Устройство для проведения электрофореза в геле Советский патент 1992 года по МПК A61N1/30 

Изобретение относится к медицинской технике и может быть использовано в кардиологических и инфекционных отделениях больниц и клиник, медицинских учреждениях помощи матерям и детям, инвалидам и престарелым.

Известно устройство для проведения встречного иммуноэлектрофореза Австрийской фирмы IMMNO,содержащее камеру, разделенную по длине перегородкой на две полости и устанавливаемый на перегородку держателя геля, в который предварительно заливается гель. Держатель с гелем электрически соединяет катодно-анодное пространство камеры. В слое геля на рабочей поверхности выполнены два ряда выемок круглой формы для внесения в них исследуемых сывороток и антисывороток.

Однако с помощью такого устройства нельзя определить фракционный состав липопротеидов в сыворотке крови с целью выявления нарушения липидного обмена, возникающего при ишемической болезни сердца и атеросклероза, а также фракционный состав белков с целью выявления злокачественных опухолей, аллергических заболеваний, острых и хронических воспалительных процессов.

Для осуществления этой задачи необходимо новое конструктивное решение, с при- менением мембранных носителей, обеспечение постоянного свободного натяжения мембраны во время работы и возможность многократного фиксированного нанесения пробы.

Прототипом заявленного устройства является устройство для проведения электрофореза в геле, содержащее ряд камер, каждая из которых содержит крышку, электроды, перегородку, разделяющую камеру

XI 00

о ся

Jk

со

OJ

на две полости, устанавливаемый на перегородке держателя, имеющий рабочую поверхность, при этом рабочая поверхность держателя параллельна верхней поверхности держателя геля и расположена от нее на расстоянии 1,2-1,6 мм

Недостаток известного устройства указан выше,.

Целью настоящего изобретения является возможность определения фракционного состава липопротеидов в сыворотке крови с целью выявления нарушения липид- ного обмена, возникающего при ишемиче- ской болезни сердца и атеросклероза, а также возможность определения фракционного состава белков с целью выявления злокачественных опухолей, аллергических заболеваний, острых и хронических воспалительных процессов. И вместе с тем, как известное устройство и прототип, предлагаемое устройство позволяет определить антигены и антитела с целью диагностики вирусного гепатита типа В и других вирусных и бактериальных инфекций в геле.

Поставленная цель достигается тем, что на держателе с двух сторон от рабЪчей поверхности размещены планки, верхняя поверхность которых параллельна рабочей поверхности держателя, на планки уложена по крайней мере одна ацетатцеллюлозная мембрана, концы которой введены в снабженные прижимами вертикальные прорези держателя со стороны его нерабочей поверхности, при этом пористые прокладки рас- положены с двух сторон между боковыми поверхностями держателя и мембраной. Устройство при этом снабжено шаблонам с двумя параллельными буртиками, соприкасающимися с мембраной и верхними поверхностями планок, имеющим ряд окон, две стороны каждого из которых выполнены с выемками для нанесения проб.

На фиг. 1 изображена камера для проведения электрофореза; на фиг, 2 - держатель, разрез; на фиг. 3 - прокладка, поперечное сечение; на фиг. 4 - держатель, вид сверху; на фиг. 5 - шаблон, вид сверху; на фиг. 6 - шаблон, разрез.

Устройство для электрофореза содержит камеру и блок питания (на рис. не пока- зан). Камера содержит кювету 1, разделенную по всей длине перегородкой 2 на две полости, образующие два буферно- электродные пространства, заполненные буферным раствором 3. На перегородку 2 установлен держатель геля 4, имеющий рабочую поверхность 5, которая параллельна верхней поверхности 6 и расположена от нее на расстоянии 1,2- 1,6 мм.

В основании держателя 4 по всей длине с обеих сторон сделаны вертикальные углубления 7 с одной или несколькими прорезями 8 с каждой стороны. Электроды 9 крепятся к крышке 10, и при установке крышки на кювету 1 располагаются в буфере 3.

На края держателя 4 с двух сторон от рабочей поверхности 5 размещены планки 0 11, верхняя поверхность 12 которых параллельна рабочей поверхности 5 держателя и расположена от нее на расстоянии от 3 до 5 мм,

На планки натягиваются одна или не- 5 сколько ацетатцеллюлозных мембран 13, концы которых крепятся прижимами 14, вставляемыми в прорези держателя 8.

С двух сторон держателя между его наружной стенкой и мембраной помещается 0 прокладка 15 из пористого материала.

В процессе работы мембрана, пропитанная буфером, увеличивается по длине и провисает.

Прокладки 15 осуществляют постоян- 5 ное натяжение мембраны в процессе работы, обеспечивают дополнительную подпитку мембран буфером и задерживают попадание на нее продуктов электролиза и ионов.

0 На держатель 4 с мембраной 13 устанавливается шаблон 16, по краям которого расположены буртики 17, по ширине совпадающие с верхней поверхностью 12 планок 11,

5 Шаблон 16 имеет ряд окон 18, две стороны каждого из которых выполнены с выемками (направляющими) 19 для нанесения проб аппликатором.

Устройство работает следующим обра- 0 зом. Ацетатцеллюлозную мембрану ВЛА- ДИПОР МФА-МА № 4 или № 5 режут на полосы во всю длину прорези 8. (Например, при б прорезях на каждой стороне держателя ширина мембраны - 28 мм). 5Готовят буфер, г:

Барбитал

натрия (мединал)12,75

Барбитал

(веронал)2,3,

0 заливают дистиллированной водой до 1000мл.

