Способ искусственного оплодотворения икры лососевых рыб Советский патент 1992 года по МПК A01K61/00 

Изобретение относится к рыбному хозяйству, направлено на повышение качества и выживаемости потомства при искусственном оплодотворении и может быть использовано при разведении рыб на рыбоводных заводах.

Известен способ искусственного оплодотворения икры рыб, включающий взятие половых продуктов, обработку спермы для инактивации нежизнестойких спермиев путем добавления к сперме водного раствора хлористого калия с рН 7.0-7,4 и концентрацией, обеспечивающей содержание хлористого калия в смеси, равное 20-60 мМ. При этом перед обработкой икры сперму выдерживают в смеси с хлористым калием в течение 3-5 мин.

В качестве прототипа выбран способ искусственного оплодотворения икры рыб, предусматривающий взятие у производителей половых продуктов, включающий инактивацию спермиев с Y-хромосомами, их обработку для регулирования пола спермиев добавлением к икре за 4-10 с до смешивания ее с молоками воды со значением рН на 0,5 ед. превышающем это значение в реке обитания рыб, или добавления спермы в воду перед смешиванием с икрой в два этапа - деление порции спермы на две равные части и двухступенчатого внесения первой части в воду за 20 с до смешивания с икрой, а второй - за 5 с до смешивания с икрой.

Недостатком этого способа является недостаточная жизнестойкость потомства

VJ Os Ч СП Ю

вследствие того, что инактивация спермиев с Y-хромосомами ведет к увеличению числа самок в потомстве, но не обеспечивает достаточного разделения активных и низкоактивных спермиев. Первым периодом 20 сек создают слишком большие препятствия для спермиев. вследствие чего инзктивируются не только слабые спермин, но и часть активных спермиев, которые определяют появление жизнестойкого потомства.

Цель изобретения - создание условий, приводящих к элиминации сиермиев с дефектными генотипами и препятствующих оплодотворению икры низкоактивными спермиями. В результате этого происходит оплодотворение икры высокоактивными спермиями, что приводит к увеличению выживаемости и улучшению качества потомства.

Поставленная цель достигается тем, что в способе искусственного оплодотворения икры лосо.севых рыб, включающем взятие у производителей зрелых половых продуктов, инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешивание икры и спермы, проводят инактивацию низкоактивных как Х-, так и Y-спермиев, для чего поэтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления спермы перед перемешиванием на две части и внесения первой части в воду за 10 с, а второй - за 5 с до перемешивания ее с икрой, или путем нанесения спермы на поверхность икры, добавления к ней воды в количестве 5% от объема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном обьему икры, перемешивания спермы с водой и одновременно с икрой после добавления второй порции воды.

Известно, что потеря активности спермиев в воде происходит очень быстро: 80- 100% спермиев сохраняют активность в воде до 5-7 с, после 9-11 с пребывания в воде активны 30-70% спермиев, после 13- 16 с - активны 5-30% спермиев, после 18- 20 с - 1-4% спермиев. Поэтому при использовании двухступенчатого добавления спермы к воде порция спермы делится на две равные части. Первая часть добавляется к равному обьему воды, быстро в течение 5 с перемешивается, потом в нее добавляется вторая часть спермы, перемешивается. Вся операция от момента прилития первой части спермы к воде до оплодотворения икры занимает 10 с. Указанные интервалы выбраны в связи с тем, что при активации спермы водой играют большую роль даже секунды.

Таким образом, при использовании способа создают условия, препятствующие оплодотворению икры низкоактивными спермиями, приводящие к элиминации

спермиев с дефектными генотипами, а следовательно, уменьшению дефектных генотипов в потомстве, но оставляют достаточное количество высокоактивных спермиев. Пример 1. Смесь икры, взятую от

0 четырех самок горбуши, разделили на две части. Для ее оплодотворения использовалась смесь спермы от пяти производителей. Контрольная икра оплодотворялась с использованием заводского метода.

5При использовании двухступенчатого

добавления спермы к воде порция спермы делилась на две равные части. Первая часть спермы добавлялась к равному обьему воды, быстро перемешивалась (5 с). Эта про0 цедура не может быть выполнена за период менее 5 с. так как при этом не происходит полного перемешивания. Затем в эту смесь добавлялась вторая часть спермы и также перемешивалась в течение 5 с. Смесь сразу

5 после этого добавлялась к икре. Таким образом, вся операция от момента прилития первой части спермы к воде до оплодотворения икры занимала 10 с.

Указанные интервалы выбраны в связи

0 с тем, что при активации спермы водой играют большую роль даже секунды. В табл. 1 приведены данные при невысоком уровне гибели икры и личинок. Из примера видно, что использование способа снижает отход

5 при оплодотворении икры и увеличивает жизнеспособность икры и личинок в процессе развития.

Пример 2. Опыты поставлены так же, как и в примере 1. Использовались самки, в

0 икре которых наблюдался высокий уровень отхода. Как видно из табл. 2, положительный эффект предложенного способа в этом случае увеличивается.

Пример 3. Изучено влияние различ5 ных периодов воздействия воды на спермин горбуши (табл. 3). Из табл. 3 видно, что в № 9 увеличение первого периода воздействия воды на спермин приводит к увеличению гибели икры и личинок. Еще более увеличи0 вается отход при увеличении второго периода (№ 10 и 11).

