Способ определения нефротического синдрома при незначительных морфологических изменениях в клубочках у детей Советский патент 1989 года по МПК G01N33/60 

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии (раздел нефрологии) .

Цель изобретения - снижение трав- матичности и ускорение способа.

Способ осуществляется следующим образом.,

Кровь (20 мл) забирают из локтевой вень натощак, добавляют гепарин 40 ед на 1 мл крови. Транспортируют в лабораторию при 20-22 С, опыт необходимо начинать не позже 1 ч после взятия крови. Кровь разводят в отношении :2 раствором Версена (рН 7,25) при комнатной температуре, Лимфоциты выделяют по методу Воут. После центрифугирования в течение 30 мин при 400 g лимфоциты отсасывают и отмывают 3 раза в растворе Хенкса, забуференного Hepes ( рН 7,35), при 400 g по 10 мин, В мазках с окраской озур-эозином выход лимфоцитов составляет 89-95%. Готовят разведение меченного ЗН-дексаметазона в растворе Хенкса с Hepes от 1 до 10 им в объеме 5 мл. Используют меченый декса- метозон фирмы Amersham (Англия) с активностью 19,1 мкКи/мМ. В нескольких параллельных разведениях меченого гормона добавляют 500- сратный из быток немеченного дексаметозона (фирма Sigma, США). Во все разведения и контроль добавляют по 0,3 мл тщательно ресуспендированной лимфоцитарной взвеси клеток в растворе Хенкса с Hepes, после чего пробы инкубируют при 37°С через 45 мин. Через каждые 15 мин пробы встряхивают.

сл

3150

В дальнейшем опы; продогокают гфи 4°С, После центрифугирования в течение 5 мин при 400 g из супернатанта отливают по мл во флакончики, содержащие по 10 кл диоксанового сцин- rvisinaTopa, для определения свободной радиоактивности. Остальной суперна- тант сливают и осажденные лимфоциты отмывают дважды от свободи.ой радиоактивности раствором Хенкса (рН 7,4 при 4 С). В полученные интактные лимфоциты добавляют по 0,5 мл дистиллированной водьц затем клетки разрушают ультразвуком. Учитывая, что количество белка во всех пробах примерно одинаковое (проверено в нескольких опытах), белок определяют только в контроле по методу Flores, Пробы сливают в сцинтилляционные флакончики, радиоактивность измеряют на счетчике фирмы Intertechnique(Франция).

Специфическое связывание рассчи- как разницу между общим связыванием и связыванием в присутствии 500-кратного избытка немеченного гормона. По полученным данным строят .график Scathehard. Результаты выражают В пикомолях. на I мг белка.

При исследовании глюкокортикоид- цых рецепторов в лимфоцитах крови у бол гломерулонефритом удалось установить, что их количество при незначительных морфологических изменениях в клубочках существенно выше „ чем при. других морфологических типах гло- мерулонефрита..

У больных с незначительнь1ми морфологическими изменения - в клубочках В (максимальное ко.пичество мест связывания меченого дексаметазона с рецепторами) икало значение 0,46 пмоль/мг белка и более,

П ,р и м е р , Больной П, Кли- . нический диагноз: острый гломеруло- .нефрит, затяжное течение, нефротичес кая форма. Заболел в возрасте 1 лет среди полного здоровья появились отеки, лица, туловища, конечностей, асцит, протеинурия 3,3%. При обследовании через 3 мес от начала болезни в нефрологическом отделении НИИ педиатрии АМН СССР заболевание проявлялось небольшими отеками, протеинурие до 4 г сутки, гипер c tj-глобулино мией до 18,7% при общем белке крови 6,36 г%, гиперхолестеринемией(до

0

5

5

644

32.0 мг%) . Осадок мочи нормальный, ЛД 115/70-100/60 мм рт.ст.

Количество глюкокортикоидных рецепторов в лимфоцитах крови О р 4 6 пмоль/мг б ел к а.

