Способ изготовления коллагенового покрытия для использования в офтальмологии Советский патент 1987 года по МПК A61K38/17 

I

Изобретение относится к офтальмологии, а именно к области коллагено- пластики, и может быть использовано при кератомии, кератопластике

Цель изобретения - снижение воспалительных реакций при использовании покрытия и повышение их прозрачности.

Способ осуществляется следующим образом.

Склеру глаз свиньи тщательно очищают от внутренних оболочек глаза, остатков конъюнктивы, мышц и прочего и выделяют строку, которую нарезают небольшими кусками. Навеску ткани промывают дистиплированной водой до полного удаления механических примесей и крови,.переносят в колбу и заливают 0%-ным раствором едкого натра в насьщенном растворе сернокислого натрия (из расчета 500 мл раствора на 10 г ткани) на 48 ч при 18-20 С. Раствор сливают и проводят нейтрализацию ткани до рН 6,0-7,0/ перемевшт

13214202

Пример 1.20г очищенной и нарезанной стромы склеры заливают 1 л 10%-ного раствора едкого натра в насыщенном растворе сернокислого

g натрия и оставляют при 18-20° на 48ч. Затем раствор сливают, ткань промывают небольшим количеством дистиллированной воды, заливают 1 л 2%-ного раствора борной кислоты и перемеши-

fO вают на магнитной мешалке 2ч, дважды меняя раствор борной кислоты. Ткань при непрерывном перемешивании твщтельно промывают дистиллированной водой (общий объем воды 5 л) до пол15 ногЬ удаления сульфат-иона из промывной жидкости. К 250 мп полученной обводненной ткани добавляют 350 мл 0,5 М уксусной киспоты, перемешивают и оставляют на 1 сут при 4°С, Затем

20 массу гомогенизируют при помощи мик- роразмельчителя тканей, центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и оставляют на 3 сут при . Полученный раствор фильтруют через стеклянный фильтр

вая ее в 2%-ном растворе борной кис- 25 Полученньй 1%-ный раствор коллагена

разводят 0,5 М раствором уксусной кислоты до концентрации 0,8%. Диализ 0,8%-ного раствора коллагена проводят против 0,2 М цитратного буфера, 30 доводя рН раствора коллагена до 6,8. Диализ продолжают, снижая концентрацию буфера от 0,2 до 0,002 М в 3-4 этапа, на последнем этапе используют

лоты и неоднократно меняя раствор. Ткань промывают дистиллированной водой до полного удаления иона сульфата в промывной жидкости и заливают 1 М раствором уксусной кислоты из расчета, чтобы конечная концентрация белка в растворе составила 1%. Массу перемешивают и оставляют в холодиль- нике на 1-3 сут.при Массу гомогенизируют, центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и.оставляют на сутки при 4с. Полученный раствор фильтруют через стеклянный фильтр с помощью водоструйного насоса.

на последнем этапе подогрев до 28-30 С,

35 Полученный раствор коллагена центрифугируют 15 мин при 1000 об/мин, разливают на матрицы, повторяющие контур переднего отрезка глаза, и проводят воздушную сушку в пьшезаш 1тДня нейтрализации и десрльватации 1%-ный уксусный раствор коллагена разбавляют 0,5 М уксусной кис:лотой до концентраций белка 0,7-0,8% и диали- зуют против 0,2 М фосфатного или цит- ратного буфера при 18-20 С до рН 4,5-7,5. Диализ продолжают, снижая концентрацию буфера от 0,2 до 0,002М в 3-4 этапа, на последнем этапе используют подогрев до 28-30 С. Полученный раствор коллагена центрифугируют 15 мин при 1000 об/мин, разливают на матрицы, повторяющие контур переднего отрезка глаза, и проводят воздушную сушку в пылезащитном шкафу в течение 48 ч при lO-ZO C, Готовые покрытия стерилизуют гамма-излучением при дозе 2,5 Мрад и мощности 0,5 Мрад/ч, .

.

