Способ исследования параметров роста колонии микроорганизмов Советский патент 1980 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к микробиологии.

Известен способ исслелования параметров роста колоний микроорганизмов в установке, содержащей фоторе- 5 гистратор, сопряженную с ним оптическую систему, включающую объектив и фотоумножитель, предметный столик для размещения на нем колоний микроорганизмов, предусматривающий осве- tO цение колоний световьам потоком в видимом диапазоне длин волн.

При осуществлении известного способа исследуется изображение мик- |5 роорганизмов на фотопленке с помощью денситомерта с короткофокусным объективом без щелевой диафрагмы, регистрирующего оптическую плотность фотографического изображения колоний. 2(

Колонии микроорганизмов являются гетерогенными системами. Гетерогенность проявляется в неровностях края колец, неодинаковой ширины колец и разной высоте их в одной и той же 25 колонии (в разных ее участках) l.

Однако в связи с этим -неизбежны значительные ошибки в процессе измерения величин оптической плотности, кроме того, введение денситометрии, JQ

,как промежуточного процесса, снижает агочность измерения.

Цель изобретения - повышение точности.

Поставленная цель достигается тем, что в способе исследования параметры роста определяют по коэффициенту отражения светового потока от кологНИИ, при этом в оптическую схем: вводят диафрагму с отверстием в виде изогнутой щели, помещенную между г объективом и фотоумножителем оптической системы, а колонию равномерно перемещают в плоскости, перпендику.пярной оси оптической система.

На чертеже изображена оптическая схема установки для осуществления способа исследования параметров роста колоний микроорганизмов.

Способ осуществляется следуюищм образом.

Перед началом фотометрирования подбирается оптимальная скорость движения предметного столика 1 с исследуемым объектом, интенсивность освещения объекта, ширина и длина щели диафрагмы, что позволяет получить максимальную разрешающую способность устройства. После этого на предметный столик 1 помещают чашку 2 Петри с исследуемой колонией актиномицета, включают осветитель 3 и приводят в движение с помощью привода 4 - столик 1 микроскопа. Отраженный от колонии свет, проходя через объектив 5, диафрагму б, призму 7, попадает иа фотоумножитель 8 и фоторегистратор 9. На диаграмме фоторегнстратора 9 отображается характер роста колоний м кроорганизмов, например зонообразугощего актиномицета, где пик соответствует отдельному кольцу колонии.

Обрабатывая полученную диаграмму, можно определить акие параметры колонии зонообразукщих микроорганизмов, как диаметр колонии, диаметр и гшо ее центра,. ширину и площадь спороносных колец, а также расстояние «вжду их вершинами.

Перечисленные параметры колонии на диаграмме регистратора и йэмеряются циркулем-измерителем и линейкой {гари линейных измерениях) или планиметром (при измерении площадей }« Для перевода в реальные размеры колонии измеренные на ленте линейные параметры (при объективе 8) умножаются на коэффициент пересчета, равный 0,0247, где К NI/fij, где N расстояние меядва- двумя точками на объекте, а Nj - между двумя соответствующими точками на ленте самописца,

Диаметр колонии определяют измерением расстояния между двугля противоположными точками на внешних краях наружного кольца.

Диаметр центра колонии определяют измерением расстояния между 1вумя противоположными точками на первкк от центра глубоких минимумах диаграммы. Ii&tpHHy спороносных KOfreij определяют измерением расстояния между точкой начала подъема кривой и соот™ ветстаукввей точкой после прохождения кривой через максимум.

Расстоянне между вершинами колец определяют измерением расстояния между точками максимумов двух соседних колец.

Площадь центра колонии определяют измерением пл адади, ограниченной сверху кривой диаграк8«л, а снизу нулевой линией, соответствукнцей величине сигнала от участка культуральной среды без колонии и ограниченной с боков перпендикулярами, восстаковленными с

кулезой линии к TO4KaN,используемым при опрелелевии диаметра центра колонии . .

Площадь спороносных колец определяют измерением площади под кривой диагра Ф1, ограниченной снизу нулевой линией, соответствующей величине сигнала от участка культуральной среды без колонии, а с боков ограниченной перпендикулярами, восстановленными с нулевой линии к точкам, используемым при определении ширины колец.

Таким образом, способ обеспечивает прямые измерения колоний микроорганизмов по интенсивности отраженного, света с повышенной точностью, благодаря введению в оптическую систему диафрагмы, обеспечивающей получение интегрированной информации с больше площади кольца колоний и длиннофокусного объектива, обеспечивающего достаточную глубину резкости при равномерном перемещении колоний в радиальном направлении в плоскости, перпендикулярной оси оптической системы.

Формула изобретения

Способ исследования параметров роста колоний микроорганизмов в установке, содержащей фоторегистратор, сопряженную с ним оптическую iCHCTef.iy, включающую объектив и фотоумножитель, предметный столик для размещения на нем колоний микроорганизмов, предусматривающий освещение колоний световым потоком в видимом диапазоне длин волн, о т л ичающийся тем, что, с целью повышения точности, параметры роста определя от по коэффициенту отражения светового потока от колонии, при этом S оптическую схему вводят диафрагму ,с отверстием в виде изогнутой щели, помещенную между, объективоми фотоумножителем оптической системы, а колоняю равномерно перемещают в плоскости, перпендикулярной оси оптической системы.

Источники информации, принятьге во внимание при экспертизе

1.,Па.наян Г.В. Разработка аппаратурь: и методов микроспектрофотометрки в проходящем и отраженном свете. Автореф. на соиск. учен, степени канд. техн. наук. Л-., 1974.