Способ определения личиночной диапаузы у мух Советский патент 1991 года по МПК A01K67/00 

(Л

С

Изобретение относится к разведению насекомых, в частности к способам определения физиологического состояния насекомых. Целью изобретения является упрощение и ускорение процесса. Определение диапаузы проводят путем определения концентрации гемоцитов в гемолимфе насекомых. Концентрация, превышающая 15 тыс. кл/мм³, свидетельствует об отсутствии либо о прекращении диапаузы. При концентрации менее 9 тыс. кл/мм³ для установления наличия диапаузы изучаемых насекомых нагревают путем погружения в воду и по увеличению концентрации гемоцитов в 2 - 3 раза судят о наличии диапаузы. Способ дает количественную характеристику диапаузы у мух, обеспечивает резкое сокращение затрат времени до 1 - 2 ч на определение диапаузы, упрощает процесс путем исключения необходимости использования сложных технических средств. 3 табл.

Изобретение относится к разведению насекомых, в частности к способам определения физиологического состояния насекомых.

Цель изобретения - упрощение и ускорение процесса определения

Способ осуществляют следующим образом.

Для получения пробы кутикулу личинки надрезают и вытекающей гемолимфой заполняют лейкоцитарный меланжер до метки О 5 При недостаточном объеме гемолимфы, полученной из одной особи для получения пробы используют несколько личинок. Затем пробы разбавляют до метки 11 1 %-ным раствором уксусной кислоты в физиологическом растворе для Calltphora следующего состава, г: NaCl 886 KCI 286, CaCl2 1.13, глюкоза 9.72. дистилаированная вода до 1 л. Заполненный мелан/кер встряхивают в течение 1 мин, затем выпускают первые две капли и третьей каплей разведенной пробы заполняют счетную камеру с сеткой Горяе- ва. После оседания клеток на дно камеры производят их подсчет на площади 1 мм с помощью микроскопа, а затем определяют расчетную концентрацию гемоцитов в 1 мм гемолимфы . При необходимости личинки перед получением пробы гемолимфы нагревают путем погружения в горячую воду при 60°С на 2 мин. Для достоверного определения средней концентрации гемоцитов достаточно 5-10 параллельных измерений.

Для формирования диапаузы личинки выкармливают мясом и содержат в стеклянных банках с влажными опилками при 12°С и 12-часовом освещении. Диапаузирующие личинки для холодовой сенсибилизации содержат при 6 ± 1°С в течение 3 мес, а затем1

о VI

ю

переносят на реактивацию в исходные условия. Для получения бездиапаузного развития личинки содержат при 20°С.

В табл.1 дана зависимость изменений концентрации гемоцитов в гемолимфе C.vlclna от возраста особей.

Из табл.1 видно, что если при бездиапа- узном развитии (примеры 1-8) концентрация гемоцитов возрастает до 20-24 тыс. клеток в 1 мм , а затем в ходе окукливания резко падает, то при наступлении диапаузы (примеры 9-19) она остается примерно на одном уровне в пределах 5-9 тыс. клеток в 1 мм3. Однако начиная с 16-го дня развития нагрев перед получением пробы гемолимфы (примеры 20-30) вызывает у личинок, детермированных к диапзузе, повышение концентрации гемоцитов до 15-18 тыс. клеток в 1 мм3, т.е. в 2,1-2,9 раз по сравнению с необработанными особями, что свидетельствует о наступлении диапаузы.

В табл.2 показано изменение концентрации гемоцитов при прекращении диа- паузы у личинок, прошедших холодовую сенсибилизацию при 6°С и перенесенных на реактивацию в 12°С (примеры 31-39). Видно, что по мере реактивации концентрация гемоцитов в гемолимфе необрабо- тайных особей повышается до уровня концентрации у особей, которые были нагреты пред получением пробы, а затем падает аналогично тому, как это происходит при бездиапаузном развитии. Таким обра- зом, у необработанных особей величина концентрации гемоцитов, которая превышает 15 тыс. клеток в 1 мм3, свидетельствует либо от отсутствии, либо о прекращении диапаузы.

В табл.3 приведено изменение концентрации гемоцитов о гемолимфе при прекращении диапаузы после холодовой сенсибилизации у личинок, перенесенных из 6 в 12°С, т.е. оптимальная температура нагрева насекомых.

Выбор интервала температуры, при которой происходит нагрев личинок перед получением пробы гемолимфы, обусловлен тем, что при нагреве ниже 55 С повышение концентрации гемоцитов носит временный характер, быстро возвращаясь к исходному уровню после прекращения нагрева (табл.3). При температуре более 60°С резко увеличивается число неклеточных объектов, затрудняющих подсчет гемоцитов. При нагреве в интервале температуры 56-60°С по- вышение концентрации гемоцитов сохраняется в течение продолжительного времени после прекращения нагрева, а количество неклеточн ых объектов незначительно.

Формула изобретения

Способ определения личиночной диапаузы у мух, включающий изучение физиологического состояния насекомых, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса, изучение физиологического состояния насекомых проводят путем определения концентрации гемоцитов в гемолимфе насекомых, при этом при концентрации, превышающей 15 тыс. клеток в 1 мм , судят об отсутствии либо прекращении диапаузы, а при концентрации менее 9 тыс. клеток в 1 мм3 для установления наличия диапаузы изучаемых насекомых нагревают путем погружения в воду при 55-60°С на 2-4 мин и по увеличению концентрации гемоцитов в 2-3 раза судят о наличии диапаузы.

Таблица 1

Продолжение табл 1

Таблица 2

Примечание. Прочие условия проведения примеров аналогичны условиям примера 1.

Таблица 3