При исследованки бичоптата почки подтверждены i-ra значите л ьн1::е изменения в клубочках. Лечениа преднизоло- ном в дозе 60 мг/сут в течение 47 дн привело к развитию полной- ремиссии забслевания - в моче белок отсутствует,, протеинограмма и холестерин крови нормалы-1Ь)е

Пример 2, Больной К, Клинический диагноз: хронический гломеру- лонефркт нефротическая форма, функции почек сохранены. Заболел в возрасте 3 лет, после повторной пневмо- 0 НИИ, заболевание началось отеками голеней, протеинурией 6,6% при нормальном .артериальном давлении и нормальном осадке мочи, В дальнейшем заболевание проявлялось рецидивирующим неф- рогическим синдромом (протеинурия до 33 г/л, общий белок крови 43,5 г/л, гкперлипидемня). При обследовании в нефрологическом отделении НИИ педиатрии АМН СССР отечнъ1й си:-здром, протеикурия до 9,9 г/сут, общий белок крови 47s8 г/л, A..ьбy шнfci 46,3%, flj.-глобулины 22,5%, холестерин до 642 мг%. Артериальное давление 80/40-110/60 мм рт.ст Осадок мочи нормальный. Функции почек сохранены: креатинин крови 0,5 мг%, КОК 84 1-ш/мин, уд вес мочи до 1022, Количество рецепторов в лимфоцитах пмоль/мг белка; при исследовании биоптата почки выявлен гломерулит с незначительными морфологическими изменениями о В результате ripединзолонотерапии по 50 мг/сут в течение 4 над с последующей прерьшис- той терапией в течение 8 нед развилась полная ремиссия заболевания,

Эффект изобретения - ускорение диагноза незначительных морфологических изменений в клубочках у больных с нефротическим синдромом, что позволяет ускорить назначение терапии и предсказать ее эффективность.

Предлагаемый способ диагностики панностью атравматичен,(забор крови из вены) 5, в то время как прототин (биопсия почки) имеет следуювще осложнения: необходимы повторные биопсии в 15% из-за того, что не был получен материал; летальный исход вследстаие больиюй периренальной гематомы и нар0

0

5

5

51508

кознон асфиксии - 0,1%; макрогематурия - в 9%; почечная колика - в О,51%; забрюшинная гематома - 0,41%; коллапс - в 0,П; анурия - в 0,03%; ки- лечная непроходимость - в 0,03%.

Скорость диагностики увеличивается в 10 раз, так как исследование глю- кокортикоидных рецепторов проводится в течение дня, тогда как фиксация

ткани, взятой при биопсии, заливка в парафин, специальные окраски требуют как минимум 10 дн.

Предлагаемый способ радиолигандно- го исследования глюкокортикоидных рецепторов в лимфоцитах периферической крови позволяет -поставить диагноз не

646

значительных морфологических изменений в клубочках с достоверностью 95%. Формула изобретения Способ определения нефротического синдрома при незначительных морфологических изменениях в клубочках у детей путем исследования биологического материала, отличающийся

тем, что, с целью снижения травматично сти и ускоре ния способа, определяют в лимфоцитах крови радиолигандным методом количество глюкокортикоидных рецепторов и при их значении 0,46 пмоль на 1 мг белка и более определяют нефротический синдром при незначительных морфологических изменениях в клубочках.

Изобретение относится к медицине , в частности, к педиатрии. Целью изобретения является снижение травматичности и ускорение способа. Для этого у больного проводят забор крови из локтевой вены натощак. Выделяют из нее лимфоциты по методу Воут и определяют в них радиолигандным методом количество глюкокортикоидных рецепторов и при их значении 0,46 N моль/мг белка и более определяют нефротический синдром при незначительных морфологических изменениях в клубочках. Скорость диагностики с помощью данного способа увеличивается в 10 раз, так как исследование проводится в течение 1 дня, тогда как в прототипе требуется 10 дней. Способ позволяет с достоверностью 95% ставить правильный диагноз, а также он является атравматичным.