Способ анализа пробы цельной крови Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано при компонентном анализе цельной крови.

Цель изобретения - повышение точности способа.

На фиг. 1 дан график, показывающий диффузию витамина В, из агаро- зы в цельную кровь как функцию ге- матокрита; на фиг. 2 - график, показывающий диффузию витамина В из агарозы как квадратный корень из функции времени согласно законам диффузии J на фиг. 3 - график, показывающий корреляцию между гематокритсгм

(НсТ), определяемым диффузией и стандартными техническими методами центрифугирования на фиг. 4 - график, показывающий влияние гематокрита на анализ альбумина.

Способ осуществляется след тощим образом.

Приготовление витамина В, в ага- розном геле.

В 25 мл колбу Эрленмейера добавля-. ют 0,1 г агара и 9,0 мл PBS (phosha- te beffered salim), содержащий: 80 мл 0,1 М 20 мл 0,1 М :

8,5 г NaCl и 0,2 г NaN,, рН 7,3. Колбу помещают в ванну с кипящей

СО

c

CD

СМ

на

5 мин для растворения ага- Остужнют смесь до 50 С, добавводоирозы.

ляют к ней 1,0 мл 1,0% витамина (в PBS) , Затем делают палочки из геля путем введения капель теплой смеси в.колодцы и перекрытия их пластмассовым покрытием. Палочки могут храниться при комнатной температуре в увлажненном контейнере в течение нескольких месяцев. Красный ; цвет устойчив в течение этого срока. ; Определение гематокрита крови с помощью диффузии витамина В, из геля наружу.

Для каждой палочки определяют первоначальное поглощение при 540 нм при чистом (без присадок) агарозном геле в качестве эталона. Затем палочки погружают на 10 мин в 1,5 мл цельной крови .известного гематокрита (НсТ) , определенного центрифугированием. Палочки быстро ополаскивают в двух стаканах с чистым PBS и вновь определяют поглощение при 540 нм. Затем определяется изменение поглощения при 540 нм.

1501929

гранул NaOH) , затем добавляют 5,0мл Brij - 35, 30% поверхностно-активного раствора и 5,36 г NaCl. Объем е смеси доводят до 1 л.

Анализ с использованием геля на альбумин.

Определяют первоначальное поглощение каждой палочки при 630 нм. 10 Помещают капли крови на поверхность

15

20

25

геля на 30 с, быстро смывают пробу двумя промываниями чистым сукцинат- ным буфером. Повторно через 20 мин измеряют поглощение палочки при 630 нм.

Строят график &AJJP как функцию гематокрита (НсТ) при фиксирован- ,рой концентрации альбумина плазмы, который иллюстрирует гематокритный эффект (фиг. 4). Формула изобретения

Способ анализа пробы цельной крови путем помещения ее на поверхность геля, отделения твердой и жидкой фаз с последующим анализом аналитов внутг ри жидкой фазы и внутри геля, о т- личающийся тем, что, с :целью повышения точности анализа, используют гель агарозы, содержащий инертный краситель, витамин В, и гель, содержащий реагент на анализируемое вещество, анализ проводят спектрофотометрически, при этом дополнительно определяют гематокритное число по количеству витамина В, диффундирующего из геля, концентрацию аналита определяют по продукту его цветной реакции, концентрацию которого корректируют в соответствии с определяемым гематокритным числом.

ЛА

.

Экспериментальные данные наносят на график, где ЬА - ось ординат, НсТ - ось абсцисс (см. фиг. 1-3 - данные по 49 пробам).

Приготовление гелей для анализа на альбумин.

В 25 мл колбу Эрленмейера помещают 150 мг агарозы, 7,0 мл сукцинат ного буфера, полученного растворением. 8,85 г янтарной кислоты (75 мм) в 800 мл дистиллированной воды (рН устанавливают 4,4 добавлением

геля на 30 с, быстро смывают пробу двумя промываниями чистым сукцинат- ным буфером. Повторно через 20 мин измеряют поглощение палочки при 630 нм.

Строят график &AJJP как функцию гематокрита (НсТ) при фиксирован- ,рой концентрации альбумина плазмы, который иллюстрирует гематокритный эффект (фиг. 4). Формула изобретения

Способ анализа пробы цельной крови путем помещения ее на поверхность геля, отделения твердой и жидкой фаз с последующим анализом аналитов внутг ри жидкой фазы и внутри геля, о т- личающийся тем, что, с :целью повышения точности анализа, используют гель агарозы, содержащий инертный краситель, витамин В, и гель, содержащий реагент на анализируемое вещество, анализ проводят спектрофотометрически, при этом дополнительно определяют гематокритное число по количеству витамина В, диффундирующего из геля, концентрацию аналита определяют по продукту его цветной реакции, концентрацию которого корректируют в соответствии с определяемым гематокритным числом.

050 015

Изобретение относится к медицине, а именно к способам анализа компонентов пробы цельной крови. Цель - повышение точности способа. В кровь (0,5 мл) помещают на 10 мин агарозный гель, содержащий витамин B₁₂ и выполненный в виде палочки, затем палочки ополаскивают в PHOSPHATE FUFFERED SALINE, содержащем NA₂HPO₄, KH₂PO₄, NACL и NAN₃, PH 7, 3, определяют поглощение при 540 нм и рассчитывают изменение поглощения палочки до и после инкубации ее в крови. Затем по калибровочной кривой, настроенной с использованием, например, крови с известным гематокритом, определяют гематокрит исследуемого образца крови. Способ позволяет при включении в гель агарозы реагента на анализируемое вещество определять концентрацию его по цветной реакции, при этом концентрацию его корректируют с учетом измеренного гематокритного числа. 4 ил.

Фиг. I

NMERSiOff TlMf

60

so w

X 20

Ю О

10 10 X но 50 60

CENTRiFUSM Нет Фиа.З

CORRBCTfJJ FOK НсТ

Ntircoffiecrfs РОК Нет

05