Временные интервалы обосновываются необходимостью создания условий для инактивации малоактивных спермиев с од5 ной стороны, и гарантировэнностью высокого уровня оплодотворения икры - с другой. Спермин второй части находятся в воде 5+5 с. При этом низкоактивные спермин первой части спермы теряют активность, высокоактивные сохраняют

активность. Если первый период увеличить (№ 9), то начинают терять активность и высокоактивные спермин. Вторые 5 с нахождения в воде влияют на спермин как первой, так и второй части. Однако в связи с тем, что к второй порции спермы приливается не чистая вода, а ее смесь со спермой, потеря активности второй части спермы происходит не столь быстро, как первой. Этим приемомгарантируетсяполнотаоплодотворения икры.

Следовательно, двухступенчатый способ разбавления спермы, с одной стороны, приводит к отсеву низкоактивных сперми- ев, а с другой гарантирует высокий уровень оплодотворения икры.

Аналогичные данные получены для кеты.

Пример 4. В емкость собиралась икра, которая занимала 1/3 объема емкости. На икру помещалась сперма. На сперму вливался небольшой обьем воды - примерно 1/20 (5%) обьема икры. Сперма перемешивалась с водой на поверхности икры в течение 5 с. Далее в емкость вливалась вода в объеме, равном объему икры, и сперма перемешивалась со всем объемом воды и одновременно с икрой. Таким образом, оплодотворение икры осуществлялось в толще воды (табл. 4, N 9). При этом жизнеспособность икры была выше, чем в контроле, хотя и несколько ниже, чем при двухступенчатом способе (ДВС) добавления спермы к воде (табл. 4, N° 18).

В табл. 4 приведены также варианты, когда в сперму перед оплодотворением добавлялась вода в течение 5 с (N 20) и 7 с (№ 21). Они свидетельствуют о том, что такой прием резко увеличивает отходы икры, т.е. при этом не гарантируются высокие уровни оплодотворения и развития икры.

Пример 5. Изучены размеры - длина 6т начала головы до выемки хвостового плавника (АС) и масса 5-ти и 6-ти месячных мальков кеты (табл. 5). При использовании двухступенчатого способа оплодотворения 5+5 с длина мальков несколько больше, чем в контроле. Более существенными оказались различия в массе мальков, особенно между №№ 24 и 25. Очевидно, что повышенная жизнеспособность мальков кеты, возникающая при использовании предложенного способа, проявляется в повышенных тем

пах роста и увеличении массы. Была определена масса погибших мальков. Ее показатели у них оказались очень низкими и колебались в пределах 163-276 мг (средний вес 224 мг). Все погибшие мальки были истощенными.

Определено соотношение полов при использовании предлагаемого ДВС 5+Ь с. В контроле у кеты количество самок было равно 42,7%, а при ДВС - 55,2%. Следовательно, в отношении количества самок ДВС также более предпочтителен.

Пример 7. В качестве фактора, препятствующего свободному оплодотворению, была использована вода с различными рН при воздействии на спермин при оплодотворении двухступенчатым методом 15+5 с (табл. 6). В родной реке рН равно 5,5 (N 26). При подкислении воды до ,0 и использовании ее при оплодотворении отход; увеличивается (№ 27). Небольшое под- щелочение воды до ,8 по сравнению с контролем (№ 28) напротив снижает отходы за инкубацию, что происходит вследствие создания ограничений в оплодотворении икры низкоактивными спермиями. Повышение рН до 6,8 увеличивает отход вследствие того, что создаются уже существенные препятствия спермиям.

Формула изобретения Способ искусственного оплодотворения икры лососевых рыб, включающий взятие у производителей зрелых половых продуктов, инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешивание икры и спермы, отличающий- с я тем, что, с целью повышения качества и выживаемости потомства, при инактивации проводят инактивацию низкоактивных как Х-, так и Y-спермиев, для чего поэтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления ее на две части и внесения первой части в воду за 10 с, а второй - за 5 с до перемешивания ее с икрой, или путем нанесения спермы на поверхность икры, добавления к ней воды в количестве 5% от объема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном объему икры, и переме- . шивания спермы с водой с одновременным перемешиванием с икрой после добавления второй порции воды.

Таблица

Использование: искусственное оплодотворение икры лососевых рыб, обеспечивающее повышение качества и выживаемости потомства. Способ предусматривает взятие у производителей зрелых половых продуктов, инактивацию спермы путем поэтапного смешивания ее с водой и перемешивание икры и спермы. В процессе инактивации инактивируют как X, так и Y- низкоактивные спермии. Для этого поэтапное смешивание спермы с водой проводят или путем деления ее на две части и внесения первой части в воду за 10 с, а второй - за 5 с до перемешивания спермы с икрой, или путем нанесения спермы нз поверхность икры, добавление к ней воды в количестве 5% от объема икры, смешивания в течение 5 с, последующего добавления к смеси воды в количестве, равном объему икры, и перемешивания спермы с водой с одновременным перемешиванием с икрой после добавления второй порции воды. 6 табл. ё

Данные по отходам развивающейся икры и личинок горбуши при использовании двухступенчатого способа разбавления спермы

Данные по отходам развивающейся икры и личинок горбуши при использовании двухступенчатого способа разбавления спермы

ТаблицаЗ

Данные по отходам развивающейся икры и личинок горбуши при использовании двухступенчатого способа разбавления спермы с различными периодами воздействия в оды на

спермин перед оплодотворением икры

Таблица2

Данные по отходам икры и личинок кеты при использовании различных способов оплодотворения ( Соколовский р/з, 1986-1987 гг.)

Данные по весу и размеру мальков кеты при использовании различных способов оплодотворения

Таблица4

Таблицаб

Таблицаб

Данные по отходам икры и мальков горбуши при добавлении к сперме горбуши воды с различными значениями рН