Способ определения солеустойчивости подсолнечника Советский патент 1993 года по МПК A01G7/00 A01H1/04 

произрастающие в лабораторных условиях, но и в полевых.

Использование растений е возрасте 14- 16 дней и старше увеличивает надежность способа, поскольку по известным и нашим данным, у некоторых сортов подсолнечника солеу.стойчивость проявляется только начиная с указанного возраста.

Кроме того, надежность способа увеличивается за счет применения данных жир- нокислотного состава полярных липидов, которые являются более стабильными показателями по сравнению с характеристиками деятельности фотосистемы 11, применяемыми согласно прототипу,

Пример 1.В опыте использовали линии подсолнечника Chlorina с хорошо известной солеустойчивостью, выращенные в открытом незасоленном грунте (в поле) до 50-дневного возраста.

Из третьей пары листьев сверху делали высечки диаметром 10 мм. Навески полученных таким путем образцов тканей лис- га, массой 1 г, помещали в колбы, добавляли к ним по 10 мл ацетона, герметично закры- зали и транспортировали в лабораторию.

По истечении 20 ч ацетоновый раствор :ливали. Затем эти же пробы листьев по- зторно (дважды) экстрагировали новыми терциями ацетона в течение 3 ч. Объединенный экстракт упаривали на роторном ва- уумном испарителе. Полученный осадок :одержит преимущественно свободные по- тярные -липиды. Жирнокислотный состав шпидов этого остатка анализировали изве- тным методом тазожидкостной хроматог- эафии. Рассчитывали соотношения шноленовая/линолевая и линолено- 5ая/пальмитиновая кислоты.

Данные обрабатывали по Стьюденту.

Результаты анализа представлены в абл. 1.

Полученные соотношения кислот - ли- юленовая к линолевой (С18:3/С18:2) у соле; 1еустойчивых линий колеблются в интервале 6,5 - 6,8, что достоверно отличатся от величин соотношений этих кислот у реднесолеустойчивости линии (2,0) и высо- осолеустойчивой линии (1,2). В полярных ипидах листьев подсолнечника соотноше- 1ие кислот линоленовой к пальмитиновой 18:3/С16:0) имеет аналогичную зависи- юсть от солеустойчивости, достоверную 5%-ного уровня значимости.

Пример 2. В опыте использовали юрмы подсолнечника с хорошо известной олеустойчивостью - гибрид Почин, линия hlorina-З, а также две формы сорта Перве- 1ец - 1 и 2, отличающихся по жирнокислотному составу запасных липидов семян, со- леустойчивость которых неизвестна.

Отбор проб и анализ состава липидов производили согласно процедуре, описан- 5 ной в примере 1.

Кроме того, солеустойчивость указанных форм растений определяли по известному методу (Б.П, Строгонов. Физиология устойчивости растений к засолению. М., 0 1962). Растения выращивали в сосудах емкостью 20л, заполненных прокаленным песком, смоченным средой Гельригеля, взятой в трех вариантах; 1 - без добавления NaCI; 2-е Добавлением NaCI до 0,5%, 3 - с добав- 5 ление NaCI до 1%. Опыт проводился в 10- кратной повторное™.

Учетным показателем служила сухая масса и высота растений, Рассчитывали коэффициенты ингибирования роста: по сухой 0 массе (Ki) и высоте (Ка).

сухая масса растений на засоленном грунте

Ki------------------------ сухая масса растений на незасоленном грунте высота растений на засоленном грунте

5

К2

высота растений на незасоленном грунте Данные обрабатывали статистически.

0 Данные, представленные в табл. 2. свидетельствуют, что в условиях засоления грунта 1 %-ным раствором NaCI, соотношения кислоҐ С18:3/С16:0 и С18:3/С18:2 оказываются минимальными (2,80 и 1,20) и

5 солеустойчивой линии и максимальными у соленеустойчивого гибрида (6,36 и 5.48). Значения,этих величин, близкие к минимальному, обнаруживаются у сорта Первенец 1 (3,52 и 1,52) и средние значения у

0 сорта Первенец 2 (4,40 и 1,94).

