Способ диагностики менингококкового менингита Советский патент 1980 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к области медицины и может аыть использовано в клинической практике для улучшения диагностики менингитов. Известен способ диагностики менингококкового менингита путем биохимического анализа биологического материала 1.. Однако известный способ является трудоемким и травматичным. Цель изобретения - снижение трав-матичности и упрощение способа. Эта цель достигается тем, что в лейкоцитах периферической крови опре деляют активность фосфогексоизомеразы и концентрацию пировиногргщной кислоты, и при уменьшении активности фермента на 40-50% и увеличении концентрации пировиноградной кислоты на 200-300% относительно нормы ставят,, диагноз менингококкового менингита. Способ осуществляют следующим образом. Больному путем клинического обсле дования при выявлении менингеального синдрома (ригидность млшц затылка, положительные симптокы Кернига, Бруд зинского, частая рвота, резкая голов 1-ая боль, гипертермия) ставят диагно менингита. Затем с целью определения происхождения менингита проводят биохимический анализ крови, исследуя активность фосфогексоизомеразы и уровень пировиноградной кислоты. Для этого в центрифужную пробирку с каплей гепарина добавляют 2 мл венозной крови больного. Кровь с гепарином центрифугируют при 1000 об/мин в течение 15 мин для получения плаз1 ы, содержащей лейкоциты. Плазму отбирают пастеровской пипеткой, помещают в центрифужную пробирку и для удаления примеси эритроцитов смешивают с 3 мл 0,008%-ного раствора хлористого аммония, оставляют на 5 мин, затем центрифугируют 3 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость, содержащую гемолизированные эритроциты,отбрасывают.Осадок лейкоцитов несколько раз проливают (2 мл) холодным физиологическим раствором, после каждого прошвания центрифугируют при 1000 об/мин в течение 90 с. Полученный осадок лейкоцитов отбирают мккропипеткой для сравнения активности фосфогексоизомеразы в объеме 0,05 мл. Рекомендуется для проверки чистоты полученной фракции лейкоцитов небольшой объем лейкоцитов микроскопировать в камере Горяева.

Отобранные 0,05 мл лейкоцитов помещают в инкубационную среду, содержащую Луферно-субстратную смесь (6,3 мл .веронал ацетатного буфера, рН 7,4, 38 мг глюкоэо-6-фосфата), инкубируют в термостате 30 мин при 37°С. Параллельно отбирают еще 0,05 мл лейкоцитов и помещают в контрольную пробу, имеющую тот же состав, но не. инкубируют и сразу осаждают белки добавлением 1-2 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты для прекращения ферментативной реакции. Об активности фермента судят по приросту образующегося в результате реакции фруктозо-6-фосфата в сравнении с контрольной пробой. Пробы колориметрируют на ФЭК-М, результаты рассчитывают по калибровочной кривой. I Активность фосфогексоизомеразы донорских лейкоцитов принимают за 100%.

Содержание пировиноградной кислоты в лейкоцитах определяют следующим образом.

0,1 мл лейкоцитов помещают в пробирку, содержащую О,7 мл дистиллированной воды и 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты для осаждения белков. После центрифугирования 1 мл надосадочной жидкости инкубируют в термостате при 37°С в течение 20 мин с 0,4 мл 2,4-динитрофенилгидразина. Для получения окрашивания пропорционального содержанию пировиноградной кислоты, добавляют 1 мл 12%-ногораствора едкого натра. Затем, колориметрируют на ФЭК, а количество пировиноградной кислоты рассчитывают по калибровочной кривой. Результаты выражают в молях на 10 лейкоцитов.

Понижение активности фосфогексоизомеразы и повышение количества пировиноградной кислоты является признаком менингита менингококковой этиологии.

П р и м е.р 1.Больная Л. поступила в отделение на 2-й день болезни с подозрением на менингит. Началозаболевания было острое, температура , имелись частые рвоты, положительные менингеальные симптомы. На основании перечисленных клинических признаков был поставлен диагноз менингита. С целью выявления происхож. дения менингита проведено биохимическое исследование лейкоцитов периферической крови. В результате установлено, что активность фосфогексоизомеразы оказалась ниже на 50%, уровень пировиногралной кислоты повысился на 300%. В сопоставлении с клиническими признаками это позволило . поставить окончательный диагноз менигококкового менингита. Ребенку было назначено антибактериальное и патогенетическое лечение. В связи с тем, что у больной определялись признаки повышенного внутричерепного давления с лечебной целью была проведена люмбальная пункция. Ликворологические данные (нейтрофильный плеоцитоз 11520/3, 85% нейтофилов), результаты бактериологического исследования ликвора подтвердили правильность диагноза.

Под влиянием проводимого лечения наступило клиническое выздоровление. Повторное обследование активности фосфогексоизомеразы (0,0017 нМоль/10 и,уровня пировиноградной кислоты (6,0054 нМоль/10) на 18-й день болезни показали нормальные значения этих показателей в период выписки из стационара.

Способ испытан на 55-ти клинических больных.

Способ Диагностики проводили путем исследования в лейкоцитах венозной крови больных менингококковым менингитом в 1-2 сутки гиспитализа.ции. Сравнение результатов исследования проводились в группах здоровых детей и больных менингококковым менингитом. Кровь практически здоровых лиц была взята у 25-ти детей. В двух группах больных менингококковым менингитом и практически здоровых дете в лейкоцитах крови, полученных обычным способом, определяли активность фосфогексоизомеразы и уровень пировиноградной кислоты.

Результаты определения активности фосфогексоизомеразы и уровня пировиноградной кислоты в лейкоцитах у больных менингококковым менингитом и у доноров представлены- в таблице.

Как видно из полученных данных, у больных менингококковым менингитом регистрировалось снижение активности фосфогексоизомеразы на 40-50%, увеличение уровня пировиноградной кислоты на 200-300%, что при сопоставлении с клиническими данными дает основание подтвердить клинический диагноз менингококковой инфекции.

Отсутствие изменений активности фосфогексоизомеразы и пировиноградной кислоты при наличии клинических признаков менингита свидетельствует о вирусном менингите.

Предлагаемый способ позволяет установить диагноз менингококкового менингита в ранние сроки заболевания не связан с проведением люмбальной пункции, имеет высокую степень достоверности, доступен для выполнения в условиях стационара и участкового обслуживания на догоспитальном этапе.

Фосфогексоизомераза:

нМоль/Ю лейкоцитов

%

Снижение активности, % от нормы

Пировиноградная кислота:

нМоль/Ю

%

Повышение концентрации, % от нормы

Примечание: п - количество детей в качсдой группе. Контрольную группу составляли практически здоровые дети - 25 человек.

Формула изобретения

Способ диагностики менингококково го менингита путем биохимического анализа биологического материала, о тличающийся тем, что,с целью снижения травматичности и упрощения способа, в лейкоцитах периферической крови определяют активность фосфогексоизомеразы и концентрацию

п 55

п 2 О 1,3-1,4 ,65-0,78 100-154 50-60

40-50

п 20

п 55 0,05-0,06 0,18-0,24

120-100

300-400

20-0

200-300

пировиноградной кислоты, и при уменьшении активности фермента на 40-50% и увеличении концентрации пировиноградной кислоты на 200-300% относи тельно нормы ставят диагноз менин-

.гококкового менингита.

Источники информгщии, принятые во внимание при экспертизе 1. Меиингококковая инфекция. М., 1976, с. 163.