Способ оценки биологической активности препаратов из комплекса нуклеотидов Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующий образом.

Новорожденным крысам линии Campbell с наследственной дистро4ией сетчатки под кожу живота вводят О,1 мм 3,5%-ного раствора ЭНКАДа, что составляет 3,5 мг вещества (производного ну-, клеотида) ежедневно в течение 6 или 8 дн. На 7-й или 9-н день соответст- венно животных умерщвляют путем дека- питации. Глазные яблоки фиксируют в 2%-ном глютаральдегиде на фосфатном

.буфере, задний сектор. Затем глаз разрезают на фрагменты, площадью около I мм , фиксируют в 2%-ном глшт ар альдегиде в течение 3,5 ч. Про№1вают в 0,2 М растворе сахарозы на том же буфере в 1%-ном растворе четырехокиси осмия в течение 1 ч. Затем обезвожи-. вают в спиртах восходящей крепости ОО, 50, 70, 96, 100) и заливают в аралдит.

Ультратонкие срезы, содержащие пигментный эпителий и наружные слои сетчатки, контрастируют 3%-ным урани- лацетатом и нитратом свинца по Рей- нольдсу, исследуют в электронном микроскопе. Проводят морфометрию очагов

сл

vj

05

СГ5 ел

мембраногенеза на 7-й и 9-й день после рождения в контроле и опыте.

Подсчет очагов мембраногенеза проводят; в полях зрения. За очаг мембра- ногенеза принимают единичные мембраны или скопление мембранных дисков, которые определяют между апикальным отростком пигментного эпителия и в суб- ретинальном пространстве Оценку мем- браногенёза проводят по четырехбаль- ной системе, отражающей 4 категории условной ппощади поля зрения, занимаемой дисками:

отсутствие мембран в поле зрения (категория 0);

мембранные комплексы, занимающие около 1/3 поля зрехшя и меньше (категория I) ;

мембранные комплексы, занимающие 1/2 поля зрения (категория 2);.

мембранные комплексы, занимающие около 2/3 поля зрения и больше (категория 3)t

Для оценки величины стимулирующего- эффекта. ЭНКАДа используется формула

R

Son S к

100% ,

где R - величина, отражающая эффективность стимулирующего дей- ствия испытуемого препарата, %;

- общая площадь, занимаемая мембранными дисками фоторецептор ных клеток в опыте; общая площадь, занимаемая MeM6paHHbiNM дисками в контроле . Общая площадь вычисляется путем

Ort

S- 35

Изобретение позволяет повысить точность определения фармакологической активности препаратов комплекса нуклеотидов, применяемых для лечения пигментной дистрофии сетчатки.

Формула изобретения

Способ оценки биологической активности препаратов из комплексануклеотидов- путем офтальмологического иссле40 дова-ия, отличающийс я тем, суммирования произведений у.словно вы-

раженной площади полей, занятых дисками в каждой категории.

, 1 целью повышеьшя точности способа, исследования проводят на мутант- ных крысах Campbell; при этом в сет- чат ке дополнительно в наружных сегИ р и м е р 1. Крысам введено Г мл 45 ментах фоторецепторов определяют -, пи«-лп. 1 пяч пчи скоплений мембранных дисков и при

3,5%-ного раствора ЭНКАДа 1 раз в , ,, количества на 10% и бопрнь R течение 6 дн (серия № 1;, да

лееготовили льтрамикроскош1ческ.1елее от нормы оценивают препарат как

срезы сетчатки. На срезах просматривали.. активный.

5

0

5

35

200 полей зрения. В.контроле крысам введен физиологический раствор.

При просчете выявлено , что в опытной пробе скопление мембранных дисков увеличено на 13% от нормы, что дает возможность определить ЭНКАД, как обладающий фармакологической активностью при ретинальной дистрофии.

Пример 2. Крысам введено 0,1 мм 3,5%-ного раствора ЭНКЛДА 1 раз в день в течение 9 дн (серия №3). . При электронной микроскопии в сетчатке в опыте отмечалось формирование соединительных ресничек, тесно .контактирующих с плазматической мембраной пигментного эпителия и располагающихся между апикальными отростками. Мембранные диски наружных сегментов при обзорном исследовании выявились лишь в отдельных полях в виде единичных скоплений.

При просчете выявлено, что в опытной пробе скопление мембранных дисков не увеличивается по отношению к норме. В связи с этим излученная партия ЭНКАДа не является активной, Пре- .парат потерял активность.

Изобретение позволяет повысить точность определения фармакологической активности препаратов комплекса нуклеотидов, применяемых для лечения пигментной дистрофии сетчатки.

Формула изобретения

Способ оценки биологической активности препаратов из комплексануклеотидов- путем офтальмологического иссле

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что исследования проводят на мутантных по пигментной дистрофии сетчатки крысах линии CAMPBELL. Крысам вводят испытуемое вещество, в частности препарат ЭНКАД. Далее готовят электронно-микроскопические препараты сетчатки и под микроскопом считают в наружном сегменте фоторецепторов наличие мембранных скоплений дисков. Если в опытной партии крыс скопления дисков увеличивается на 10% и более по отношению к контролю, препарат оценивается как обладающий активностью для лечения пигментной дистрофии сетчатки.