Способ отбора овцематок - доноров эмбрионов Советский патент 1992 года по МПК A61K35/38 

Изобретение относится к области животноводства, в частности к методу моделирования состояния стресса у овец инъекцией синтетического кортикотропина, и может быть использовано как тест для прогнозирования суперовуляции по степени стрессо- устойчивости у животных указанного вида, устанавлиоэемой по концентрации кортико- стерона в крови,

Известны способы вызывания у овец множественной овуляции, включающие следующие основные этапы.

1. Стимуляция двойневости у овец: а) выявление в астральный сезон у овцематок признаков половой охоты без осеменения их; б) на И-15-й дни полового цикла подкожная инъекция им 1000-1200 м.е. ГСЖК; в) по мере повторного ими проявления признаков охоты они двукратно искусственно осеменяются - утром и вечером. При этом многоплодие (2 и более ягненка в разовом приплоде) достигается в среднем у 50% маток, а том числе - 47% их с двумя и 5-3% с тремя ягнятами (по результатам весеннего ягнения).

2. Стимуляция суперовуляиии у маток: а) в астральный сезон у маток-доноров ценного генотипа выявляются признаки половой охоты без осеменения их: б) на 8-9-й дни или на 12-й день полового цикла им подкожно инъецируется 2,5-3,0 тыс. м.е. ГСЖК; в) через 48 ч после введения указанной гормональной сыворотки этим овцам делается внутримышечная инъекция 250 мкг простаг- ландина подгруппы - Ф -альфа (зстрофан); г) по мере повторного проявления ими признаков половой охоты после обработки указанными препаратами они трехкратно естественно осеменяются бараном также ценного генотипа утром, вечером и утром следующего дня.

При этом степень реакции яичников у овцематок-доноров суперовуляцией на гормональную обработку и количество желтых тел после овуляции колеблется в пределах о; 1 до 15 (по результатам визуального определения при лапоротомии на 3-5-е сут после случки), т.е. степень реакции яичников этих животных не предсказуема.

СО

С

х| ел о

ю ел

Указанные способы вызывания суперовуляции у овец имеют существенные недостатки. Так. не учитывается индивидуальная специфика реакции яичников на гонадотро- пины инъецируемых препаратов на одной и той же стадии полового цикла разных животных и генотип маток, определяющий их особенности быть донором эмбрионов, В связи с большой вариабельностью показателей количества овуляций среднее число извлекаемых эмбрионов на одного положительного донора не превышает 1,5-2 оплодотворенных яйцеклеток.

Однако при такой биотехнике подготовки овцематок-доноров без знания характера их стрессоустойчивосги значительно снижается эффективность использования их при эмбриопересадке в овцеводстве.

Предлагаемый способ отличается от прототипа тем, что предполагает предварительный отбор таких генотипов маток, которые способны реагировать наибольшим числом овуляций на назначенную дозу гона- дотропного препарата.

Цель изобретения - индивидуальный отбор большого количества маток-доноров эмбрионов с повышенной реакцией на гормональную обработку по результатам превентивного прогнозирования у них уровня суперовуляции.

Цель достигается определением у предполагаемых маток-доноров эмбрионов функциональных резервов надпочечников. При этом главным методическим приемом служит оценка генотипа животных по уровню показателя кортикостерона в крови в результате индукции модельного стресса в их организме с помощью стимуляции корти- котропином.

Известно, что в ответ на стрессирующие воздействия факторов вн-- ней и внутренней среды передняя доля ..пофиза выделяет адренокортикотропный гормон. Адекватно уровню в крови этого гормона пучковая и сетчатая зоны коркового вещества надпочечников выделяют глюкокортико- идные гормоны. Как ответная реакция организма концентрация в крови одного из этих кортикоидов свидетельствует о характере стрессоустойчивое™ животного.

Основываясь на этой природной модели механизма действия адренокортикот- ропного гормона гипофиза на функцию указанных парных желез, оценивают степень функциональных резервов надпочечников у овец казахской тонкорунной породы по уровню кортикостерона в крови на фо ie специфической экзогенной стимуляции кортикотропином в связи с индуцированной суперовуляцией у доноров эмбрионов.

В эстрольный сезон у предполагаемых маток-доноров из яремной вены берут образцы крови для радиоиммунологического установления в ее сыворотке исходного

уровня кортикостерона. После этого всем животным производят инъекцию 30-50 ЕД кортикотропина. Для создания в организме овец плато уровня данного стимулирующего гормона через 30 мин указанную иньекцшо

0 препарата повторяют, Уровень реакции надпочечников, толерантных к стрессовой ситуации, созданной с помощью стимуляции кортикотропином, определяли по концентрации кортикостерона в сыворотке

5 крови, взятой у маток по истечению 90 мин после последней инъекции стимулятора. Разница в показателях концентрации этого кортикоидного гормона надпочечников в образцах крови, взятых у животных до и

0 после стимуляции кортикотропином, служит критерием для прогнозирования размера суперовуляции.

На одну и ту же дозу ГСЖК (3,0 тыс. м.е.) у 21 % овцематок этой породы среднее число

5 овуляций составляет 3,8(минимальная реакция), у 79% их- 10,3(высокая реакция). Если исходный уровень кортикостерона в сыворотке крови маток с минимальной реакцией их яичников на гонадотропин СЖК составил

0 7,3, с высокой - 6,0 нг/мл, после нагрузки кортикотропина этот показатель повышается соответственно до 11,0 и 14,6 нг/мл. Если разницу между исходным показателем концентрации кортикостерона и ее уровня в

5 крови после нагрузки у маток с минимальной реакцией (4,3 нг/мл) принять за 100%, то у маток с высокой реакцией (8,6 нг/мл) он составит 200%.

Таким образом генотипы маток с учетом

0 высокой реакции их надпочечников на модельный стресс, индуцированный инъекцией кортикотропинэ, отбирают в число доноров с целью получения ог каждой из них от б до 15 эмбрионов для последующей

5 трансплантации (маткам-реципиентам). Это значительно повысит эффективность отбора доноров для совершенствования метода трансплантации в овцеводстве.

Размеры множественной овуляции у ма0 ток-доноров с разной реакцией их яичников на гопадотропин гормональной сыворотки в зависимости от уровня функциональных резервов надпочечников приведены в таблице.

5 Формула изобретения

Способ отбора овцематок-доноров эмбрионов, включающий инъекцию овцематкам физиологически-активного вещества и оценку реакции организма, о т л и ч а ю- щ и и с я тем, что, с целью выявления потенциэлоных доноров при получении большого количества нормотрофных зародышей, в качестве физиологически-активного вещества используют кортикотропин в дозе 30-50 ЕД, а оценку реакции ведут по величине разно-

сти уровней кортикостерона в сыворотке крови до и после инъекции кортмкотрояин, причем у потенциальных донороз эмбрионов эта величина составляет 9.8 ± 0,9 нг/мп.

Использование: биотехнология размножения сельскохозяйственных животных. Сущность изобретения: овцематкам в эст- ралышй сезон вводят 30-50 ED кортикотро- гжна. До и после введения определяют уровень кортикостеронов в сыворотке крови. При разности уровней в 9,8 ± 0,9 нг/мл овцематок отбирают для использования в качестве доноров эмбрионов. 1 табл.