Способ получения средства,оказывающего нормализующее влияние на процессы тканевого обмена и обладающего антитоксическим и антинекротическим действием Советский патент 1982 года по МПК A61K35/37 

1

Изобретение относится к медицине, а именно получению тканевых органотерапевтических препаратов, которые могут быть использованы в качестве лечебных средств.

Цель изобретения - получение нового средства направленного действия.

Цель достигается тем, что способ получения средства, оказывающего нормализующее влияние на процессы тканевого обмена и обладающего антисептическим и антинекротическим действием, заключающийся в том,что измельченные свиные почки гомогенизируют, разводят физиологическим раствором при соотношении сырья к раствору 3:, обрабатывают 0,5%-ным раствором щелочи, устанавливают рН 7,8 - 8,2, температуру 37-38°С, затем добавляют смесь, содержащую, вес.%:

Поджелудочную

железу8-12

Селенисто-кислый

натрий .0,009 - 0,03

Сульфит натрия 0,9 - 1, Метионин2,3 3,1

Нипагин0,5-0,8

и проводят ферментолиз в течение 5-6 ч при 37-38°С, рН 8,0-8,5, по,jj лученный гидролизат затем диализи руют и переосаждают в ацетоне.

.Пример . Свежезамороженные свиные почки в количестве 1 кг из- , мельчают на мясорубке и повторно fj замораживают на противнях в морозильной камере при (-15 (-20°Ci где они могут сохраняться до использования. Затем замороженный фарш повторно измельчают на мясорубке для получения 20 гомогенной массы. Измельченный материал загружают в реактор с паровым обогревом и механической мешалкой и заливают 1%-ным раствором NaCI для создания оптимальных биохимических

условий в соотношении 3 ч сырья к 1 ч.раствора. При постоянном перемешивании 0, раствором NaOH устанавливают рН реакционной смеси 7,88,2 и температуру смеси . Одновременно в реакционную смесь вносят все компоненты, вес.%:

Поджелудочная

8,0 - 12,0

железа

Селенисто-кислый

0,03

0,009

натрий 1,

Сульфит натрия 0,9 2,3 3,1

Метионин 0,8 0,5

Нипагин

Физиологический

28,0 - 32,0

раствор

Ферментолиз при установленной температуре и постоянном перемешивании проводят в течение 5 ч, время от времени проверяя рН и при необходимости доводя его снова раствором NaOH до рН 8,0-8,5. Затем смесь подогревают до 85-90 0, дают остыть до комнатной температуры и сливают в диализатор, состоящий из тонкой целофановой трубки.

Диализ противаодопроводной воды с t 1 -15°С проводят в течение kk ч до установления в лизате уд.веса 1.34. С помощью диализа удаляют неорганический селен. После диализа лизат разбавляют объемами ацетона и оставляют на отстой на 2 ч Затем отстоявшуюся жидкость отделяют декантацией. Осадок отфуговывают и высушивают на воронке Бюхнера ацетоном и эфиром. Окончательное досушивание проводят в сушильном шкафу при температуре не выше . Высушенный ПОРОШОК дополнительно измельчают и просеивают, пробу сдают на определение в ней содержания органически связанного селена, которое проводят флуорометрическим методом Ваткинсона, в модификации Назаренко. Содержание селена в исследуемом препарате 0,,05 мкг/г. Выход порошка с 1 кг свиных помек 100 г.

Препарат представляет собой порошок, светло-коричневого цвета со специфическим запахом, плохо растворим в воде, не растворим в спирте 50-96% концентрации, хлороформе, ацетоне и петролейной эфире.

Ф.армакологи еские исследования лредлагаемого препарата проводили следующим образом.

Опыты проводились на беспородных белых пабораторных крысах весом

150-180 г. Животные были разбиты на 5 групп: в 1-А группах было по 12 крыс, в 5 группе - 20 крыс. Для сравнения лечебного эффекта при профилактике и лечении токсического гепатита экспериментально вызываемого четыреххлористым углеродом, брали по два селеносодержащих препарата: селенит натрия и предлагаемый авторами тканевый препарат, содержащий органический связанный селен.

Крысы 1 группы ( интактная группа) находилась в течение 21 дня на обычной лабораторной диете.

Крысам И группы через день подкожно вводили 1 раз в день 40%-ный мягтляный раствор четыреххлористого углерода из расчета 0,2 f-ui на 100 г веса животного. Всего было 6 введений. На 5 день после последней инъеции tO -Horo масляного раствора было забито 6 крыс, -а на 7 день - оставшиеся крысы.

Крысам Ш группы вводили 40%-ный масляный раствор четыреххлористого углерода по той же схеме, что и кры.сам М группы.Но одновременно с кормо животным давали тканевый препарат, содержащий органически связанный селен из расчета 1 ,5 г препарата на 100 г корма. Содержание селена в испытуемом препарате 64 мкг/г. После 6 инъекций О -ного масляного раствора четыреххлористого углерода животным продолжали давать корм с испытуемым препаратом до окончания опыта. Затем на 5 и 7 дни после ежедневной инъекции забивали по 6 животных.

Крысам группы вводили масляный раствор четыреххлористого углерода по той же-схеме, что и крысам О группы, но одновременно с кормом животным давали селенит натрия, в количестве адекватном по содержанию селена до 21 дня. На 5 и 7 дни после последней инъекции четыреххлористого углерода забивали по 6 животных.

Крысам группы ежедневно в течение 1 мес давали предлагаемый тканевый препарат в удвоенной дозе из расчета 3 г препарата на 100 г диеты. Затем на 30 день животных декапитировали.

Во всех группах определяли выживаемость,, печеночный индекс ПИ (вес печени из расчета на 100 г живого веса) и содержание сульфгидрильных групп (исключая У группу в печени методом амперометрического титрования по Кедровой. Расчет вели в микромолях на 100 г печени. Кроме того, у животных всех груп определяли сравнительную патоморфол гическую картину печени: наличие некротических очагов, реакции клеток печени на гистологические краси тели ( базофилия , эозинофилия, стадии пикноза ядер, вакуоли-зация. Полученные цифровые значения обр батывали статистически и исчисляли в процентах к исходной фоновой вели чине этих показателей у интактных животных, принятых на- 100%. Проведенные исследования показал что тканевый препарат, содержащий органически связанный селен, выдерживает развитие воспалительного про цесса в печени, экспериментально вызванного четыреххлористым углеродом, является биологически более активным, чем селенит натрия. Препа рат не токсичен. Использование предлагаемого спос ба дает возможность получать биологически активный тканевый препарат, содержащий органически связаный селен для профилактики и лечения гепа тита, препарат предотвращает развитие токсических и некротических 8 процессов. Предлагаемый способ предусматривает использование малоценных отходов мясной промышленности - свиных почек. Формула изобретения Способ получения средства,оказывающего нормализующее влияние на процессы тканевого обмена и обладающего антитоксическим и антинекротическим действием, заключающийся в том, что измельченные свиные почки гомогенизируют, разводят физиологическим раствором при соотношении сырья к раствору 3:1 обрабатывают 0, раствором щелочи, уста1навливая рН 7,8-8,2,температуру 37-38 С, затем добавляют смесь, содержащую, вес.: Поджелудочная железа8-12 Селенисто-кислый 0,009 -0,03 натрий 0,9 -1, Сульфит натрия 2,3 -3,1 Метионин 0,5 -0,8 Нипагин и проводят ферментолиз в течение 5-6 ч при 37-38°С, рН 8,0-8,5, полученный гидролизат затем диализируют и переосаждают в ацетоне.