214202

Пример 1.20г очищенной и нарезанной стромы склеры заливают 1 л 10%-ного раствора едкого натра в насыщенном растворе сернокислого

g натрия и оставляют при 18-20° на 48ч. Затем раствор сливают, ткань промывают небольшим количеством дистиллированной воды, заливают 1 л 2%-ного раствора борной кислоты и перемеши-

fO вают на магнитной мешалке 2ч, дважды меняя раствор борной кислоты. Ткань при непрерывном перемешивании твщтельно промывают дистиллированной водой (общий объем воды 5 л) до пол15 ногЬ удаления сульфат-иона из промывной жидкости. К 250 мп полученной обводненной ткани добавляют 350 мл 0,5 М уксусной киспоты, перемешивают и оставляют на 1 сут при 4°С, Затем

20 массу гомогенизируют при помощи мик- роразмельчителя тканей, центрифугируют 30 мин при 2000 об/мин и оставляют на 3 сут при . Полученный раствор фильтруют через стеклянный фильтр

разводят 0,5 М раствором уксусной кислоты до концентрации 0,8%. Диализ 0,8%-ного раствора коллагена проводят против 0,2 М цитратного буфера, 30 доводя рН раствора коллагена до 6,8. Диализ продолжают, снижая концентрацию буфера от 0,2 до 0,002 М в 3-4 этапа, на последнем этапе используют

5

на последнем этапе подогрев до 28-30 С,

35 Полученный раствор коллагена центрифугируют 15 мин при 1000 об/мин, разливают на матрицы, повторяющие контур переднего отрезка глаза, и проводят воздушную сушку в пьшезаш 1т40 ном шкафу в течение 48 ч при 15 С и относительной влажности 40-50%. Готовые покрытия стерилизуют гамма-лучами при дозе 2,5 Мрад и мощности 0,5 Мрад/ч.

После радиационной стерилизации определяют рН водной вытяжки навески целевого продукта. Полученное значение рН 7,2 оптимально для материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза.

50

5

55

Пример 2. Аналогичен примеру 1, за исключением того, что после предварительной подготовки склеру подвергают щелочно-солевой обработке нейтрализуютi промывают и растворяют в уксусной кислоте по предлагаемой методике. Диализ 0,8%-ного раствора коллагена в уксусной кислоте проводят против буфера до рН 4,5. Полученный раствор разливают на матрицы для формования и проводят воздушную сушку в пыпезапц тном шкафу. После радиационной стерилизации определяют рН водной вытяжки навески целевого продукта. Полученное значение рН 5,2 лежит на нижнем пределе, допустимом для материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза.

Пример 3. Аналогичен примеру 1, после предварительной подготовки склеру подвергают щелочно-солевой обработке, затем нейтрализуют, промывают и растворяют в уксусной кисло те по предлагаемой методике. Диализ 0,8%-ного раствора коллагена в уксусной кислоте проводят против буфера до рН 7,5. Полученньй раствор разливают на матрицы для формования и проводят воздушную сушку в пылезащитном шкафу. После радиационной стерилизации определяют рН водной вытяжки навески целевого продукта. Полученное значение рН 8,3 лежит на верхнем пределе, допустимом для материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза.

В результате получают прозрачные коллагеновые покрытия, при имплантации которых в слой роговицы отмечается почти полное отсутствие воспалительных реакций: в строме обнаружены

Редактор А. 1 1ишкина Заказ 2487

Составитель В. Гаврилюк Техред М.Моргентал

Тираж 595 ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, А

JO

15

лишь единичные лейкоциты, плазматические клетки Практически отсутствовали. В покрытиях, изготовленных из i коллагена кожи, аллергические реакции имеют место в 60% случаев, наблюдается инфильтрация стромы большим количеством лейкоцитов и плазматических клеток.

Предлагаемые покрытия обладают гораздо большей прозрачностью по сравнению с покрытия1 и из коллйгена кожи - коэффициент светопропуекания на 30% Bbmie.

Формула изобретения

Способ изготовления коллагенового покрытия для использования в офтальмологии путем щелочно-солевой обработки животного сырья, нейтрализации, промывки, растворения коллагена, сушки, о тличающийся тем, что, с целью снижения воспалительных 25 реакций, повьшения прозрачности, в качестве животного сырья используют склеру глаз, удаление низкомолекулярных примесей из растворов коллагена одновременно с доведением рН этих растворов до 4,5-7,5 проводят диализом, а сушку проводят одновременно с формованием тонкого прозрачного сферического покрытия.

20

30

Корректор Н. Король k Подписное

Изобретение относится к офтальмологии. Цель изобретения - снижение воспалительных реакций и повышение прозрачности. Склеру глаз свиньи подвергают щелочно-солевой обработке, нейтрализуют, промывают и растворяют в уксусной кислоте. Полученный раствор разливают на матрицы .дпя формования и проводят воздушную сушку. После радиационной стерилизации определяют рН водной- вытяжки навески целевого продукта. Дпя материала, контактирующего с тканями переднего отрезка глаза, оптимальное значение рН 7,2. ;; N5