Изобретение относится к области исследований методом фракционирования биологического материала.
Известен ирибор, содержащий концентрично размещенные цилиндрические стеклянные сосуды с расиоложенным между ними полиакриламидныМ гелем, две кюветы с буфер|ным раствором и сикгему охла щдения.
Детали этого прибора связаны с помощью резьбового соединения. Однако такое соединение на стеклянных деталях ненадежно, сложно в изготовлении и неудобно при частой разборке и сборке.
Цель изобретения-ускорение сборки и разборки прибора, а также упрощение его конструкции.
Это достигается тем, что прибор снабжен двумя фасонными крыщками и стягивающимися болтами. Крыщки имеют отверстия для прохождения буферного раствора в гель и канавки для циркуляции охлаждающей жидкости. Кюветы расположены таким образом, что одна из них непосредственно укреплена на верхней крышке, а другая, заполненная буферным расствором, сообщена с нижней.
Концентрические стеклянные цилиндры 1, 2 и 3 прибора расположены между двумя фасонными крыщкамй 4 и 5, которые стягиваются болтами 6. Диаметры внутреннего цилиндра
/ и цилиндра 2 подбирают таким образом, чтобы толщина -кольцевого пространства 7 между ними была не более 8 мм. Это пространство заполняют полиакриламидным гелем, который и является рабочим слоем, где производится электрофорез и фракционирование белков как по электрофоретической подвижности, так и по величине молекул.
Гель во время работы охлаждается водой, поступающей в цилиндр У по каналу 8 и уходящей по каналу 9, которые расположены в крышках 4 и 5. Омывая внутреннюю поверхность цилиндра Л вода охлаждает кольцо геля с внутренней стороны. Для охлаждения геля с наружной стороны воду подают в кольцевое пространство между цилиндрами 2 и 5 по каналу 10, а отводят по каналу 11 в крышках 4 и 5. В последних имеются сквозные отверстия 12, через которые гель контактирует с верхним и нижним буферным раствором.
Буферные растворы находятся в верхней 13 и нижней 14 кюветах, выполненных из оргстекла. Прозрачность всего прибора необходима для того, чтобы можно было наблюдать движение свидетеля-маркера сквозь слой геля сверху
Кювета 13 прикреплена к крышке 4 прибора болтами 15, а кювета 14 стоит на столе и ее горизонтальное положение регулируют установочными винтами. Кювета 13 имеет крышку 16, к которой прикреплена стойка 17. На стойке закреплен электрод из платиновой проволоки. В кювете 14 имеется также платиновый электрод, укрепленный на подставке 18 из оргстекла. В кюветы при работе прибора заливается буферный раствор. Уровень буферного раствора в нижней кювете таков, что прибор погружен в него на i/aТак как металлические части не должны соприкасаться с буферным раствором, то нижняя часть болтов 6 окружена специальными втулками 19 из оргстекла, которые приклеены к крышке 5. Уплотнение между крышками и цилиндрами создается прокладками из пористой резины, вставленными в пазы. Для охлаждения буферного раствора во время работы установлен змеевик 20 из стекла, аналогичный змеевик расположен и в нижней кювете.
Прибор ратотает следуюш,им образом.
Сначала заливают рабочие растворы геля, рабочие растворы с катализаторами по методиясе, аналогичной аналитическому дисковому электрофорезу, «о только в больш1их объемах. Так, при наружном диаметре внутреинепо цилиндра 100 мм, высоте ра бочего слоя геля 100 мм и толшине его 8 мм, объем геля составляет около 280 смз.
После полимеризации растворов на крышке 4 закрепляют кювету 13 и заливают буферные растворы в верхнюю и нижнюю кюветы. Через отверстия 12 с помоодью шприцев наносят испытуемый раствор и подают воду для охлаждения в цилиндр 1, в кольцевое пространство между цилиндрами 2 и 5 и в змеевики верхней и нижней кювет. После этого подают
напряжение на электроды соответствуюших кювет и проводят электрофорез по методике, аналогичной аналитич-еоко1му дисковому электрофорезу.
После проведения опыта прибор разбирают и из него извлекают весь кольцевой пласт полиакриламидного геля, который разрезают. Можно вырезать один или несколько столбиков и окрасить их на белок. Полученные зоны
вырезают, элюируют и затем подвергают исследованию.
С помош,ью такого прибора можно в течение одного опыта разделить около 1 г белка НВ фракции, различаюшиеся как по электрофоретической подвижности, так и по величине молекул.
Предмет изобретения
1. Прибор для электрофореза биологического материала в полиакриламидном геле, содержаш,ий концентрично размеш,енные цилиндрические сосуды с расположенным между ними полиакриламидным гелем, две кюветы с буферным раствором и систему охлаждения, отличающийся тем, что, с целью ускорения сборки и разборки прибора, а также упрош,ения его конструкции, он снабжен двумя фасонными крышками, стягивающимися
болтами и имеюшими отверстия для прохождения буферного раствора в гель, а также каналами для циркуляции охлаждаюшей жидкости, .при этом кюветы расположены так, что одзна из 1НИХ нвпоаред1ст1венно укреплена
на верх1ней к рышске, а др1угая, заполиенная буферным раствором, €ОО|бш.ена с вижней.
2. Прибор по п. 1, отличающийся тем, что система охлаждения представляет собой змеевики, смонтированные на крышках.
/7 75
