ПАТЕНТНО-ТШИ'^ЕШБИБЛИОТЕКАА. П. Давыдов Советский патент 1972 года по МПК G01N1/30 G01N21/91 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения изображения структуры легкого для морфометрического анализа.

Известен способ получения изображения структуры легкого для морфометрического анализа путем раздувания легкого до определенного объема, фиксации, микротомирования и кинофотографирования.

Однако такой способ нельзя использовать в морфометрии, например, лри исследовании патологии в легких, особенно с очаговыми изменениями.

В предлагаемом способе с целью исследования легкого на случайно и систематически отобранных образцах с получением двухмерных изображений структуры легкого, а также получения трехмерной реконструкции строения легкого фиксацию препарата осуществляют путем его сублимационной сушки с последующим введением в воздухоносные пути контрастной массы и фотографирования верхней поверхности среза.

Способ получения изображения структуры легкого для морфометрического анализа состоит в том, что исследуемое легкое, раздутое до определенной величины, замораживают твердой углекислотой в теплоизоляционной камере до температуры (-18) - (-20) °С, затем переносят в вакуумную камеру и сущат

при ком)атной температуре в течение 36 час, а после сушки переносят в камеру для фиксирования в парах формалина и выдерживают в течение 6-8 час. Затем производят отбор образцов.

Образцы, предназначенные для гистологического исследования, погружают в 10%-ный раствор формалина, а образцы, отобранные для морфометрии, погружают в 1%-ный раствор метиленовой синьки. Окраска длится 1 сутки. Окрашенные кусочки ткани подвергают сушке. После этого воздухосодержащие структуры легочной ткани заполняются контрастной массой белого цвета. В опытах использовалась масса, состоящая из смолы - 1 ч., растворителя-2 ч., отвердителя - 0,1 ч. от общего объема растворителя и смолы, тонко измельченной окиси цинка - 0,5 г на 1 см смеси.

Из массы предварительно удаляют воздух, влагу и летучие жидкости. Для этого помещают массу под разрежение.

Из высушенных и окрашенных образцов вырезают кусочки примерно -«-и, подклеивают к металлической пластинке и подвешивают на устройство для сбрасывания, а массу ставят иод пластину и помещают в вакуумную камеру. При разрел ении 1-0,5 мм рт. ст. препараты сбрасывают в массу, после

до атмосферного. Заполненные контрастной массой кулачки заделывают в блок как для гистологических исследований.

Для срезов толщиной 8-2 мк используют контрастную массу, которая содержит парафиново-восковую смесь в соотношении 1:1, но для этого в вакуумную камеру помещают нагреватель под массой.

После отвердения блок помещают в микротом и делают срезы определенной толщины. Микроскопом МБН фотографируют верхнюю поверхность препарата после каждого среза; подача препарата должна быть перпендикулярна плоскости среза. Наводку на резкость производят в начале работы, фотографируемую поверхность все время оставляют в фокусе. Экспозиция не превыщает 5 сек. Весь цикл срез--перевод кадра - экспозиция занимает 12-17 сек, т. е. за 1 час работы получают снимки с 250 срезов.

Расчет снимков ведут с проекции полученного на пленке изображения, для этого необходимо знать масштаб изображения. При расчетах пользуются математическим аппаратом Вейбеля или методом реконструкции. Пользуясь известными формулами, можно рассчитать углы отхождения сосудов, бронхов, бронхиол и т. д., можно также рассчитать соответствующие площади и объем, пользуясь формулой Симпсона.

При больщом количестве изображений срезов из-за трудности просмотра и выбора отдельных участков легкого для исследования используют способ кинофотографии легкого: каждый срез фотографируют специально встроенной кинокамерой; толщина среза должна быть не более 2-4 мк. При проекции через кинопроектор с частотой кадров 8- 16 в сек пространственное строение легкого хорощо визуализируется. Каждый кадр кинограммы можно использовать для морфометрического анализа по любому из описанных способов.

Предмет изобретения

Способ получения изображения структуры легкого для морфометрического анализа путем раздувания легкого до определенного объема, фиксации в парах формалина, микротомирования и кинофотографирования, отличающийся тем, что, с целью исследования легкого на случайно и систематически отобранных образцах с получением двухмерных изображений структуры легкого, а также

трехмерной реконструкции строения легкого, фиксацию препарата до обработки парами формалина осуществляют путем его сублимационной сущки с последующим введением в воздухоносные пути контрастной массы и фотографированием поверхности среза.