Ацетатцеллюлозную мембрану помещают в буфер на 15-20 мин, затем слегка подсушивают между двумя листами 5 фильтрованной бумаги.

Далее мембрану закрепляют следующим образомдержатель 4 верхней поверхностью кладут на стол. Край мембраны закладывают в прорезь 8 и крепят прижимом 14. Далее

между наружной стенкой держателя 20 и мембраной 13 помещают прокладку 15 из пористого материала. Затем мембрану натягивают на планки 11 и аналогично закрепляют другой край мембраны прижимом 14. Такая конструкция обеспечивает постоянное натяжение мембраны за все время проведения электрофореза и исключает касание ее рабочей 5 поверхности держателя 4

В каждую часть буферного пространства кюветы 1 заливают по 43+ 1 мл буфера 3.

Далее держатель 4 с мембраной 13 устанавливается на перегородку 2. На держа- тель устанавливается шаблон 16. На специальный трафарет (на рис. не показан) на расстоянии, соответствующем.,шагу зубьев аппликатора, наносится при помощи пипеточного дозатора исследуемые образ; цы сывороток.Далее эти сыворотки при по- мощи аппликатора многократно (в зависимости от необходимого количества вещества) переносят на мембрану через направляющие выемки 19.

Направляющие выемки 19 служат для точного нанесения пробы в одно и то же место, поскольку перенос многократный. Окна 18 служат для визуального наблюдения оператором момента соприкосновения аппликатора с мембраной, что исключает разрыв мембраны Шаблон 16 фиксируется по внутреннему (можно наружному) периметру кюветы 1, а также имеет, как и держа- тель 4, замок 21, исключающий неправильную установку

Каждое окно 18 имеет несколько направляющих выемок 19, что необходимо для нанесения проб в разное место мембраны. (Выбирается оператором) Буртики 17 служат для того, чтобы шаблон прижимал по краю мембрану, но не соприкасался с ее рабочей поверхностью в тех местах, где происходит фракционирование при электрофорезе.

Кювета с держателем закрывается крышкой и подключается к разъему б,лока питания

На камеру подается напряжение. После электрофореза белков ( 30 мин) ацетат- целлюлозная мембрана помещается в 0,25%-ный раствор амидно-черного 7% раствора уксусной кислоты в течение 1-2 мин, после чего проводится отмывание мембраны в 7%-ной уксусной кислоте.

После электрофореза липопротеидов ацетатцеллюлозная мембрана помещается

в раствор Судана черного 5 мл иоспропано- ла и 10 мл 5% NaOH Окрашивание проводится от 1до 3 ч. После окрашивания мембрана отмывается в воде.

Устройство .позволит увеличить область применения прибора путем определения фракционного состава липопротеидов на ацетатцеллюлозной мембране с целью выявления нарушения липидного обмена, возникающего при ишемической болезни сердца и атеросклерозе; фракционный состав белков на эцетатцеллюлозной мембране с целью выявления злокачественных опухолей, аллергических заболеваний, ост- рых и хронических воспалительных процессов; антигены и антитела в агаровом геле с целью диагностики вирусного гепатита В, и других вирусных и бактериальных инфекций.

Обработка результатов легко поддается полной автоматизации. Предлагаемое устройство найдет широкое применение в медицинской практике.

Формула изобретения

1Устройство для проведения электрофореза в геле, содержащее ряд камер, каждая из которых включает кювету с перегородкой, разделяющей ее на две полости для буфера, на которой размещен держатель геля с рабочей поверхностью, с двух сторон от которой выполнены параллельные вертикальные прорези, а также крышку с электродами и пористые прокладки, о т л и ч а-ю щ е е с я тем, что, с целью определения фракционного состава белков и липопротеидов в сыворотке крови на держателе с двух сторон от рабочей поверхности размещены планки, верхняя поверхность которых параллельна рабочей поверхности держателя, на планки уложена по крайней мере одна ацетатцеллюлозная мембрана, концы которой введены в снабженные прижимами вертикальные прорези держателя со стороны его нерабочей поверхности, при этом пористые прокладки расположены с двух сторон между боковыми поверхностями держателя и мембраной.

2Устройство поп 1,отличающее- с я тем, что оно снабжено шаблоном с двумя параллельными буртиками, соприкасающимися с мембраной и верхними поверхностями планок, имеющим ряд окон, две стороны каждого из которых выполнены с выемками для нанесения проб.

-tf

Использование: в кардиологических и инфекционных отделениях больниц и клиник, медицинских учреждениях помощи матерям и детям, инвалидам и престарелым для выявления дислипопротеидемий (атеросклероз, ишемическая болезнь сердца), Сущность изобретения: держатель с двух сторон от рабочей поверхности содержит планки, верхняя поверхность которых параллельна верхней поверхности держателя, на которые натягиваются одна или несколько ацетат-целлюлозных мембран, которые крепятся прижимами, вставляемыми в прорези держателя, причем с двух сторон держателя между его наружной стенкой и мембраной помещается прокладка из пористого материала. На держатель с мембраной устанавливается шаблон, по краям которого расположены буртики, по ширине совпадающие с верхней поверхностью планок держателя, имеющей ряд окон, содержащих с двух сторон ряд направляющих прорезей для аппликатора. 1 з.п.ф-лы, 6 ил.

A-A

7 Я fZ ff

fS

ff в 7

ФигА

фиг.5

п

u