводят у ребенка на ммоль креатинина данной порции мочи. Активность достигает А8 Е/ммоль креатинина (норма 0,1 ±0,01 Е/ммоль креатинина Таким образом у ребенка выявлено резкое нарушение проницаемости гло- мерулярного Фильтра, что соответствовало клинико-лабораторной картине заболевания. Очень высокие цифры активности ХЭ указывали на неблагоприятное течение заболевания что подтвердилось в дальнейшем прогрессирующим течением заболевания, которое закончилось летальньм исходом.

Предлагаемый способ диагностики по сравнению с известным характеризуется большей точностью.

Пример 2. Больной А., 1968 года рождения. Клинический диагноз: ГН, смешанная форма, волнообразное течение. А II, .

Болен 13 лет. Заболевание началось остро через 2 недели после пе- ренесенной пневмонии в виде мочевого синдрома, который с самого начала носил смешанный характер, отмечался выраженный отечный синдром и гипертензия (АД до 180/120). Заболе- вание носило прогрессирующий характер. При поступлении в клинику состояние тяжелое, выражен отечный синдром, гипертензия. В крови выявились гипопротеинемия, диспротеинемия в виде гепер-а -глобулинемии, ги- перхолестеринемии, отмечалось повышение азота мочевины и снижение клиренса эндогенного креатинина до 0,72 мл/с. Суточная потеря белка с мочой колебалась от 3,8 до 14 г. Определена селективность протеину- рии электрофоретическим методом

5 О 5 20 25 30

0 5 0 5

5

селективная. Исследование активности ХЭ мочи, проведенное предлагаемым методом, выявило умеренно выраженное нарушение проницаемости гломеруляр- ного фильтра - 15 Е/ммоль креатинина (норма 0,1 ±0,01 Е/ммоль креатинина). Морфологическое исследование почечной ткани показало, что у ребенка имеет место мембрано-пролифера- тивный ГН с фокальным гломеруло- склерозом и тубулеинтерстициальным компонентом. Таким образом, выявленное умеренное нарушение проницаемости гломерулярного фильтра предлагаемым способом более адекватно отражает морфологические изменения а почечной ткани по сравнению с известным .

Пример 3. Больная А., 1969 года рождения. Клинический диагноз: ГН, нефротическая форма, А III ПН а,

Больна 2 года. Заболевание развивалось постепенно с появления отека и протеинурии после переохлаждения. При поступлении состояние тяжелое, выражен отечньпЧ синдром. В крови гипопротеинемия, диспротеинемия в виде гипер-а -глобулинемии, гипер- холестеринемии, отмечалось повышение азота мочевины до 21,4 ммоль/л и снижение клиренса эндогенного креатинина до мл/с. Суточная потеря белка до 15,6 г, протеинурия селективного характера. Исследование активности ХЭ, проведенное предлагаемым способом, выявило умеренное нарушение проницаемости гломерулярного фильтра. Активность ХЭ не превышала 9,0 Е/ммоль креатинина.Диагностируют нефротическую форму ГН.

Пример А. Больной В., 1968 года рождения. Клинический диагноз: ГН, нефротическая Форма, А III, .

Болен 4 года. Начало постепенное с появления отеков, протеинурии. При поступлении состояние средней тяжести, вьфажен отечный синдром. В крови гипопротеинемия, диспротеинемия в виде гипер-а2-глобулинемии, гиперхолестеринемии, отмечалось повышение азота мочевины до 15,4 ммоль/л и снижение клиренса эндогенного креатинина до 1,05 мл/с. Суточная потеря белка 4,4-9,9 г, протеинурия, определена электрофоретическим ме5

годом - селективная. Исследование активности ХЭ предлагаемым способом показало, что у ребенка имеет место незначительное нарушение проницаемости гломерулярного фильтра, несмотря на высокую активность нефро- тического процесса: 0,6 Е/ммоль креатинина (норма 0,1 1 0,01).

Морфологическое исследование почечной ткани показало, что у ребенка имеет место пролиферативный мез- ангиальный и минимальный гломеруло- нефрит.

Редактор 0. Бугир Заказ 4618/46

Составитель М. Позняк

Техред В.Кадар Корректор Е. Сирохман

Тираж 778 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4

52728Ь

4 ормула изобретения;.

Способ диагностики гломерулонеф- рита у детей путем определения активности ферментов в моче, о т л изчающийся тем, что, с целью повьппения точности при дифференциальной диагностике нефротической и смешанной форм гломерулонефрита, определяют активность холинэстеразы

10 и при значении этого показателя 0,6- 9,0 Е/ммоль креатинина диагностируют нефроти гескую форму гломерулонефрита а при эначении 1 5,0-А9,0 Е/ммоль креа- тинина-смешанную форму.

Изобретение относится к нефрологии. Цель изобретения - повышение точности диагностики путем определения в моче холинэстеразы. Расчет активности холинэстераэы мочи проводят на ммоль креатинина .данной порции мочи. Определение креатинина в моче проводят на приборе ФЭК при 500-510 им следующим образом: в три кюветы добавляют по 0,5 мл цветного реактива. В 1-ю кювету добавляют 1,0 мл дистиллированной воды, во 2-ю - 1,0 мл стандартного раствора, в 3-ю - 1,0 мл исследуемой мочи. Пробы перемешивают, инкубируют. Измеряют адсорбцию креатинина мочи по отношению к контрольной и стандартной кюветам. При нефротической форме гломеруло- нефрита (ГН) активность холинэстеразы мочи 0,6-9,0 Е/ммоль креатинина. При смешанной форме ГН значение этого показателя колеблется от 15,0 до 49.0 Е/ммоль креатинина. g (О ю ел IND IS9 00