Результаты, Полученные согласно предлагаемому способу, свидетельствуют о наличии высокой солеустойчивости у Первенца 1 и средней - у Первенца 2.

5 Такие же результаты получены в экспериментах, проведенных на указанных формах подсолнечника согласно известному методу: Первенец 1, как и контрольная соле- устойчивая линия, имеет высокие коэффи0 циенты подавления роста под влиянием засоления: Первенец 2 - средние, в то время как контрольный соленеустойчивый гибрид - низкие.

Следовательно, предлагаемый способ дает результаты, сопоставимые с известным (по Строгонову Б.П.. 1962), являясь в то же время более простым и удобным, позволяющим проводить большее количество анализов, т.е. более надежном.

Сравнительные испытаний указанных в примерах 1. и 2 форм подсолнечника ло известному способу 1 не проводились, т.к. в этом случае необходимо было выносить из отделенный сортоиспытательный участок громоздкую стационарную электроаппаратуру и обеспечить ее сетевое электропитание, т.е. преимущество заявляемого способа по сравнению с прототипом очевидно без испытаний. Поэтому солеустойчи- вость определяли другим известным способом (по Строганову Б.П., 1962), позволившим подтвердить выводы, полученные согласно предлагаемому методу.

Исходя изданных, приведенных в табл. 1 и 2, солеустойчивость подсолнечника можно оценивать как высокую, если соотношения кислот свободных полярных липидов листьев (С18:3/С16:0) 3,2, (С18:3/С18:2) 1,6; как среднюю, если 3,2 (С18:3/С16:0) 4,2; 1,6 (С18:3/С18:2) 5,0 и низкую, если (С18:3/С16:0)4,2, (С18:3/С18:2)5,0.

Использование предполагаемого способа определения солеустойчивости под0

солнечника обеспечизэет по сравнению с существующими способами следующие преимущества:

1, Надежность метода, обусловленная тем, что он позволяет анализировать большое количество проб и получать статистически достоверные результаты, а также тем, что имеется возможность выявлять солеустойчивость у тех форм подсолнечника, у которых она развивается только на более поздних возрастных стадиях.

2, Простота метода, определяемая возможностью анализировать растения, не подвер- гшиеся засолению и, следовательно, не .выращивать их специально для исследования солеустойчивости,

3. Удобство в работе, т.к. можно легко транспортировать отобранные в полевых условиях пробы для последующего их лабораторного анализа. (56) Авторское свидетельство СССР № 784832, кл. А 01 G 7/00,1979.

Таблица 1

3629

п; СЫоппа-3 R Ch orina-3 hi; Ch orina-5

Доверительные интервалы приведены для-уровня значимости Р 0,05

По известным данным (Ю,Д. Белецкий. Искусственные мутации хлоропластов у высших растений. Ростов-на-Донуг.Й989, с 80; Н.И. Шевякова, Солеустойчивость пластомных хлоро- фильных мутантов подсолнечни ка//Физиология растений, 1982, т, 29, с. 317-324).

Относительная ошискэ ii1 при уровне значимости Y n u.ut. л 1U.

Рассчитывались как. отношение соответствующего показателя роста (сухая масса или еысотз) е условиях заселения к значениям этого же пока.чзтоля в успориях незасоленного грунта.

Большие значэчия коэффициентов свидетельствуют о большей солеустойчивости.

Таблица 2

Формула изобретения

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОЛЕ- УСТОЙЧИВОСТИПОДСОЛНЕЧНИКА, включающий отбор пробы листьев растении и последующий их физиолого-биохи- лическмй анализ, отличающийся тем, что, с целью повышения надежности способа и его упрощения, отбор пробы проводят в возрасте 14-16 дней и старше, пробу помещают в ацетон, анализируют содержание линоленозой, линолевой и пальмитиновой кислот в экстрагированных ацетоном липидах, определяют соотношение линоленовой к линолевой или линоле- новой к пальмитиновой кислоте и к высокоустойчивым относят растения, у которых соотношение линоленовой к линолевой кислоте 1,6, среднеустойчивым - 1,6- 5,0 и низкоустойчивым - 5,0 или соотношение линоленовой к пальмитиновой соответственно 3,2, 3,2 - 4,2, 4,2,