Способ анализа биологических объектов Советский патент 1988 года по МПК G03C7/00 

а ;л

:о

00

Изобретение относится к прикладно биологии, а именно к методам анализа биологических объектов с .использованием лабораторной микрофотосъемки.

Цель изобретения - повьшение точности анализа за счет улучшения качества снимка.

Пример 1. Биологический объект - взвесь клеток лимфомы мыши, флуорохромиронанный хлортетрациклином и этидиумбромидом, исследуется с помощью микроскопа МБИ-15 или серии Люмам с ртутной лампой сверхвысокого давления в качестве источника ос- вещения (ДРШ-250-3), светофильтрами возубждения, люминесценции ФС-1, СЗС 24, БС-8 и светофильтрами эмиссии же-18 + ЖЗС-19 и соответствующей све тоделительной пластинкой, объективом |90х1.25 (ЛОМО). Микрофотосъемка ве- |дется на цветную негативную пленку типа ЦНД-32.

Фотопленку обрабатывают по следу- |ющей схеме: первое проявление 8 - 12 мин (25+2°С), оптимум 10 мин, промывка 1 мин (13-20°с); остановка проявления 3 мин (20°С), промьшка 5 мин (13-20 С); засветка 5 мин; цветное проявление 6-10 мин (25±2°С), оптимум 8 мин, промывка 20 мин (13-20°С) отбеливание 5-7 мин (),. промывка 5 мин (13-20 С); фиксирование 10 - 12 мин (20 С), промывка 30 мин (13 20°С).

Составы используемых растворов, содержащие, г/л: черно-белый проявитель Орвоколор С-07

Трилон Б2

Натрий тетраборнокислый 15

Сульфат натрия

безводный 40

Гидрохинон 4,5

Метилфенвдон0,25

Калий углекислый 25

Калий роданистьй 2

Калий йодистый 0,007 стоп-ванна Орвоколор

Квасцы алюмок:алиевые20

цветной проявитель Орвоколор С-17 раствор А

Гексаметофосфат

натрия3

Гидроксиламинсульфат1,5

1ЩВ-14

Вода0,3 л

0

5

0

5

0

5

0

5

раствор Б

Гексаметофос ат натрия1

Калий углекислый 75 Сульфит натрия безводный 3 Калий бромистый 2 Вода0,5 л

отбеливатель Орвоколор Калий железо- синеродистый 100 Калий бромистый 15 Калий фосфорнокислый однозаме- щенный5,8

Натрий фосфорнокислый двузаме- щенный4,3

фиксаж Орвоколор Тиосульфат натрия кристаллический 200 Для приготовления всех растворов использзпот дистиллированную воду.

На слайдах, полученных предлагаемым способом, правильно воспроизводится биологический объект с характерной желто-зеленой люминесценцией митохондрий (локализация тетрациклина) и красной люминесценцией нуклеиновых кислот в ядре (взаимодействие этидиумбромида с двухцепочными нуклеиновыми кислотами). Слайды, полученные при фазово-контрастном освещении с желто-зеленым светофильтром, имеют соответствующий цвет.

П р и м е р 2. Экспонированную фотопленку типа ЦНД-32 обрабатьтают как в примере 1 с временем черно- белого проявления, цветного проявления, отбеливания и фиксирования меньше 8, 6, 5, 10 мин соответственно. Изображение на слайдах в этом случае имеет неправильную цветопередачу и пурпурную вуаль.

Примерз. Экспонированную фотопленку типа ЦНД-32 обрабатывают как в примере 1 с временем черно- белого проявления, цветного проявления, отбеливания и фиксирования больше 12, 10, 7, 12 мин соответственно. Слайды в этом случае перепроявлены, т.е. сплошь черные.

Точность воспроизведения объекта микрофотосъемки при использовании предлагаемого и известного способов ;1гшюстрирует таблица.

10-20

Желтьй

Обнаруживаютсяслабо

30-40

Желто- зеленый

Четко видны

Цвет люминесценции

Розовый Красный

Формула изобретения Способ анализа биологических объектов, включающий введение в них зондов, микрофотосъемку на цветную фотопленку, ее черно-белое проявление, остановку проявления, засветку, цветное проявление, отбеливание и фиксирование, отличающий--; с я тем,что, с целью повышения точности анализа за счет улучшения качества снимка, съемку осуществляют на негативную фотопленку, проявляют 8-12 мин в черно-белом проявителе следующего состава, г/л:

0

Динатриевая соль зтнлендиамин-Ы,Н,Ы ,N тетраукусуной кислоты2,О

Тетраборат натрия15,р

Сульфат натрия безводный40,0

Гидрохинон4,5

Метилфенидон0,25

Карбонат калия25,0

0 Роданид калия2,0

Йодид калия0,007

Вода дистиллированнаяДо 1 л

6-10 мин проявляют в цветномпроявителе состава, г/л:

5 Гексаметафосфат натрия4,0

Гидроксиламинсульфат1 5

Диэтил-п-фениленднамин 0

Карбонат калия75,0

Сульфит натрия безводный3,0

0 Бромид калия2,0

Вода диcтилл фoвaннaяДо 1 л 5-7 мин отбеливают в отбеливателе состав, г/л:

Феррицианид калия

5 Фосфат калия однозаме- щенный

Фосфат натрия двузаме- щенный

100 5,8

4,3 До 1

Вода дистиллированная До 1 л и 10-12 мин фиксируют в водном растворе тиосульфата натрия кристаллического в концентрации 200 г/л, причем об° пзттмч проявления проводят при 25+0,5 С, а отбеливание и фиксирова- 5 ние при .