СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИНСЕКТИЦИДНОГО ПРЕПАРАТА Советский патент 1971 года по МПК A01N63/04 

Известно несколько способов получения микробиологического инсектицидного препарата на основе гриба Metarrhizium anisopliae (Metch) Sor.

Известен снособ получения микробиологического инсектицидного преиарата на основе эндоспор гриба. Однако использование эндоспор, образуемых грибом в глубинных культурах, яе нашло широкого практического применения, иоскольку эидоспоры, являясь вегетативной формой размножения гриба, более чувствительны но сравнению с воздушными конидиями к воздействию неблагонриятных в 1ешних условий, что ограничивает возможность применения препарата, который требует специфических условий влажности; поэтому препарат применяют только в борьбе с некоторыми почвообитаюп,ими насекомыми, в частности термитами.

Известен также снособ получения микробиологического инсектицидного препарата иа основе воздушных конидий гриба Metarrliizium anisopliae, заключаюш,ийся в том, что воздушные конидии получают на поверхности жид-кой питательной среды в стерильных условиях в стационарной культуре. Выраш,иваиие гриба ведут на иивном сусле, которое обильно засевают конидиями. Гриб культивируют до массового образования воздушных конидий при температуре 25°С. Полученные воздушные

конндии в виде конидиальных пленок снимают с кзльтуральной жидкости, высушивают, перемалывают и исиользуют нреимущественно в чистом виде для инфицирования насекомых-вредителей.

Основными недостатками известного способа получения микробиологического инсектицидного препарата на основе конидий гриба Metarrihziurn anisopliae являются: низкая

иродуктивность, длительность процесса получеиия иренарата, высокая стоимость питательной среды, вероятность частых загрязнений питательной среды посторонними микроорганпзмамп, обусловленная медленным ростом

гриба, оказывающая отрнцательпое влпяние на продуктивность культивирования и вирулептность конидий.

Несовершенство известных способов иолучения микробиологического инсектицидного

препарата на основе гриба Metarriiizium anisopliae, несмотря на высокую иатогеиность его для многих вредных насекомых (около 75 видов) и важную роль в ограничении численности природных популяций некоторых из

них, препятствует оргапизации массового производства и широкому использованию в практике зашиты растений этого патогена.

Согласно предлагаемому изобретению, эта цель достигается тем, что, в отличие от известного способа, грпб сначала выращивают в глубинной культуре на жидкой органической питательной среде в стерильных условиях, а затем полученную жидкую культуру грнба разливают в плоскне сосуды н в нестерильных условиях получают конидиальную нленку, которую высушивают, перемалывают и смешнвают с биологически ннертным иаполнителем.

Культивнрование гриба ведут в кукурузиопаточной среде (смесь кукурузного экстракта и кормовой патоки) с нейтральным исходным рН, содержащей 55-60 мг % аминного азота и 2500-2700 мг % сахара. Такое содержание основных нитательных веществ позволяет получать достаточное количество мицелиальиой массы (13-15 г/л) в глубинной культуре и обеспечивает, интенсивное конидиеобразование впериод поверхностного образования конидий.

Засев питательной среды производят коиидиальной суснензией гриба из расчета 9 - 25 млрд/уг. Конидиальную суспензию предварительно подвергают термической обработке в течение 40-50 час нри температуре О-БС, что позволяет при низкой густоте засева получать однородную по развитию мицелиальную массу при глубинном выращивании и равномерную кониднальную пленку в период поверхностного культнвирования.

Глубинное выращивание гриба проводят ири температуре 24-26°С с принудительпой аэрацией (1 -1,5 объема воздуха на 1 объем аэрируемой среды). При разливе культуры гриба устанавливают температуру 20-22С с последующим повышеннем ее до 27-29 С для стимуляцни процесса конидиеобразовання.

Предлагаемый способ получения микробиологического инсектицидного нрепарата апробирован в лабораторных условиях (приводятся результаты этих пспытаний).

Пример. Культивирование гриба вели в среде, представляющей собой смесь кукурузного экстракта (1,9%) и кормовой патоки (6,2%), содержащей 57,5 мк % аминиого азота и 2683 мг % сахара. Исходное рН среды-6,93.

Питательную среду заливали в ферментер, стерилизовали ее при температуре 120°С в течение 50 мин н засевали конидиальной сусиензией гриба, предварительно отн1уттелироваиной в течение час и выдержанной нри температуре в течение 45 час. Густота засева была 9 млрд. конидий на 1 л среды.

Глубинное выращивание гриба вели при температуре и непрерывной аэрации- 1,5 л стерильного воздуха иа 1 л аэрируемой среды, добавляя по мере вспенивания питательной среды растительное масло, общий расход которого составил 0,4% от объема среды. В этот период вели обычный микроскопический контроль чнстоты культуры и стенени развития ее. Через 60 час после засева заканчивали глубинное выращивание, при этом количество мицелиальной массы в культуральной жидкости достигало 15,5 г/л (воздуш-восухой вес).

Полученную жидкую культуру гриба разливали в иротивни слоем 0,75 см поддерживая температуру до образования сплошной белой плепки и повышая ее до 28С. Через 140 час после розлнва, когда заканчивается

нроцесс конидиеобразования, конидиальную пленку снимали с культуральной жидкости, высушивали при температуре 35°С, определяли титр (количество конидий в 1 г), размалывали в шаровой мельнице, смешивая с каолином из расчета содержания в 1 г препарата 1,5 Млрд. воздушных конидий гриба.

Глубинное выращнвание гриба позволяет за сравнительно короткий срок (50-60 час) получать значительное количество мицелиальной массы, сократить, благодаря этому, продолжительность новерхностного получения конидий с 330-360 час до 120-150 час и избежать ири этом губительного влияния посторонней микрофлоры, поскольку развитая

культура гриба обладает сильным антимикробиым потенциалом, быстрое образование грибной пленки нрепятствует проникновению в культуральную жидкость микробов, а дефицит аминного азота в культуральной

жидкости также нрепятствует накоплению посторонних микроорганизмов. Добавление биологически инертного наполнителя (каолина) позволяет иолучать легко смачивающийся порошковидный стандартный препарат. Технико-экономические ноказатели предлагаемого способа нриведены в таблице.

Сравнительные технико-экономические показатели известного и предлагаемого способов получения микробиологического инсектицидного препарата

Использование предлагаемого изобретения при получении микробиологического инсектицидного препарата позволяет повысить выход конидий в 2 раза, производительность-в 4 раза, сократить продолжительность нроцесса в Ё 20-30 раз и расход конидий для обработки 1 га-в 25-40 раз. Все это дает возможность использовать предлагаемый способ получения микробиологического ипсектицидного препарата для массового производства его в заводских условиях. Предмет изобретения 1. Способ получения микробиологического инсектицидного препарата, включающий выращивание гриба Metarrhizium anisopliae (Metch) Sor. на жидкой органической нитательной среде, получение конидий с поверхности этой среды и смешение их с биологически пнертиым наполнителем, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода готового препарата и снижения его стоимости, гриб предварительно выращивают в глубинной культуре на этой же среде в стерильных условиях с принудительной аэрацией. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что засев питательной среды производят конидиальной суспензией гриба, выдержанной при температуре в течение 40-50 час. 3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что в качестве питательной среды берут смесь кукурузного экстракта и кормовой патоки.